甲胎蛋白异质体对预警肝癌作用的研究1

甲胎蛋白异质体对预警肝癌作用的研究 李伯安 李永利 王海滨 毛远丽 北京 解放军 302 医院临检中心 100039 【摘要】 目的 微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体(AFP—L3)预警肝细胞癌 的临床意义 方法 对 100 例 AFP 升高肝病患者血清，应用甲胎异质体微量离心 柱分离并洗脱获得 AFP-L3，再分别采用罗氏 E170 仪器检测 AFP 以及 AFP-L3 含量，计算 AFP-L3 在 AFP 中的比例，对 AFP-L3 异常升高者、正常者进行跟踪， 结合 6 个月后临床诊断结果，分析 AFP-L3%升高在鉴别良性肝脏病变与预警肝 癌中的作用。结果 肝癌、疑似肝癌患者与良性肝病患者中的 AFP-L3 阳性率差 异有统计学意义（分别为 81.8%、73.68%、11.8%,P〈0.05〉。未确诊肝癌（疑似 HCC、肝病）的患者中，AFP-L3 阳性的 21 例中有 12 例在 6个月内被诊断为 HCC， 而且有 6 例是通过 B 超、CT 等影像学手段被早期确诊的单发性小肝癌。AFP-L3 阴性的 62 例标本中，6 个月内有 3 例发生肝癌，AFP-L3 阳性发生肝癌的危险率 增加了 11.9 倍。结论：AFP-L3 与 AFP 值无相关性，可以作为一个独立肝细胞癌 诊断因。AFP—L3 的测定对于 AFP 升高时良、恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警 诊断具有重要意义。 【关键词】 甲胎蛋白 甲胎蛋白—L3 肝细胞癌 肝细胞癌（HCC）是世界上最常见的 10 种恶性肿瘤之一，全世界每年约有 25 万人死于本病［1］；其中我国肝癌死亡人数占全球死亡人数的 45%-50%。我国的肝 细胞癌绝大部分基于长期的慢性肝炎、肝硬化，在这些高危患者中早期发现肝癌 并及时治疗可以显著提高 5 年生存率。甲胎蛋白(AFP)定量检测结合影像学检查 是目前早期发现肝癌的主要手段，但影像学检查有时很难区分良恶性病变，如肝 癌和肝硬化结节；而且对于超声成像技术，因为肝脏中肿块的尺寸至少为 3cm才 能被探测到，而这种情况通常发生在预后极差的阶段。AFP可以在影象学发现肝 癌组织之前异常升高，但是AFP在一些良性肝病患者中也会有不同程度的升高［2］ ，如慢性肝炎、肝硬化等，导致在高危人群中在影象学阳性之前早期预警存在困 难，寻找肝癌早期诊断高特异性的鉴别指标具有重要的临床意义。 近年研究发现，良性肝病时肝细胞坏死后再生性AFP与恶性肝癌细胞产生的 AFP在糖链结构上有差异［3］因此根据与植物外源性凝集素亲和性不同，可对AFP 的来源进行判断。以小扁豆凝集素（LCA）作为外源性凝集素可将AFP分为（LCA） 非结合型AFP（AFP—L1、AFP—L2）及LCA结合型AFP（AFP—L3）。其中AFP-L3 既 通常所说的甲胎蛋白异质体，来源于恶性肝癌细胞。 我们使用国产的微量离心柱分离甲胎蛋白异质体（AFP-L3），应用化学发光 法对本院 100 例 AFP 异常升高的肝病患者血清进行了检测，对 AFP-L3%异常的患 者、AFP-L3%正常患者跟踪 6 个月然后结合临床诊断,探索甲胎蛋白异质体 （AFP-L3）检测对于良恶性肝病鉴别、肝癌预警发生的临床意义，现将结果报道 如下。 1. 对象与方法 1.1 对 象 以 2006 年 10 月～2007 年 2月北京市解放军第 302 医院住院患者中 AFP 阳性 - 1 - （20ng/ml 以上）的 100 名患者作为研究对象，男 78 例，女 22 例，年龄 22～68 岁，平均年龄 50 岁。