氯硝柳胺悬浮剂对日本血吸虫尾蚴影响的酶组织化学观察

· 中国血吸虫病防治杂志 年第 一 卷第 期 , , 文章编号 〕 一 一 一 · 金仑著 · 氯硝柳胺悬浮剂对日本血吸虫尾坳 影响的酶组织化学观察 李洪军‘ , 梁幼 生 ‘ “ , 宫明强 , 戴建荣 ’ , 茹炜炜 ’ , 许永 良‘ , 徐 明 ’ , 朱荫 昌‘ 〔摘要 目的 采用酶组织化学技术 , 观察经氯硝柳胺悬浮剂处理后 的 日本血吸虫尾坳体内酶活 性变化 , 以研究其杀坳 。 将正常尾勤和经氯硝柳胺悬浮剂浸泡后 的尾坳粘附于盖玻片 上 , 室温晾干 分别对 组尾坳进行细胞色素 氧化酶 、 乳酸脱氢酶 、琉拍酸脱氢酶 、 乙酞胆碱醋酶 和一氧化氮合酶 的酶组织化学染色 常规法制片 , 显微镜观察 着色反应 采用显微图像分析系统定量测定其平均灰度值 。 结果 、 、 、 和 在尾坳的头器 、腹吸盘和尾干部位的酶活性较高 。 其中用药组 、 和 的活性明显高于 对照组 , 用药组和对照组的活性变化差异无显著性 , 而 用药组的活性明显低于对照组 。 结论 氯硝柳胺引起尾拗耗能加剧导致机体的能量供应障碍 , 能量的短时间耗蝎是引起尾勤死亡 的主要原因之一 。 关键词 」 抓硝柳胺悬浮剂 日本血吸虫 尾坳 酶 酶组织化学 中田分类号 」 文献标识码 」 一 不 林琳 乙 万 幻 ‘ , 五 儿 入 ‘ , 从 , , 山 了 ‘ , 尺 ￡, , , , ‘ , ‘ 及 , 即 , “ , 呻 即 , 即 且 ‘ , , 「 〕 人 一 , , , , , , , , , 孟 , 「基金项目 〕 江苏省“ 土程 ”医学重点人才基金 、 卫生部科学研究基金 〔 一 作者单位 」 江苏省血吸虫病防治研究所 、 江苏省寄生虫分子生物学重点实验室 、 江苏省寄生虫病学重点学科 无锡 山东省济南军区第 厂职工医院 〔作者简介 」 李洪军 一 , 男 , 硕士 , 研究实习员 。 研究方向 寄生虫分子生物学 二 通讯作者 电话 一 一 飞 · · 李洪军等 氯硝柳胺悬浮剂对 日本血吸虫尾坳影响的酶组织化学观察 仁 夕口 一 氯硝柳胺是世界卫生组织惟一推荐 的灭螺药 。 氯硝柳胺不但可用 于灭螺 , 且对于血吸虫尾坳也有 较强的杀灭作用 , 但有关氯硝柳胺的杀蜘机制 目前 仍不清楚 。 酶是生命活动过程 中的重要催化剂 , 调节 机体的生理功能和新陈代谢 , 担 当生物体 内重要 的 信使分子和效应分子 , 可反映机体在生理和病理状 态下细胞代谢活动的改变川 。 唬拍酸脱氢酶 , 、 乳 酸 脱 氢 酶 , 、 细 胞 色 素 氧 化 酶 , 与有机体 的能量代谢有 关 , 反映生物体的能量代谢变化 而尾坳对终宿主的 感染力与其体 内的能量储量密切相关 〔 〕。 乙酞胆碱 醋酶 , 和 一 氧化 氮合 酶 。 , 为有机体的神经递 质效应分子 , 可反映递质的传递效应变化 , 调节机体 的生理功能 。 本研究拟采用酶组织化学技术 , 通过对 上述 种酶在 日本血吸虫尾坳体内的基本定位及经 氯硝柳胺悬浮剂作用后其活性变化观察 , 以研究氯 硝柳胺悬浮剂的杀坳机制 。 