中药鉴定学专论

PAGEPAGE39中药鉴定学专论第一章绪论中药鉴定学（ScienceforIdentifyingChineseMateriaMedica）是研究中药的来源、品种、质量、质量变化规律及中药资源可持续发展的应用科学。它是在继承中医药学遗产和传统中药鉴别及使用的基础上，运用现代生物学及化学的理论和技术方法，解决中药的真实性、中药的有效性、中药的安全性、中药的质量和质量变化规律，以及中药新资源寻找发现及中药材化生产等可持续发展的理论和实践问题。中药鉴定学的具体任务包括考证和整理中药品种、鉴定中药的真伪优劣，和控制中药质量及寻找和扩大新药源。中药鉴定学研究动向（1）中药品质形成过程关键科学技术问题研究中药材品质形成与产地生态环境（包括土壤、气候、地形）、物候期以及药材采收、加工、贮藏过程的关系，着重研究中药材品质形成过程中生态环境的多因素、定量化和综合分析技术，中药材生产过程中功效物质动态积累规律、生物合成途径的技术和方法，以及中药材加工贮藏过程中的共性问题，以确定药材适宜采收期、适宜生态性产区并建立合理、规范的加工工艺和现代科学合理的贮藏方法。（2）中药功效成分及其质量控制方法学研究寻找、确定中药中的功效成分一直是现代中药研究的主流。主要应用活性导向分离法筛选中药功效物质成分。以中药传统功效为依据，建立相应的生物效应评价体系；采用化学分离技术，以生物效应评价体系为指导，分离、筛选功效物质部位；采用现代色谱集成技术分离分析功效物质部位，生物效应评价体系筛选，确定功效物质成分。同时应用高通量筛选法、生物色谱法、血清药物化学方法等，确定中药功效成分。在确定中药功效成分基础上，采用现代色谱、光谱等技术，建立实用有效、技术先进的中药质量评价和控制方法。（3）中药质量规范化研究中药质量标准的规范化是关系到临床用药安全、有效、可控的重要保障，在《中国药典》的质量评价体系指导下，采用现代分析技术对中药建立和优化鉴别、检查和含量测定方法，如中药指纹图谱、DNA分子标记技术鉴定、代谢组学鉴定、多种功效组分同时测定等，采用气质联用、原子吸收等技术对农药残留、重金属等进行安全性评价。通过质量标准的规范化研究，制定科学、合理、实用的质量标准。第二章中药的真实性鉴定中药的真实性鉴定是鉴定中药材品种，确定其拉丁学名。基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定和现代鉴别技术。主要介绍几种中药真实性鉴定新技术。色谱、光谱等仪器分析技术已成为中药真实性鉴定的主要手段之一；随着数码成像技术的发展，中药原植物及药材的原色鉴定已实现了近于图像传真、拷贝和扫描的逼真和完美程度，能清晰地展现原植物和药材的固有形态或性状特征；显微成像技术使中药材的内部结构和粉末特征以近于100%的真实度展现给检验者；DNA分子遗传标记技术的发展使中药种质的鉴定和评价成为可能，能从遗传物质角度准确地鉴定药材的基源；色谱技术及色谱和波谱联用技术，如HPLC、HPCE、UPLC及HPLC-MS或HPLC-MS/MS、UPLC-MS/MS等技术的进步，实现了通过指纹图谱鉴定全面反映中药的化学信息，系统而有效地控制样品的真实性；代谢组学技术使从终端小分代谢产物的组成及轨迹的变化角度快速而准确地鉴定中药品种成为可能。这些新技术引入中药鉴定领域，使中药鉴定学的手段或技术水平与国际接轨。第一节数码成像技术一、数码成像技术简介在成像平面上用电荷耦合器件（CCD）、互补金属氧化物半导体（CMOS）等光电面阵器件，接受图像信息就成为数码成像系统，每一CCD、CMOS芯片由数十万、数百万，甚至上千万的像素组成，数码相机将图像光强分布和色度分布转化为以空间像素单位、传输图像、图像输出，于是形成了数码成像技术和相应产品。数码相机及摄像机是数码成像技术的实施设备。其技术系统包括：①拍摄系统：拍摄远距和近距图像的望远数码相机及显微镜用数码目镜；②数码输出系统：底片扫描仪、打印输出及数码扩印系统等。数码成像技术虽然是近几十年来才出现，但由于其形象性强、适用性广泛、操作简单、存储方便等特点，目前已广泛地应用于中药材的品种鉴定。二、在中药基源鉴定中的应用数码成像技术能更真实、更直观的反映药用植物（动物或矿物）的形态特征，使获得的图片更清晰，色泽更逼真，为中药基源的鉴定提供了方便，已成为原植物（动物或矿物）鉴定的一个重要技术。人参PanaxgingsengC.A.Mey.叶为小叶长椭圆形或宽披针形，总花梗较长；而西洋参PanaxquinquefoliumL.叶为小叶倒卵形或广卵形，总花梗较短。人参与西洋参原植物外观较为相似，采用数码成像技术，将两者对比，可以直观地区分出人参与西洋参的原植物差异。