动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定

ThismodelpaperwasrevisedbytheStandardizationOfficeonDecember10,2020动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法参考：GB/T17811-2008一、适用范围适用样品名称不适用样品名称原料动物性蛋白质原料植物性蛋白质原料成品动物性蛋白质饲料植物性蛋白质或混合饲料二、实验原理已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。三、实验用品1．实验用试剂试剂名称规格/浓度配制方法备注乙醚AR无需配制在空气中会慢慢氧化成过氧化物，过氧化物不稳定，加热易爆炸，应避光保存。丙酮AR无需配制易燃、易挥发。胃蛋白酶溶液胃蛋白酶活性1：1000020IU/ml将浓盐酸稀释至1000ml水中（溶液PH1～2），水浴加热至42℃～45℃，加入2g（精确至±0.0002g）活性为1：10000生化级胃蛋白酶，并缓慢搅拌直至溶解。此溶液临用前配制。勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。浓硫酸AR，98%无需配制，直接使用具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。混合催化剂AR称取0.4gCuSO4·5H2O，6gK2SO4，磨碎混匀氢氧化钠AR，40%水溶液称取40g氢氧化钠用去离子水配成100ml溶液。此溶液置于塑料桶中保存。硼酸AR，2%水溶液称取2g硼酸固体，加热溶于水，配成100ml溶液。混合指示剂称取0.1g甲基红溶于95%乙醇，配成100ml溶液；称取0.5g溴甲酚绿溶于95%乙醇，配成100ml溶液；两溶液等体积混合。阴凉处保存有效期三个月硫酸铵AR无需配制使用前在105℃干燥箱中干燥至恒重蔗糖AR无需配制糖类物质，不能在105℃干燥箱中干燥，使用时可不干燥。盐酸标准溶液AR具体见附录22．实验用设备仪器设备名称规格高速万能粉碎机FW80分析筛孔径0.84mm(20目)分析天平感量0.0001g冷冻水浴恒温振荡器LSHZ-300FOSS手动索氏提取系统2055消煮炉可控温420℃凯式烧瓶250ml凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式磨口三角瓶带盖，250ml布氏漏斗Φ80mm真空泵XZ-1快速定量滤纸Φ12.5cm容量瓶1L烧杯100ml，1L滴定管白色、酸式，25ml锥形瓶250m1玻璃棒三、实验内容序号实验项目操作内容注意事项1样品制备选取有代表性的样品用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过20目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。试样勿吸潮变质。2样品脱脂称取4g试样于滤纸筒中，用FOSS手动索式提取系统按粗脂肪检测方法进行，脱脂后的样品只需在室温风干，去掉石油醚即可。含脂肪小于1%可不脱脂；含脂肪1%～10%建议脱脂；含脂肪大于10%则应脱脂。3胃蛋白酶消化称取已脱脂风干后的试样1.0000g(精确至±0.010g)于250ml干燥的带盖磨口瓶中,加150ml新配制的并已预热至42℃～45℃的胃蛋白酶溶液,盖紧瓶盖,将瓶夹于恒温摇床上,于45℃、80r/min恒定速度搅动16小时进行保温酶解消化。应确保磨口瓶中样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿。同时做酶液空白测定（即不加试样，其它步骤一样）4消化残渣的处理从搅动器上取下磨口瓶，呈45°角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有滤纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。先过上层清液，液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。过滤过程要小心操作，保证残渣毫无损失。当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸(用滤纸将残渣包裹好),无损地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。磨口瓶内的残渣要全部冲洗至滤纸上。5粗蛋白质的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移入凯氏烧瓶中，按《FOSS定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定残渣粗蛋白质的质量分数（ω2）。同时，称取脱脂风干的样品0.3g（精确至0.0002g），直接按《FOSS定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（ω1）。测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。6计算X-试样胃蛋白酶消化率，以质量分数计（%）；ω1-脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（%）；ω2-脱脂酶解后的残渣中粗蛋白质的质量分数（%）。重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对≤6%；2每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对偏差应符合：粗蛋质含量允许相对偏差>25%1％10%方案

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