其中诊断为肝细胞癌（HCC）的 22 例；疑似 HCC 的 19 例其 中慢性肝炎（CH）2 例、肝硬化（LC）17 例；单纯 AFP 升高但是诊断为非肝癌的 肝病患者 59 例其中急性肝炎(AH)1 例、慢性肝炎（CH）22 例、肝硬化（LC）36 例。诊断符合 2000 年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联 合修订的“病毒性肝炎防治”中病毒性肝炎诊断标准。所有血清标本分离后 冻存在-80℃超低温冰箱。 1.2 方 法 甲胎异质体 AFP-L3 亲和吸附离心管由北京热景生物技术有限公司惠赠。这种 离心管内预先装有耦联了凝集素 LCA 的微球，可以特异结合 AFP-L3，经过离心 洗脱后收集的洗脱液中含有AFP-L3，然后使用罗氏E170仪器和配套原装进口AFP 试剂盒对处理前样本和处理后样本进行定量检测，通过计算可获知 AFP—L3 占总 AFP 的比率。按 AFP-L3≥10％为甲胎异质体异常升高者。具体严格按试剂盒 说明书进行。 1.3 统计方法 统计学处理采用 GraphPad Prism4.0 软件进行。 2. 结 果 2.1 HCC、怀疑 HCC、单纯 AFP 升高患者的 AFP-L3%分布如下图 HCC 怀疑HCC 单纯AFP升高非肝癌 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 不 同肝 病 A FP -L 3% 2.2 以 AFP—L3%≥10 判断为阳性，不同组的 AFP—L3 阳性率 见表 2 - 2 - 表 2 100 例肝病患者 AFP-L3 阳性率 诊断 例数 阳性例数 阴性例数 阳性率 (%) 诊断 HCC 22 18 5 81.80 19 14 5 73.68 疑似 HCC 非肝癌 单纯 AFP 升 高 59 7 52 11．8 P <0.001 2.3 AFP-L3 值与AFP值的关系，同时测定的 100 例AFP—L3 值与AFP的关 系 （见图 1）。两者的相关系数r=0.16，无相关性。其中 22 例HCC的 AFP-L3 与AFP值的关系数更低仅为r=0.11，r0.005(28)=0.499，P >0.05，。 100例AFP阳性患者血清AFP值与AFP－L3值的相关性 0 20 40 60 80 100 120 0 500 1000 1500 AFP ng/ml AF P- L3 % 非肝细胞癌 肝细胞癌 图 1 (注：AFP 为稀释 2.5 倍后结果) 2．4 非肝癌、AFP-L3 阳性患者 6 个月后诊断结果 临床主诊断 AFP 阳性、AFP-L3% 异常 AFP 阳性、AFP-L3% 正常 初次诊断非肝癌 21 62 6 个月后肝癌 12 3 肝癌发生率 57.1% 4.8% 危险率增加倍数 11.9 3. 讨 论 目前临床诊断肝癌的血清标志物主要依靠甲胎蛋白, 但AFP在一些良性肝病 中也有不同程度的升高，特别是在高危人群如慢性肝炎和肝硬化病人中有 20%～50%的AFP - 3 - 升高者,因此甲胎蛋白诊断肝癌只有相对特异性［4］。甲胎蛋白（AFP）是一个单链 糖蛋白，不同的肝病患者产生的血清AFP的糖链结构不同，根据与小扁豆凝集素 亲和力不同，AFP可以分成三种类型：AFP-L1，产生自良性肝病细胞；AFP-L2， 来自孕妇；而AFP-L3 则为恶性癌细胞产生，即通常所说的甲胎蛋白异质体。 AFP-L3 是肝癌诊断的高特异指标，被称为新一代肝癌标志物［5］ AFP-L3 检测常用的方法有植物凝集素免疫交叉电泳技术，该方法将人血清 先加入含小扁豆凝集素的凝胶中电泳，然后电转至含鼠抗人AFP 单抗的硝酸纤 维薄膜上，加入酶标抗体，膜上形成免疫复合物，加入酶催化底物用反射光扫描， 测量AFP-L3 的百分含量。该方法技术要求高、操作繁琐、试剂昂贵，限制了 AFP-L3 检测在临床的应用。FDA于 2005 年批准检测该指标应用于肝癌预警，并 把AFP-L3 诊断肝癌的阳性界定值为 10%。