在《中国药典》（2010版）中，有1/3左右药材为多基源植物，它们通常为同属植物，形态十分接近，部分药材因物种的不同在质量上存在一定的差异，因而，基于物种差异的数码成像技术在评定质量上发挥着重要作用，如龙胆、柴胡等。同时，植物生长环境也是原植物品种鉴定的一个重要依据，但以前对于它的描述只能通过文字的方式，存在很大的弊端，数码成像技术可以翔实、逼真地原植物的生长环境，成为中药鉴定的一个重要辅助手段。图2-1人参（左）及西洋参（右）原植物图三、在中药性状鉴定中的应用由于栽培药材与野生药材在生长年限、生长环境等方面都存在着差别，致使药材的性状也发生一定的改变；不同产地药材由于生态环境差异，或者种质方面的差异，造成药材外观性状的差异。如乌拉尔甘草Glycyrrhizauralensis由于产地的不同，药材的性状也有较大的不同；同种药材，基源不同药材的性状通常也存在着一定的差别，如药材柴胡的基源包括伞形科植物柴胡BupleurumChinense或狭叶柴胡B.scorzonerifoliumWild.，两种基源的药材形态差别较大。上述原因造成的药材形态的差异均可利用数码成像技术方便、快捷地对其进行记录和鉴定。四、在中药显微鉴别方面的应用传统的显微鉴别形象化缺乏，绘图等难度及工作量大，应用效果不佳。数码显微技术将现代数码成像技术和传统的显微鉴定技术有机地结合在一起，保证了图像的真实性、客观性、可视性。由于视野所限，所得的原始图片一般需要经过拼接，才能得到能够反映其组织构造特征的“组织图”，这是药材显微成像的特殊性。数码显微成像图片分为两类：在低倍镜下拍摄的图片主要反映药材切面上各部分组织之间的比例和分布试样，对应于墨线图的简图，但远比传统的简图详细，称之为组织概貌图；在高倍镜下拍摄的图片通过组合，主要反映药材组织中细胞的排列方式或局部的、具有鉴别意义的特征，对应于墨线图的详图，称之为组织特征图。如常用药材威灵仙，《中国药典》（2010版）收载其基源植物为毛茛科植物威灵仙ClematischinensisOsbeck、棉团铁线莲C.hexapetalaPall．或东北铁线莲C.manshuricaRupr．的干燥根和根茎，从性状上看，威灵仙与棉团铁线莲极为相似。利用数码成像技术对这两种药材横切面进行鉴别，则表现出明显的区别：威灵仙皮层薄壁细胞扁椭圆形或不规则长方形，外皮层切向延长；韧皮部外侧常有纤维和石细胞；木质部宽阔，占直径1/2以上。而棉团铁线莲皮层薄壁细胞类圆形或椭圆形，外皮层细胞多径向延长；韧皮部外侧无纤维和石细胞；木质部占直径1/2以下。第二节仪器分析技术一、色谱鉴别色谱法是中药化学成分分离和分析的重要方法之一，该技术具有极强的分离能力和极大的适应性，现已成为中药品质分析（定性、定量、指纹图谱）中应用最广的一种方法。常用的方法有：薄层色谱(ThinLayerChromatography，TLC)、气相色谱(GasChromatography，GC)、高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)、高效毛细管电泳（HighPerformanceCapillaryElectrophoresis，HPCE）、高速逆流色谱(High-SpeedCounter-CurrentChromatography，HSCCC)、超临界流体色谱（SupercriticalFluidChromatography，SFC）、圆二色谱（CircularDichrorism，CD）等。（一）薄层色谱（TLC）薄层色谱是将适当的吸附剂或载体涂布于玻璃板等上，使成一均匀薄层，待点样、展开、显色后，将样品与适宜对照物(对照品或对照药材)的色谱图作对比，用以进行中药的品质分析。薄层色谱具有快速、经济、可靠、操作简便、适用范围广、重现性好等特点，其独具的优势是提供直观形象的可见光或荧光图像，即较柱色谱多了色彩这一可比“参数”，并可进一步配合色谱扫描或数码处理得到不同层次轮廓图谱和相应的积分数据，尤其适合日常分析检验和现场检验，现已经成为中药质量分析最常用的重要方法之一。《药典》所载药材大多收薄层色谱鉴别。现代薄层色谱借助于高科技和计算机技术已发展到仪器化、自动化、计算机化和其它色谱技术联机化的阶段，陆续出现了一些特殊技术，如高效薄层色谱（HighPerformanceTLC，HPTLC）、薄层扫描（ThinLayerChromatographyScan，TLCS）、热微量转移薄层色谱（TAS）、薄层色谱-气相色谱联用(TLC-GC)、薄层色谱斑点转移和红外光谱间接联用（TLC-IR）等。其中薄层扫描用固定波长对薄层展开的各斑点进行扫描得到扫描图谱，比目测的薄层图谱更为客观准确，还可计算各峰的峰面积与标准峰的比作量化指标，则更具指纹意义。