材料与方法 材料 血吸虫虫株 阳性钉螺采 自安徽省贵池市血 吸虫病流行区 , 逸出尾坳感染家兔保存在实验室 内 , 并经传代株毛蜘人工感染钉螺获得尾 坳 由江苏省 血吸虫病防治研究所钉螺室提供 。 氯硝柳胺悬浮剂 氯硝柳胺悬浮剂 由江 苏省血吸虫病防治研究所研制 , 批号 。 化学试剂 硝基 四氮哇兰 、 二胺基苯 胺 · 盐酸 · 、过氧化氢酶 一 、 细胞色素 型 、 还原型辅酶 · 、 还原型尼可 酞胺腺嘿吟二核昔酸磷酸 、 碘化乙酞硫代 胆碱 、 曲拉通 一 一 , 均 由华美生物工程公司提供 。 方法 尾拗的处理 分别将 日本血吸虫尾坳分为 组 用药组用 氯硝柳胺悬浮剂 有效浓度为 浸泡 对照组 为未经氯硝柳胺处理组 。 将 组尾坳分别粘附于盖玻片上 , 室温晾干 。 酶 组 织 化 学 染 色 分别 对 组 尾 坳进 行 、 、 、 和 的酶组 织化 学染 色 。 按 改 良法显示 匕 」, 将粘有 尾 坳 的 盖 玻 片 置 孵 育 液 成 分 · , 磷酸缓 冲液 , 过氧化氢酶 一 , 细胞 色素 份 型 中 , ℃ 、反应 。 按 法改 良显示 ’ , 将粘有 尾 坳的盖玻片置孵育液 成分 , · , 磷酸缓冲液 , 乳酸钠 中 , ℃ 、 反应 按 法改 良显示 巨 〕, 将粘有 尾蜘 的盖玻片置孵育液 成分 , 。 唬 拍酸钠缓冲液 , 磷酸缓冲液 中 , ℃ 、 反 应 。 按 一 法 改 良显 示困 , 先将尾坳置 ℃预冷 的福尔马林钙溶液 中过 夜 固定 , 然后在孵育液 液和 液的混合液 , 液 成分 醋酸缓冲液 , 碘化乙酞硫代 胆 碱 液 成 分 拘 橡 酸 钠 缓 冲液 , 硫酸铜溶液 , 铁氰化钾溶液 中 , ℃ 、 反应 。 然后在孵育液 成分 · , 双 氧水 中 ℃ 、反应 。 按 一 法显示 「, 〕, 将粘有尾 坳的盖玻 片置孵育液 成分 , , , 一 , , , 一 中 , 、 反应 。 对照组 将新鲜小 鼠小脑置恒温冷冻切片 机切片 拌 , 同法同步作酶组织化学染色作为阳 性对照 取小 鼠小脑切片样本孵育于 以等渗盐水替 代的孵育液 内 , 作空 白对照 。 所有的染色片经双蒸水漂洗 , 自然晾干 , 梯度酒 精脱水 、 透明 、 封片 , 显微镜观察组织着色反应 。 酶组织化学定量分析 采用复 日 一 生 物显微图像分析系统观察尾坳体 内 种酶的基本分 布 , 并根据着色深浅定量酶活性 。 每种酶取 个尾 坳样本 , 测定头器 取 个点 、 腹吸盘 取 个点 和尾干 取 个点 部位的平均灰度值 , 定量分析酶 活性 。 结 果 尾坳体 内 呈弥散分布 , 在头器 、 腹吸盘和 尾干部酶活性较高 用药组 的着色深度 明显高于对 照组 图 、 , 与对照组相 比 , 尾 坳头器 、 腹 吸盘和 中国血吸虫病防治杂志 年第 卷第 期 , , 尾干的 平均灰度值差异均有非常显著性 尸 表 。 表 用药组和对照组 的平均灰度值 一 一 牙士 组别 腹吸盘 头器 尾干 用药组 士 士 士 对照组 士 士 士 尸 值 尸 的平均灰度值与对照组相 比 , 头器和腹吸盘差异均 尾坳体 内 均呈 阳性反应 , 但 以头器 、 腹 吸 有非常显著性 尸 均 而 组尾干之间差异 盘和尾干部酶活性较高 用药组头器 、腹吸盘的着色 无显著性 表 。 