第9章_甾体激素类药物的分析

null第十章第十章甾体激素类药物的分析null基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819null分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素null肾上腺皮质激素氢化可的松null肾上腺皮质激素醋酸地塞米松null雄性激素丙酸睾酮null蛋白同化激素苯丙酸诺龙null孕激素黄体酮null雌激素炔雌醇null第一节 结构与性质 1. 肾上腺皮质激素null2. 雄性激素及蛋白同化激素null3. 孕激素null4. 雌激素null第二节 鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）nullnull(二) 官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐 OHˉ1 C17 – α – 醇酮基还原性A. 呈色反应null肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性 酒石酸铜B. 沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银null甾酮类激素药物呈色羰基试剂2. C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼null睾酮null黄体酮null具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳 间二硝基酚 芳香醛3. 甲酮基null黄体酮蓝紫色亚硝基铁 氰化纳其他甾体淡橙色 不显色null黄体酮null蓝紫色null有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ4. 有机卤素茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓ 呈色 null茜素氟蓝蓝紫色F-null雌激素类药物红色偶 氮染料重氮苯磺酸5. 酚羟基null含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6. 乙炔基null炔雌醇白null (三) 制备衍生物测定m.p.nullnull香（四）水解产物的反应null特臭特臭null△４-3-酮 240nm苯环 280nm（五） UV法nullnullnull（六） IR法3750～3300cm-1null醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17 –OH C20 –酮基、 C11 –酮基、醋酸酯null1630cm-13420cm-亚甲基、角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1 null结构特征：△4–3–酮、C17 –OH C17–乙炔基炔诺酮null1650cm-13300cm-3270cm-11615cm-1null结构特征：酚羟基、C17 –OH C17 –乙炔基炔雌醇null1505cm-13505cm-3300cm-11590cm-13610cm-酚羟基醇羟基1615cm-1 苯环的骨架振动null（七） TLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。null炔诺酮 TLC图null（八） HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法 要求在含量测定项下的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。null第三节 特殊杂质检查（一）其他甾体定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”nullLi/NH3 C2H5OH弱酸雌二醇－3－甲醚苯丙酸诺龙的合成路线IIInull强酸苯丙酰氯HClIIInull 特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似2. 来源 原料、中间体、异构体、降解产物null4. 方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）null（1）TLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色null醋酸氟轻松 检查 其他甾体 取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 : 3）为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试null液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。12null特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。null（2）HPLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积null 取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每1ml含2mg的溶液（1）与每1ml含0.04mg的溶液（2）,用含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取10μl注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程.再分别取溶液（1）醋酸甲地孕酮 检查 其他甾体null 和溶液（2）各10μl，进样。记录至主成分峰保留时间的2倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过4个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的1/2和3/4。供试溶液：溶液（1）2mg/ml对照溶液：溶液（2）0.04mg/mlnull特点： （1）需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量； null（二）游离磷酸地塞米松磷酸钠 氢化可的松磷酸钠 倍他米松磷酸钠 氢化泼尼松磷酸钠对照品法null原理：方法：检查 游离磷酸检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠 精密称取本品20mg，置25ml量瓶 中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫 酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶 液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放 置30～50分钟，照分光光度法，在740 nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法 处理的吸收度比较，不得更大。（对照液KH2PO4 0.0035mg/ml）（对照液KH2PO4 0.0035mg/ml）null（三）甲醇和丙酮（灵敏度法）甲醇 不得出峰 限= 3.1ng丙酮 ≤5.0% 内标法 + 校正因子GC法null地塞米松磷酸钠检查 甲醇和丙酮 精密称取本品0.16g，置10ml量瓶 中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至 刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10 μl(≈7.9mg)与丙酮100μl(≈79mg)置 100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml， 加水至刻度，作为对照液。照气相色谱 法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得 出现甲醇峰。null（四）雌酮原理 Zimmermann反应高纯度null炔雌醇null来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理方法null醋酸氟轻松 检查 硒 取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml烧杯中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液各1ml分别用氨试液调节pH值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水null 少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。 规定 A供＜A对。nullnull第四节 含量测定（一）UV法△４-3-酮 240nm（±）肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯环 280nm（±）雌激素null（二）反应分光光度法1. 适用于非分光光度活性药物 2. 使待测组分光谱位移，避免干扰 3. 增加测定灵敏度 4. 