（二）气相色谱（GC）气相色谱法的流动相为气体（载气），固定相多为涂在化学惰性载体表面的液膜。样品注入进样口被加热汽化，在色谱柱内，样品中各组分在气、液两相中进行反复分配，因分配系数的不同而达到分离，先后进入检测器，产生讯号，由记录仪记录色谱图。根据组分的量与检测响应值或峰高成正比，以进行定性和定量分析。气相色谱具有分离效能高、分析速度快等优点，所得的色谱轮廓，其重现性好、分辨率较高，由于是封闭系统色谱，外界影响因素较少，稳定性较好，检测设备可选性较大，特别适用于含挥发油及其它挥发性组分的中药的品质分析。近年来，随着科技发展、研究深入和实际应用需要，陆续出现了一些实用性更强的新方法、新技术，如毛细管气相色谱（CapillaryGasChromatography，CGC）、气相色谱保留指数谱（GasChromatographyRetentionIndicesSpectrum，GCRIS）、裂解气相色谱（Pyrolysis-GasChromatography，PGC）、顶空气相色谱（HSGC）、气相色谱—质谱联用（GC-MS）、气相色谱—傅里叶变换红外光谱联用（GC-FTIR）等。其中最引人注目是裂解气相色谱，它具有操作简便、样品无需化学前处理、提供信息量大等优点，且适用面广，对一些不能直接用气相色谱检测的中药，可用裂解气相色谱检测。PGC是热裂解和气相色谱两种技术的结合，也就是将样品放入裂解器内，在—定条件下将样品加热使之瞬间裂解成可挥发性小分子产物，立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分离后在记录仪上获得重复特征的裂解气相色谱图，它具有指纹性质。GCRIS是根据中药挥发性成分的GC的保留指数，从中选择若干代表性成分的保留指数组成各自的气相色谱保留指数谱，使特征指纹更加显现。GC-MS应用较多，可以“在线”提供指纹图谱中主要成分的化学结构信息,快捷而灵敏,是日常检验所需的指纹图谱的有力支撑。以超临界CO2流体萃取作为前处理手段的GC-MS，也大大丰富了中药指纹图谱构建的内涵。（三）高效液相色谱（HPLC）高效液相色谱法的流动相是具有不同极性的单一溶剂或不同配比的混合溶剂、缓冲液等。用泵将流动相高压输送到装有填充剂的色谱柱，注入供试品，经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪记录色谱图。高效液相色谱法只要求样品能制成溶液而不需要汽化，因此不受样品挥发性的约束。对于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为有利。高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、稳定性和重现性好、流动相选择性广、检测器种类多、色谱柱可反复使用等特点，现已广泛用于中药材品质分析最主要和常用的方法。HPLC-DAD可得到三维HPLC图谱，将色谱峰的保留时间与光谱信息整合在同一图谱中，适用于成分比较复杂紫外光区有吸收的试验对象；HPLC-ELSD可以解决没有紫外吸收的物质的检测；HPLC/UV/MS可得到HPLC/UV及HPLC/MS指纹谱，并对主要色谱峰进行归属；HPLC/ESI-MS所得其HPLC-MS总离子流色谱图包含了更多的信息，其指纹性和专一性更强；HPLC/DAD/MS/MS可建立多维指纹图谱，同时建立总离子流指纹图谱。（四）高效毛细管电泳（HPCE）高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为的差异而实现分离的一种液相分离技术，具有分离效率高、分析速度快、分离模式多、毛细管清洗容易、仪器维修简单、可直接分析水溶液等特点，在中药指纹图谱研究方面越来越显示出极其重要的应用前景。HPCE适用于大部分化学成分，特别是生物大分子—肽和蛋白的分离，如动物类中药海龙、海马类的鉴别；中药化学成分复杂多样化，分子大小不一，HPCE能实现大小分子(如蛋白质和酚酸)同时分析，如此得到的指纹图谱将更多的反映中药的成分特性；应用模式多样，已经发展了毛细管区带电泳(CapillaryZoneElectrophoresis，CZE)、毛细管凝胶电泳(CapillaryGelElectrophoresis，CGE)、胶束电动毛细管色谱(MicellarElectrokineticCapillaryChromatography，MECC)、毛细管等速电泳(CapillaryIsotachophoresis，CITP)、毛细管等电聚焦电泳(CapillaryIso-ElectricFocusing，CIEF)、毛细管电色谱(CapillaryElectrochromatography，CEC)等分离模式，其中CZE和MECC是中药指纹图谱研究中最常用的两种模式。