明显深于对照组 图 、 。 尾坳头器 、 腹吸盘和尾干 表 用药组和对照组 的平均灰度值 加 叩 ‘ 士 组别 腹吸盘 头器 尾干 用药组 对照组 邵 士 士 , 士 士 士 士 尸 值 尸 间的 着色深度无明显差异 。 尾勤头器 、腹吸盘 尾坳体 内 呈 弥散分布 图 、 , 但 以 头 和尾干的平均灰度值差异均无显著性 , 但 呈强 器 、腹吸盘和尾干部酶活性较高 对照组和用药组之 阳性 表 。 表 用药组和对照组 的平均灰度值 , 士 组别 腹吸盘 头器 尾干 用药组 士 士 士 对照组 士 士 士 值 显 浅于对照组 图 、 , 两者差异均有非常显著性 尾坳体 内以头器 、 腹吸盘 、 尾干部 、 体部与尾干 表 。 的联合处着色深 , 活性较高 用药组 的着色明 表 用药组和对照组 的平均灰度值 略 王士 组别 腹吸盘 头器 尾千 用药组 对照组 士 士 士 士 士 士 一 值 尾蜘体 内 呈弥散分布 , 以头器 、 腹 吸盘着 色最深 , 活性较高 用药组 的着色 明显深于对 照组 图 、 , 差异具有非常显著性 表 。 李洪军等 氯硝柳胺悬浮剂对 日本血吸虫尾坳影响的酶组织化学观察 表 用 药组和对照组 的平均灰度值 士 组别 腹吸盘 头器 尾干 用药组 对照组 士 士 士 士 士 士 值 对照组 小 鼠小脑 的蓝细胞及颗粒细胞为 阳性反应 以 等渗盐水取代孵育液 , 切片染色呈 阴性反应 , 证 明酶 试剂活性正常 , 反应特异 。 讨 论 日本血吸虫尾坳 由体 、 尾部组成 。 体前端具有特 化的 、 略能伸缩的头器 , 它有强有力 的倒锥形肌控制 其伸缩动作 口 在头器腹面亚顶端 , 在头器顶端具有 两排半月形的有体壁隆起 的峙 , 其 中为钻腺导管开 口 在头器 中央有一个大 的单细胞腺体 , 称为头腺 , 几乎 占满 中央部位 , 它具有多而短 的导管比 〕 。 对 钻腺 由 对单细胞构成 , 位于体的中后部 , 分别 由 对腺管向体前分左右两束穿过头器 , 开 口 于体前端 钻腺分泌物含有蛋 白酶及多糖酶 , 〕。 尾坳的腹吸盘 小 , 位于体的后半部 , 但深径 比直径大 , 由发达 的肌 肉构成 , 具有强大的吸附能力 。 尾部分为尾干和尾 叉 , 尾坳在水 中的游动是 以尾部 向前 的倒退姿势运 动 , 这是尾干 内纵列 的肌细胞交互 收缩致使尾干作 环状的旋转运动 , 由于虫体的旋转 , 尾叉起着如推进 器一样的作用而前进川 。 尾坳 自钉螺体内逸 出后 一 小时内 , 在 一 ℃室温下 , 侵人去毛 的小 鼠及家兔腹壁皮肤的最 短时间为 。 , 而侵人豚鼠皮肤约需 , 尾坳钻人 人体皮肤的时间十分短暂 , 主要是依靠其体 内腺细 胞分泌物 中的酶溶解作用 、 头器 的伸缩作用 以及虫 体全身肌 肉运动时的机械作用等协 同完成 的 , 需要 大量的能量供应川 。 是呼吸链集合体中电子传递系的末端酶 , 参与细胞的有氧代谢 , 该酶定位于线粒体 内膜 , 是线 粒体的酶之一闭 。 分布于所有生物体细 胞 , 是生物无氧酵解途径 的代表酶田 。 