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化学发光和电化学发光的区别免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，主流方法学上可以分为：化学发光、电化学发光(也称场致发光和电致发光)两种。代的一线品牌有：美国雅培公司、瑞士罗氏公司、美国贝克曼公司、德国西门子公司。1、化学发光化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。其主要特点为消耗发光剂。同时量子效率相对较低。1.1按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶(ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗。1.2按发光持续时间分类：可分为闪光和辉光两类，闪光型发光时间在数秒内，如吖啶酯系统。其检测方式一般采用原位进样和时间积分法测量，即在检测器部位加装进样器，并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行；同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。而辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上，如HRP一鲁米诺系统、ALP—AMPPD系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等。其信号检测无需原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。测量化学发光反应的光强度，求得某些化学物质和生物物质的含量，尤其与免疫学方法结合以后形成的化学发光免疫测定法(CLIA)，其既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析的高度特异性，检测快速，试剂无放射危害，检测限达10负15mol／L。1.3评价：化学发光标记物已广泛应用于抗原、半抗原和抗体的检测，与放射性核素标记物相比较，它的优点在于安全(无放射危害)、稳定、测量快速、灵敏度高、线性范围宽、自动化程度高、减少了人为的误差。检测快速缩短了等待结果的时间，无需批量检测可随到随测，保证及时提供结果。缺点在于一般化学发光是标记催化酶或化学发光分子的发光反应，一般发光不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中易发生裂变，导致反应结果不稳定。此外。检测时需对结合相、游离相进行分离，操作步骤多，测试成本高。1.4代表仪器美国雅培公司生产的i2000、i1000系列全自动免疫发光分析仪采用目前最为先进的氢氧化钠促吖啶酯发光。目前已有80多个检测项目可供临床应用。2、电化学发光分析2.1电化学发光电化学发光的原理是对电极施加一定的电压进行电化学反应，反应的产物之间与体系中某种组分发生化学发光，用普通光学手段测量激发光强度从而对物质进行衡量分析的一种方法。与化学发光有所不同，其差异在予氧化反应是通过电极上的电化学反应产生的，而不是氧化剂或发光剂自身内氧化产生，其标记物为三联吡啶钌及其衍生物Ru(bpy)32+，并以三丙胺(TPA)为还原剂。2.2评价：电化学发光的主要特点是发光过程中的标记物基本不被消耗，其反应体系中其他成分充分过量，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。但其缺点也十分明显：受测量方式限制，只能使用一步法，无法避免钩状效应，容易产生假阴性的结果。仪器需要经常更换流动池，成本及维护费用高；反复使用的流动池可能导致交叉污染；同时环境及样品中同类元素也存在较弱的本底干扰。而冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定；同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外使用磁性或非磁性微粒时，强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。2.2代表仪器：目前生产电化学发光仪的厂家较少，主要生产厂家是瑞士罗氏公司，与日本日立公司合作，生产411、601等系列仪器。ROCHECobas系列全自动电化学发光免疫分析仪。3、发光分析平台评价免疫学的核心问题是抗原-抗体的特异性结合，主要采用固相的方法，即将抗原或抗体固定到磁微球上，经免疫反应后，在固相载体磁微球上形成抗原-抗体复合物，外加磁场沉降这种复合物，然后洗涤除去多余或游离的抗体或抗原，然后进行发光示踪放大后进行测定。与一般免疫反应类似，可分为直接法、双抗体夹心法和竞争法。由以上分析，无论是化学发光还是电化学发光其本质都是一种发光示踪技术，在技术上没有明显的差距。而在临床检测中所能表现出来的性能主要还是在试剂组分中抗原抗体的制备技术。所以我们在评价免疫检测平台时，主要还是要去看其试剂所用的抗原抗体的纯化提纯技术、特异性、灵敏度，反应系统地构建等因素，而不是仅仅只看其所采用示踪标记技术。