至于HPCE重现性，可通过采用淌度比法、对照品校正法、保留指数法等加以提高。（五）高速逆流色谱(HSCCC)高速逆流色谱是当前国际流行的新型的液-液分配技术。该技术应用动态液一液分配原理，利用相对移动的互不混溶的两相溶剂，在处于动态平衡的两相中将具有不同分配比的样品组分分离。它具有分离效率高、超载制备能力强、无固体载体不可逆吸附、溶剂用量少、应用范围广等优点。HSCCC技术具有很好的适应性，由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，理论上可以适用于任何极性范围样品的分离，所以在分离天然产物方面有其独到之处。它的分离度、重现性均较好，且操作简便，容易掌握；对样品的预处理要求低，仅需简单的提取，甚至不用前处理都可达到很好的分离效果；实现梯度操作和反相操作，亦能重复进样。该技术回收率高，由于HSCCC没有固态载体，不存在吸附和降解，只要调整好分离条件，一般都有很高的回收率。所以，HSCCC非常适用于中药成分的分离和分析。许多研究证明，HSCCC能分离用HPLC难以分离的成分。HSCCC在中草药研究方面的应用尚处在起步阶段，目前主要用于中草药有效成分的分离分析。近几年来，随着仪器和方法的改进，将高速逆流色谱与质谱联用（HSCCC／MS），成功地应用于中药化学成分的分离、分析鉴定。可以说，在中药质量分析控制研究中，尤其在指纹图谱分析领域，HSCCC有着广阔和良好的应用前景。（六）超临界流体色谱（SFC）超临界流体色谱以超临界流体作流动相，它通过控制压力调节流动相的密度实现对被分离物质溶解度的调节，从而使不同物质分别进行溶解与分离。超临界流体溶解能力强，流动性好，传质速率快，融合了HPLC和GC所用流动相的优点而避免了它们的部分缺点。SFC比GC应用范围更广，比HPLC定量效果更好，分离的时间更短，样品的前处理更简单，更易与大型分析仪如质谱仪、傅里叶变换红外光谱仪和核磁共振谱仪等联用。SFC适用范围很广，理论上，能够用HPLC分离和测定的化合物，都可以用SFC来分离和测定，某些用HPLC不能分离的物质，用SFC也能得到较好的分离效果。二、光谱鉴别光谱鉴别是指用一定波长的光照射或扫描中药样品，取得特定的图谱和数据，以鉴别中药材真伪优劣（种间区别、资源利用、采收期、道地性、气味本质、质量控制等）的专门技术。其主要方法有：紫外光谱（UltravioletSpectrum，UV）、红外光谱（InfraredSpectrum，IR）、荧光光谱（FluorescentSpectrum，FS）、核磁共振波谱（NuclearMagneticResonance，NMR）和质谱（MassSpectrometry，MS）。此外还有原子吸收光谱（AAS）、等离子体光谱（ICP）、X射线荧光光谱（XRF）等。（一）紫外光谱（UV）紫外光谱是反映分子内电子吸收紫外和可见光波段的能量而产生跃迁的吸收光谱。中药中一些含有不饱和结构或共轭双键结构的成分在紫外光（200～400nm）照射下，能引起物质内部原子、分子运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过棱镜或光栅分成按波长顺序排列的不连续的吸收光谱，不同物质产生的紫外光谱各不相同。由于不同中药含有不饱和成分的差异，利用紫外光谱特征（最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰、吸收系数、吸收度比值、吸收峰的数目、峰形、峰高等）进行鉴别。中药材的紫外光谱是多种成分特征吸收光谱叠加而成的复合谱，在一定条件下，中药多成分的复杂组合也有一定规律性，从而在紫外叠加光谱上显示出一定的特异性和稳定性。对于难以区别或亲缘关系相近的中药，可采用多溶剂紫外光谱法（紫外谱线组法）或导数光谱法。导数光谱（DerivativeSpectrum，DS）法是将吸光度对波长求导数，将导数值对波长作图，即得导数光谱图。可消除样品中的一些无关吸收，排除原图谱中某些干拢；还可解决紫外光谱吸收峰重叠问题，随着导数阶数的增加，吸收带宽变窄，峰形变锐，从而提高光谱的分辨率。紫外光谱和导数光谱鉴别中药材的具体操作主要分样品制备、光谱测试及图谱分析三个步骤：1.样品制备中药材中所含的化学成分十分复杂，样品制备时，应视中药材中有效成分或特征性成分选择合适的提取溶剂，有时为了避免单一溶剂的局限性和选择溶剂的烦琐性，选择不同极性的多种溶剂。对于复杂的样品，有时还要进行梯度萃取和适当的溶剂或色谱分离处理。样品浓度、提取方法（冷浸或热提）、提取时间等，应根据预试情况而定。2.