是重要 的脱氢酶之一 , 定位于线粒体峙上 , 是与呼吸链有关 的酶 , 催化三竣酸循环 中唬拍酸和延胡索酸 间的反 应 , 通常用于反映有氧氧化 的状况 。 一般认为 , 尾 坳不从外界摄取食物 , 其能量来源靠体 内的糖原贮 备 , 且其尾部糖原消耗较体部更为迅速 。 尾蝴 自然死 亡的原因与其体内贮存的糖原含量耗尽而导致能量 枯竭有关 。 日本血吸虫尾蜘在实验浓度氯硝柳胺 中 , 即刻可 出现强直性或痉挛性运动 , 然后出现躯体 麻痹 , 短时间内死亡 。 由于尾坳的剧烈运动 , 耗能急 剧增加 , 活性增强 , 促进有氧代谢 , 可加速能量 供应 。 由于机体剧烈运动 , 使得体 内的乳酸大量产 生 , 从而促使 活性增强 , 促进无氧酵解途径 , 代 偿性弥补能量不足 。 虽然 的活性在用药组和对 照组无显著变化 , 但其活性维持一较高水平 , 保证了 有氧代谢的顺利进行 。 是神经细胞性质和功 能的重要指标 。 尾坳神经系统 的中枢神经和外周神 经均含有丰富的胆碱醋酶川 。 用药组的 活性 明显降低 , 这可能与致使尾坳失去正常活动能力 , 出 现躯体麻痹有关 。 已证实 是生物体 内重要 的信 使分子和效应分子 , 广泛参与生物体 内多种生理 、 生 化和病理调节 。 还是一种新型的神经递质 , 即 为 重 要 肌 肉松 弛 介 质 , “ 〕 的生 物 合 成 是 受 调节 〔‘。〕。 用药组尾坳的 活性明显增强 , 这 可能与尾蝴为缓解用药后所产生的强直性和痉挛性 收缩 , 而释放更多 , 以调节肌 肉松弛 , 是尾 坳 自 身的一种调节机制 。 而有关氯硝柳胺对 日本血吸虫 尾坳产生强直性和痉挛性收缩的机制仍 尚需进一步 研究 。 从氯硝柳胺对尾拗的酶组织化学变化影响结果 显示 , 氯硝柳胺使尾坳 、 、 活性增强 , 而 活性降低导致尾坳 的剧烈运动 , 刺激尾蝴 机体在短时间急剧供能 , 导致尾坳储备的能量短时 间大量消耗 , 造成能量的供应不足或引起能量的耗 竭 , 从而引起尾蜘的死亡 。 本文 图 一 见封二 仁参 考 文 献 〕 习 周爱儒 , 查锡 良 生物化学 〕第 版 北京 人 民卫生 出版社 , 幻 毛守 白 血吸虫生物学与血吸虫病的防治 〔 」北京 人 民卫生 出版社 , 一 , 一 , 一 」小川和 郎 , 中根一穗 酶组织化学技术 〕上海 上海 医科大学 出版社 , 一 中国血吸虫病防治杂志 年第 一 卷第 期 , , 仁 〕 〕 乙 , 一 〕 , , , 〕 , , 〔〕 , “ 一 ,, 〕 , , 〔 」周述龙 , 林建银 , 蒋明森 血吸虫学 〔 〕第 版 北京 科学 出 〔文章编号 〕 一 一 一 版社 , 一 , 一 · 「 〕责长恩 , 李树庚 组织化学 」北京 人 民卫生 出版社 , , 一 , , 一 〔 」梁幼生 , 戴建荣 , 朱荫昌 , 等 钉螺一氧化氮合酶分布的酶组织化 学研究 〕中国血吸虫病防治杂志 , , 一 「 〕钟慈声 , 孙安阳 一氧化氮的生物 医学 〕上海 上海 医科大 学出版社 , 一 , 一 」 〕 , , 一 收稿 日期 〕 一 一 〔编辑 」陶 波 · 防治奎聂验 · 大学生蠕形蛾感染调查 谷敬丽 , 都景芳 , 王 国英 〔中图分类号 」 文献标识码 〕 蠕形蜻是人群中感染较普遍的一类永久性寄生蜻 , 寄生 于人和哺乳动物的毛囊和皮脂腺内 , 寄生人体的有毛囊蠕形 蜡和皮脂蠕形蜻 。 