如果患者血清中总AFP升高而AFP-L3 所占的比例超过 10%，肝癌发生危险率增加 7 倍［6］。 我们采用了新的一种微量离心柱法对AFP-L3 进行分离,该方法所采用的离 心柱中装有小扁豆凝集素（LCA）微球，当血清流过时,甲胎蛋白异质体（AFP— L3）会留在离心管内，然后离心洗脱，获得处理后样本，此样本中含有甲胎蛋白 异质体（AFP-L3）。采用该方法检测,HCC患者的AFP-L3 的阳性率显著高于其他良 性肝病组，肝癌中AFP-L3%异常达到 81.8%，临床诊断良性肝病AFP-L3%异常比率 为 11%。这种AFP-L3 对HCC诊断的敏感性与朱丽影等的很相近［7］；另外初次 诊断为疑似HCC、单纯AFP升高肝病的AFP-L3%阳性 21 例中，有 12 例在 6 个月内 被诊断为肝癌,而且有 6例通过影象学早期诊断为单发型小肝癌，AFP-L3 的测定 对于HCC具有早期预警功能。AFP阳性、AFP-L3%正常的 62 位肝病患者在接下来的 6个月内有 3位发展成肝癌，AFP-L3%异常对于肝癌发生危险率提高了 13.1 倍。 肝癌早期诊断并及时治疗可以显著提高 5 年生存率，可见AFP-L3%检测对于AFP 升高的良性肝病预警肝癌具有重要意义。 一般情况下认为，血清中的AFP如果长期的保持一定的高值以及AFP升高程 度的增加，诊断为肝癌的可能性也随之增高。但是本研究结果表明AFP-L3 值与 AFP无相关性，与国外报道一致［5］。可见甲胎蛋白异质体（AFP—L3）是独立的 肝细胞癌（HCC）诊断因子。 此外，在临床主诊断为非肝癌（疑似肝癌患者、单纯AFP升高肝病）的患者 中，有 9 例临床诊断为肝硬化和慢肝患者AFP-L3%呈阳性，在 6 个月内CT影象 学仍旧未发现癌变，FDA有关研究认为AFP-L3 可以提前 21 个月预警［6］，根据 AFP-L3%的预警作用，不排除其在近期罹患肝癌的可能，目前尚在临床观察中。 【参 考 文 献】 ［1］青柳璺.肿瘤标志物的临床诊断意义及展望——甲胎蛋白（AFP）L3 组分. 日 本医学介绍，2005，26: 49-50. ［2］Hu KQ, Kyulo NL. Clinical significance of elevated alpha-fetoprotein (AFP) in patients with chronic hepatitis C, but not hepatocellular carcinoma. Am J Gastroenterol. 2004 May;99(5):860-5. ［3］Yoshida-S,Kurokohchi-K,Arims-K,et al.Clinical significance of lens culinaris agglutinin-revctiae fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma.Int J Oncol ,2002,20(2):105-111 ［4］游绍莉，辛绍杰 229 例甲胎蛋白明显升高肝病患者的临床分析 实用预防 医学 2006 年 12 月第 13 卷第 ［5］Li D, Mallory T. AFP-L3: a new generation of tumor marker for - 4 - hepatocellular carcinoma. Clin Chim Acta，2001，313(1):15-19. ［ 6 ］ FDA: Class Ⅱ Special Controls Guidance Document:AFP-L3% Immunological Test Systems Document Issued on October 4,2005 ［7］朱丽影,甲胎蛋白异质体 AFP-L3 测定的临床意义. 铁道医学院 1999，27 卷. - 5 -