光谱测试在样品测试前，先通过预试选定波长范围、吸收度量程、狭缝宽度、扫描速度等仪器参数。紫外分光光度计在使用期间，要定期对仪器进行校正和检定。检定项目包括波长准确度、波长重复性、单色器分辨率、仪器的杂散光、光度计线性、光度准确度、光度重复性、噪声、基线的稳定性和平直性等。仪器校正和检定，以及测定法参照《中华人民共和国药典》（2010年版一部）附录ⅤA.紫外分光光度法。紫外分光光度计的操作方法因仪器的型号不同而异，具体可参照产品说明书或参照《中国药品检验标准操作》紫外分光光度法项下多种型号紫外分光光度计操作规程。3.图谱分析对所测得的光谱图进行全面比较，确定可资利用的鉴别参数，如峰数（N1）、峰位（λmax）、谷数（N2）、谷位（λmin）、肩峰（sh）、相邻峰高比值（K）等。一般情况下，选择最大吸收波长作为鉴别特征，但在实际工作中，尽可能利用光谱图所提供的鉴别特征进行综合判断。（二）红外光谱（IR）红外光谱是反映分子内各种键的振动和转动能级变化的吸收光谱。红外光谱具有高度的特征性，每一种化合物都有自已特征的红外光谱。中药是一个含有多种化学成分的混合物，其红外光谱是混合物中各组分在红外光区域内（4000cm-1～400cm-1）总体官能团吸收的叠加。在一定条件下，同一种中药所含化学成分的质和量是相对稳定，且又有别于其它中药，故综合叠加的红外光谱具有一定的客观性和稳定性，且又具有特征性。图谱分析主要着眼于所测得的红外光谱的轮廓特征（全谱图形）的比较，不用将各主要吸收峰归宿，只要在所扫描的波数范围内比较吸收峰的波数、同一波数吸收峰的形状和强度、“指纹区”面貌等方面的差异即可。如进口药材乳香、没药等树脂，单从外形和一般化学鉴别，有时很难确认其中是否掺假，可将检品少许蒸馏，将得到的油状物涂膜作红外光谱测定，并与正品或已知成分如没药烯作红外光谱比较，则可断定是否为伪品或有否掺杂品。随着仪器分析、化学计量学和计算机技术的快速发展，针对中药这个复杂的混合物体系，目前已发展起来了许多更加实用的新方法和新技术，如傅里叶变换红外光谱（FourierTransformIR，FTIR）、二维相关红外光谱（TwoDimensionalInfraredCorrelationSpectrometry，2DFTIR）、近红外光谱（NearIR，NIR）、傅里叶变换拉曼光谱（FT-Raman）、衰减全反射傅里叶变换红外光谱（AttenuatedTotalReflectanceFTIR，ATR-FTIR）、漫反射傅里叶变换红外光谱（DiffuseReflectanceFTIR，DR-FTIR）、近红外漫反射光谱(Near-InfraredDiffuseReflectanceSpectrocopy，NIRDRS)和近红外漫反射可视化褶合光谱(Near-InfraredDiffuseReflectanceSpectrocopyVisualizationConvolutionTransform，NIRDRS-CT)等，更加适合于指纹图谱的研究和构建。红外光谱鉴别中药材的操作方法分样品处理、制样、光谱测试及图谱分析四个步骤：1.样品处理红外光谱鉴别中药材的关键是要把具有差异的化学成分富集起来，使其表现在红外光谱上，所以样品的化学处理非常重要，大体有以下三种方法：(1)直接粉末法：对于中药材中差异性成分含量较大的，样品可不用化学溶剂处理，直接用其粉末（过40目筛）与溴化钾在玛瑙乳钵中混匀后再压片，上机后测得红外光谱图。(2)溶剂提取法：由于大多数中药材化学成分复杂，各物种之间的差异性成分常常被含量较大的相似性成分掩蔽起来，所以在直接用药材粉末得到的红外光谱中表现出相似性。此时，可用若干种不同极性的溶剂，对若干份同一药材进行提取，这样就把药材中的化学成分按极性不同分成几部分，从而使差异性成分被掩蔽的机会大大降低。具体操作时，可选用50％乙醇、丙酮、氯仿、石油醚四种溶剂，因为这四种溶剂可把中药材中的绝大部分化学成分提取出来。在保证同一组鉴别、比较的中药材提取条件完全相同的前提下，制成一定浓度的药材提取液。然后取适量的提取液置玛瑙乳钵中，用电吹风将溶剂挥尽，加入溴化钾研匀后压片上机。这里有两点值得注意：一是由于取样量的大小直接影响光谱的面貌，取样量过大则光谱的分辨率变差；取样量过少则吸收强度减弱。实验表明，在提取液浓度为每ml相当于5g生药时，取样量在0.5~4ml之间为宜，且在此范围内基本是随溶剂极性的降低取样量增加。二是由于有机溶剂在红外光区均有吸收，提取液中的溶剂必须挥尽，不然对测定有严重干扰，上述在乳钵中用电吹风是可以把溶剂挥尽的，极少量的溶剂残留物已不再干扰中药材的光谱。若把整个提取液全部挥尽溶剂再取样，则费时费力，取样繁琐，取样量也不易控制。(3)分离处理或梯度萃取法：极少数中药用溶剂法仍不能鉴别开，可考虑进一步分离。