酒糟鼻 、 毛囊炎 、座疮 、脂溢性皮炎和睑缘 炎等与蠕形蜻的感染有关 。 为 了解大学生蠕形蜻感染状 况 , 于 一 年对本校大学生进行了蠕形蜡感染调查 , 现如下 。 对象与方法 对象 为本校住校大学生 , 共 人 男 人 , 女 人 , 人 , 二年级 人 , 三年级 人 , 年龄 岁 。 于每年秋季进行调查 。 方法 透明胶纸粘贴法 将透明胶带剪成 , 嘱受检者夜晚睡前洗净面部 , 将胶带贴于鼻尖及两侧鼻 翼部 , 次晨洗脸前将胶带取下粘于载玻片上 。 结果判定 检出蠕形蜡任何一期虫体或虫卵均为 阳性 。 对所有 阳性标本进行全片检查计数 , 一 只为轻度感 染 , 只为中度感染 , 只以上为重度感染 。 同时进行虫 种鉴定 。 结果 蠕形蜡感染率 总感染率为 。 男 、 女 生 感 染 率 分 别 为 和 · , 两者之间差异无显著性 , 。 不 同年级学生的蠕形蜡感染率 不同年级学生 的蠕 形 靖 感 染 率 分 别 为 一 年 级 , 二 年 级 , 三年级 。 一年级与二年 级感染率差异有显著性 , 尸 , 一年级与三 年级感染率差异也有 显著性 一 , 尸 。 , 二年级 与三年级感染率差异无显著性 丫 , 尸 。 蠕形 蜻感染度 阳性 者 中 , 重 、 中 、 轻度 的感 染 度 依 次 为 、 八 、 写 。 轻度与中度感染率差异有显著性 , 尸 , 轻度与重度感染率差异有显著性 丫一 , , 中度与重 度感染率差异也有显著性 一 , 尸 。 蠕形蜡虫种 毛囊蠕形蜻 、 皮脂蠕形蜻 、 混合感染的 阳 性 率 依 次 为 、 肠 、 。 毛囊蠕形蜡与皮脂蠕形蜻的感染率差异 有显著性 丫一 , 尸 , 毛囊蠕形蜻与混合感染的 感染率差异有显著性 丫 , 尸 , 皮脂蠕形蜡与 混合感染的感染率差异也有显著性 丫 , 尸 。 讨论 人体蠕形 蜻感 染呈 世界性 分布 , 国 外 人 群感 染 率 为 一 , 国 内 人 群 感 染 率 为 写一 图 。 调查结果显示 , 男 、女感染率差异无显著性 , 说明 感染率与性别无关 , 与感染机会有关 。 蠕形蜡的传播方式为 直接接触和间接接触 。 二年级 、 三年级感染率均高于一年级 , 是因为这两个年级学生集体生活时间长于一年级学生 , 接触 机会多于非集体生活的人群 。 人体蠕形蜡感染率随着集体生 活时间的延长而上升 。 感染者中以轻度居多 , 中度次之 , 重 度较少 感染虫种 以毛囊蠕形蜻居多 , 混合感染次之 , 皮脂蠕 形蜻较少 。 说明毛囊蠕形靖是人体面部感染的常见虫种 。 参 考 文 献 〕詹希美 人体寄生虫学 〔 〕第 版 北 京 人 民卫生 出版社 , 一 仁 〕陈佩惠 人体寄生 虫学 〕第 版 北京 人 民卫生 出版社 , 一 」胡 群 , 王 炎 内蒙古 名学生蠕形蜻感染调查 〔」中国 寄生虫学与寄生虫病杂志 , , 一 收稿 日期 〕 一 一 编辑 〕秦时君 作者单位 」 河南大学医学院 开封