增加选择性弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应null 肾上腺皮质激素类C17 -α－醇酮基强还原性1. 原理四氮唑比色法nullOH-分子重排null三苯甲瓒↓深红null蓝四氮唑（BT）null双甲瓒（暗蓝）null2. 方法ChP TTC（RT） BP TTC（RT） USP BT对照品法null 醋酸泼尼松龙软膏 含量测定 对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品 20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振 摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀,即得。 供试液：精密称取本品4g（约相当于醋 酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水 乙醇约30ml，置水浴上加热,充分搅拌， 使醋酸泼尼松龙溶解,再置冰浴中冷却， 滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取null三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀 释至刻度，摇匀，即得。 测定法：精密量取上述溶液各1ml，分 别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙 醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml,摇匀， 再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml， 摇匀，在25℃暗处放置40～50分钟，照 分光光度法，在485nm的波长处分别测 定吸收度，计算，即得。操作应避光。null3. 讨论（1） 基团对反应速度的影响C11= O＞ C11－OHC21－OH＞ C21-酯C16无论何种取代基ν↓null（2） 溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10% 含水30%→几无反应— 无水乙醇null（3） O2与光线的影响反应过程 反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、 快速、充N2null（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75） 条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：null（5） 温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑→%↓null4. 特点： 缺点 影响因素太多 优点 测定结果能指示药品 的稳定性（氧化及降 解产物无此反应）null肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素C3－酮基1. 原理null异烟腙（黄色）null2. 方法对照品法nullnullnull3.讨论反应速度（1）C3= O ＞ C17= O 、 C20= O C11= O 不反应反应专属性 C3－酮基null（2）溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇 无水乙醇null（3）水分、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不挥发溶剂、不吸收水分时→ O2与光线无影响null酸、异烟肼的量(3)盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1样品 : 异烟肼 = 1 : 8 →ν↑ t℃ ↑ → ν↑null1. 原理雌激素nullnull雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515null[(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚]Iron-phenol Reagentnull2. 特点： 优点 较高的灵敏度 具有一定的选择性 缺点 非化学计量反应 反应应控制条件、 注意平行原则nullUSP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）特点 用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）第九章 复习内容第九章 复习内容1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构 特征与分析方法的关系 2、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团 的呈色反应，了解其他鉴别方法 3、掌握本类药物中其他甾体的检查方 法，了解其他特殊杂质的检查null4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法 的原理、方法及测定条件。了解 UV法、Kober反应比色法及HPLC 法在其含量测定中的应用null112．甾体激素类药物的结构中能和 四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -α-醇酮基 E. 酮基null 用异烟肼比色法测定甾体激素药物 含量时，其溶液的环境是 A．强酸性 B．中性 C．强碱性 D．弱碱性 E．以上都不对null问31～35 A．维生素B1 B．醋酸地塞米松 C．两者皆是 D．两者皆不是 31. 异烟肼比色法 32. 硫色素反应 33. 紫外分光光度法 34. 羟肟酸铁反应 35. 绿奎宁（Thaciaquin）反应BACDDnull 可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A．氨制硝酸银 B．异烟肼 C．红四氮唑 D．硫酸 E．重氮苯磺酸null75．可用于甾体激体类药物的测定方 法有 A．高效液相色谱法 B．四氮唑盐法 C．紫外分光光度法 D．异烟肼比色法 E．Kober反应比色法null 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰 紫色的药物是 A．雌二醇 B．黄体酮 C．醋酸可的松 D．苯丙酸诺龙 E．以上都不对null各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是 A. 它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C. 由于“其它甾体”的存在，色谱法 可消除它们的干扰 D. 色谱法比较简单，精密度好 E. 色谱法准确度优于滴定分析法null113．异烟肼比色法测定甾体激素类 药物时，药物的呈色基团是 A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D. 炔基 E. 甾体母核null99：90. 四氮唑比色法可用于下列哪 个药物的含量测定 A. 可的松 B. 睾丸素 C. 雌二醇 D. 炔雌醇 E. 黄体酮null95：[116—120]可适用的药物： A. 可的松 B. 雌二醇 C. 两者均可 D. 两者均不可 116．亚硝酸钠滴定法 117．高效液相色谱法 118．能与羰基试剂缩合 119．可用铁酚试剂比色法测定 120．可用四氮唑比色法测定DCABAnull114．Kober反应是 A. 雌性激素与硫酸甲醇共热呈色 B. 皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色 C. 雌性激素与硫酸－乙醇共热呈色， 用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 D. 维生素A与无水三氯化锑的无醇氯 仿溶液呈色 E. 异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色null96：139. 黄体酮在酸性溶液中可与下 列哪些试剂反应呈色 A. 2,4-二硝基苯肼 B. 三氯化铁 C. 硫酸苯肼 D. 异烟肼 E. 四氮唑盐 null95：76. Kober反应及铁一酚试剂法 适用于哪一药物的含量测定 A. 黄体酮 B. 雌二醇 C. 甲基睾丸素 D. 甲基炔诺酮 E. 氢化可的松null 用四氮唑比色法测定皮质激素类 药物，是利用C17 –α醇酮基的何种性 质 A．氧化性 B．还原性 C．可加成性 D．酸性 E．碱性null 红外吸收光谱图中，羟基的伸缩振动范围约为： A. 3600-3300cm-1 B. 3300-3000cm-1 C. 3000-2700cm-1 D. 2400-2100cm-1 E. 1900-1650cm-1null 红外吸收光谱图中，羰基的伸缩振动波数为 A. 3600-3300cm-1 B. 3300-3000cm-1 C. 3000-2700cm-1 D. 2400-2100cm-1 E. 1900-1650cm-1null 可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮 染料的甾体激素类药物是 A. 醋酸可的松 B. 睾酮 C. 黄体酮 D. 雌二醇 E. 炔诺酮