首先要考虑除去中药材中同性质类的成分，如蛋白质、多肽、碳水化合物、树脂和无机盐等，然后再将提取物按极性分成若干部分。也可采用梯度提取，即对同一份样品分别用几种极性不同的溶剂进行提取，然后对几份极性不同的提取物和残渣测定红外光谱。如果还不行，则可以考虑用色谱技术进行分离。2.制样制样技术主要有压片法、糊法、膜法、溶液法等。其中以压片法最为常用。(1)压片法：取供试品约1~1.5mg，于玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾与氯化钾细粉约200~300mg（与供试品比例约200:1）作为分散，充分研磨混匀，置于直径5mm或13mm的压片模具中，使铺布均匀，抽真空约2min，加压并保持压力2min，撤去压力并放气后取出制成的供试片，目视检测，片子应呈透明状，其中样品分布均匀，无明显的颗粒状样品。压片法制成的片厚在0.5mm以下时会在光谱计录上产生干涉条纹，对样品自生弱峰能产生干拢，一般可将片厚调节至0.5mm以上即可避免，也可用金相砂纸将片稍微磨毛一些以去除。此法唯一的缺点是溴化钾粉末常含微量水分，因而在约3300cm-1处有水的吸收峰，可能对样品是否含羟基不能作出确切的判断。(2)糊法：取供试品约5mg，置玛瑙研钵中，粉碎研细后，滴加少量液状石蜡或其它适宜的糊剂，研成均匀的糊状物，取适量糊状物夹于两个窗片或空白溴化钾片（每片约150mg）之间，作为供试片，另以溴化钾约300mg制成空白片作为补偿。亦可用专用装置夹持糊状物。制备时应注意尽量使糊状样品在窗片间分布均匀。(3)膜法：参照上述糊法所述的方法，将能形成薄膜的液体样品铺展于适宜的盐片中，形成薄膜后测定。若为高分子聚合物，可先制成适宜厚度的高分子薄膜，直接置于样品光路中测定，熔点较低的固体样品可采用熔融成膜的方法制样。(4)溶液法：将供试品溶于适宜的溶剂中，制成1~10%浓度的溶液，灌入适宜厚度的液体池中测定。常用溶剂有四氯化碳、三氯甲烷、二硫化碳、己烷、环己烷及二氯乙烷等。选用溶液应在被测定区域中透明或仅有中~弱的吸收，且与样品间的相互作用尽可能少。在制样操作过程中，供试品研磨应适度，通常以粒度2~5μm为宜，供试品过度研磨有时易引起本身的破坏，粒度不够细则易引起光散射能量损失，使整个光谱基线倾斜，甚至严重变形。压片法及糊法中更应注意。3.光谱测试在测定红外光谱时，红外实验室的室温应控制在15~30℃，相对湿度小于65%，以免积聚过量的二氧化碳和有机溶剂蒸汽。在样品测试前，先通过预试选定仪器参数，但要注意，测定样品时的扫描速度应与波长校正时的条件一致。红外分光光度计在使用期间，同样要定期对仪器进行校正检定，检定内容包括波数准确度、波数重现性、分辨率、100％线平直及噪声等。具体可参照《中华人民共和国药典》（2010年版一部）附录ⅤC.红外分光光度法。红外分光光度计的操作方法亦因仪器的型号不同而异，具体可参照产品说明书或参照《中国药品检验标准操作》红外分光光度法项下多种型号紫外分光光度计操作规程。4.图谱分析主要着眼于所测得的光谱全谱图形的比较，不用将各主要吸收峰归宿，只要在所扫描的波数范围内比较吸收峰的波数、同一波数吸收峰的形状和强度、“指纹区”面貌等方面的差异，即可做出鉴别结论。红外光谱直接用于中药材粗提物品质分析的报道较多，除矿物药直接压片有专著介绍外，还有珍珠、蟾酥、哈蟆油、五灵脂、麝香、牛黄、血竭等动植物药可以直接压片鉴别真伪。用红外光谱研究熊胆质量也确证熊胆中牛磺熊去氧胆酸，熊去氧胆酸（UDCA）为特征性成分；国产熊胆商品均含UDCA，且以牛磺结合型(TUDCA)为主，应视为正品，不含UDCA为伪品。红外光谱鉴定牛黄，非洲牛黄与京牛黄红外光谱一致性很好，天然牛黄与人工牛黄有明显差别，伪牛黄与天然牛黄、人工牛黄完全不一致，特别是掺有蛋黄的掺伪品，在1740cm-1处有明显的吸收峰而纯牛黄则没有，伪品猪黄与天然牛黄完全不同，说明两者组分有极明显区别。血竭及其掺杂品的红外光谱，血竭的红外吸收峰是1120、1610cm-1，以1610cm-1为特征吸收峰；达马胶的红外吸收峰是1380、1460、1707cm-1，以1707cm-1为特征吸收峰；松香的红外吸收峰主要是1692cm-1，还有1280cm-1。两种不同规格的血竭，其红外光谱血竭的特征吸收峰一致，同时均有达马胶特征吸收峰，这表明加工血竭中掺入了达马胶。(图2-2)图2-2血竭及其掺伪品的红外光谱图A.手牌血竭B.皇冠牌血竭C.达马胶D.松香（三）荧光光谱（FS）中药所含的某些成分（通常是具有共轭双键体系及芳香环分子）在紫外光照射下，吸收一定波长的光能后，又发射出比吸收光的波长更长的光，当紫外照射停止时，这种发光现象立即消失，这种光通常为晶莹可爱的可见光，故称荧光。荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。激发光谱是指不同激发波长的光引起物质发射某一波长荧光的相对效率，即固定荧光发射单色器，以激发单色器进行波长扫描，记录不同波长时相应荧光强度；发射光谱是指某一激发波长的光引起物质发射不同波长荧光的相对效率，即固定激发单色器，将物质产生的荧光以发射单色器进行波长扫描，记录不同波长时的荧光强度。物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也不同，其荧光光谱有一定的特征性，利用最大激发波长（λex）、最大发射波长（λem）及峰数等特征常数进行进行中药材鉴别。有时为了提高测定方法的灵敏度和选择性，常使弱荧光性物质与某些荧光试剂作用，以得至强荧光性产物。尽管荧光光谱峰数少，但同时可测得该物质的激发和发射两种光谱，比紫外和红外要多一个信息，更有利于鉴别。荧光光谱法鉴别中药材的操作步骤与紫外光谱法基本一样。测试时应定期对仪器的波长准确度、灵敏度、分辨率、线性误差、稳定度等进行检测。荧光分光光度计的操作方法可参照仪器说明书或参照《中国药品检验标准操作》荧光分析法项下多种型号荧光分光光度计操作规程。图谱分析时，主要依据于最大激发波长（λex）、最大发射波长（λem）及峰数等特征常数，进行药材鉴别。（四）核磁共振波谱（NMR）核磁共振波谱反映组成该分子的具有磁性的原子核(氢谱中为氢原子，碳谱中为各碳原子)在强磁场及辐照频率作用下产生核磁共振时核的能级变化。它是鉴定有机化合物结构的重要方法之一，可以获得化合物的包括各类质子的化学位移、数量、偶合关系等多个结构信息。中药（特征总提取物）在这种频率为兆赫数量级，波长很长（10cm～100m），能量很低的电磁波照射下，其中化学成分的某些特定元素（通常选用H）的原子可以吸收电磁辐射，可得到吸收频率对峰强度的核磁共振氢谱（1HNMR）。中药成分复杂，若用一定程序获取植物类中药的特征性化学成分(或化学成分组)的总提取物，同时这些特征的化学成分的含量是相对固定的，则在规范的提取分离条件下，植物类中药的1H-NMR图谱与植物品种间存在着严格的对应关系。一些实验研究表明，中药的1HNMR指纹图具有高度的特征性和重现性，可依照1HNMR指纹图上显示特征共振信号和数据(δppm)鉴别药材。黄连鉴别：取样品粉末5～10g，加95%乙醇50～100ml，于水浴上加热回流1h，滤取乙醇液，加少量水使乙醇浓度达80%左右，用石油醚萃取3次（50，40，40ml），乙醇层减压回收溶剂至乙醇全部蒸出，加水60ml及少许NaCl，用乙醚萃取3次（40，30，30ml），合并乙醚提取液。水层再用水饱和的正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液。将乙醚萃取液用5%Na2CO3水溶液萃取3次（40，30，30ml），再用水洗涤乙醚至中性，回收乙醚后得总提取物A。将正丁醇提取液用正丁醇饱和的5%Na2CO3水溶液萃取3次（40，30，30ml），正丁醇层用正丁醇饱和的水洗涤至中性，回收正丁醇至干后得总提取物B。取总提物A和B少许，分别溶于CDCl3和DMSO-d6中，于JEOL-FX60Q型NMR波谱仪上测定其核磁共振氢谱（1HNMR）。1HNMR工作频率为59.75MHz，分别以CDCl3和DMSO-d6为内标，δTMS=δCHCl3＋7.26，δTMS=δDMSO＋2.50，测定温度常温，谱宽为1000Hz，平均累加次数为60～100次。结果黄连总提物B在δ6.02～7.46区出现特征共振峰，总提物A在δ3.94～6.73区出现特征共振峰。(图2-3)图2-3黄连的核磁共振氢谱图1.总提物B2.总提物A（五）质谱（MS）质谱是按照带电粒子（即离子）的质量对电荷的比值（m/z）大小依次排列形成的图谱。它是物理粒子的质量谱，是利用高速电子流轰击样品分子，使其断开，形成各种各样带电的碎片离子，然后在磁场或交变电场或在真空环境中，使这些高速运行的带电碎片离子获得分离。依据这些碎片离子，对分子的分子量和分子结构作出判断。中药特征提取物置质谱仪中进行电子轰击裂解为不同的碎片，获得提取物中化学成分的EI-MS图，不同中药所含成分不同，所得质谱图显示的分子离子基峰及进一步的裂解碎片峰（m/z）亦不一致，故质谱具指纹性较强的特征，可资鉴别。天麻鉴别：取天麻样品粉末100mg，1ml甲醇冷浸2h，伪品50mg，加5ml甲醇冷浸0.5h，天麻素标准品配成1ng/μl的甲醇溶液，取各甲醇溶液1μl进样，于VGAutospec-3000型双聚焦扇形磁式质谱仪上测试。VG20/20数据系统。扫描质量范围为50～500amu，扫描速度为3Sec/Dec，分辨率1000，电离方式EI+，电子能量70ev，校正用参照物为PFK，样品汽化温度为130℃。天麻主成分天麻素为对羟基苯甲醇的衍生物，甲醇提取物的EI-MS质谱图中有m/z124基峰及碎片峰m/z107和m/z95；紫茉莉、大理菊、羊角天麻、马铃薯、芭蕉芋的甲醇提取物EI-MS质谱图中无上述天麻素的特征峰，与天麻区别显著。(图2-4)图2-4天麻及其伪品的EI-MS质谱图A.天麻素B.栽培天麻C.野生天麻D.紫茉莉E.大理菊F.羊角天麻G.马铃薯H.芭蕉芋三、X射线衍射鉴别X射线衍射法（X-RayDiffraction，XRD）是研究物质的物相和晶体结构的主要方法。当某一物质进行衍射分析时，该物质被X射线照射而产生不同程度的衍射现象，物质的组成、晶型、分子内成键方式、分子的构型等决定该物质产生特有的衍射图谱。如果该物质是一混合物，则所得衍射图是该混合物各组分衍射效应的叠加。只要这混合物的组成是恒定的，其衍射图就可以作为该混合物的特征图谱。中药尽管组成复杂(包括有机和无机物的多相体系)，但当产地、采收期等影响因素相对稳定后，其组成也是稳定的，因而其衍射信息也是—定的。由于各种中药的组成成分各不相同，它们的衍射图谱便各有特征性。X-衍射图谱具有指纹性强，能立即知道样品组分，图谱稳定可靠等特点。XRD分为单晶X衍射法与粉末X衍射法。粉末X衍射法具有快速、简单、图谱信息量大、指纹专属性强、判别指标多（衍射图、D值和相对强度等）、稳定可靠等优点，适合于中药材鉴别。粉末X衍射Fourier谱分析法是在将衍射信息进行傅里叶变换的基础上，找出X衍射图谱的拓朴规律，建立较为简单且以能反映中药整体结构特征的X衍射Fourier图谱。四、热分析鉴别许多物质在加热或冷却过程中，常会发生溶解、凝固、分解、化合、吸附、脱吸附、晶体转变等物理或化学变化，这时就会产生吸热或放热现象，研究测定这种变化的技术即为热分析技术。按分析内容分为热重法（TG）、差热分析法（DifferentialThermalAnalysis，DTA）和差动法（DSC）。其中差热分析法较为常用，即研究样品和参比物在相同环境下等速加温时，两者的温度与时间或与加热温度变化的方法。分析结果用热谱图表示，不同中药的热谱图各有其特征性，用于药材鉴别。五、电泳鉴别带有电荷的粒子在电场中随缓冲液定向泳动的现象称为电泳(Electrophoresis，EP)。依据中药中的一些带电荷的成分如有机酸、蛋白质、多肽、氨基酸、生物碱和酶等在一定强度的电场中，在相同的时间内，因各中药所含成分的电荷性质(正电和负电)、电荷量和分子量等不同，造成各成分的泳动方向(向正极或负极)、速度和距离等也不同，从而导致电泳图谱上谱带条数、分布和染色情况各有其特征性，用于药材鉴别。常规电泳操作中按支持物的不同，可分为纸电泳(PaperElectrophoresis，PE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PolyacrylamidegelElectrophoresis，PAGE)、醋酸纤维薄膜电泳(CelluloseAcetateMembraneElectrophoresis，CAME)等。其中聚丙烯酰胺电泳法较为常用，该法所需实验设备简单，专属性强，灵敏较高。高效毛细管电泳（HPCE）对常规电泳技术作了重大改进。常规电泳法对含多肽和蛋白质类成分有差异的中药有较突出的优势，然而本法结果较易受实验条件的影响，故必须严格把握实验条件的一致性。第三节指纹图谱技术随着现代分析技术突飞猛进地发展和对中药系统研究的不断深入，应运而生的中药指纹图谱技术是牵动行业全面进步的关键技术，对提高中药质控指标、指导中药材规范化生产、促进中药新药研制、加快中药现代化、国际化的进程，都具有非常重要的现实意义。指纹图谱是以现代色谱、光谱、波谱等技术为依托的一种质量控制模式。它是一种综合的、可量化的鉴别手段，是当前符合中药特色的评价中药真实性、稳定性和一致性的最佳质量控制方法之一。中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药特性的共有峰的图谱。它能基本反映中药全貌，使其质控指标由原有的对单一成分含量的测定上升为对整个中药内在品质的检测，实现对中药内在质量的综合评价和整体物质的全面控制，使中药质量达到稳定、可控，确保中药疗效，使中药研究更符合祖国医学的整体观念。近几年来，中药指纹图谱研究已成为我国中药基础研究的重要领域与热点，其研究水平和应用范围在不断提高和扩大，研究趋势将向多学科的相互渗透、从单指标向多指标的综合发展，以建立体现谱效关系的指纹图谱。国家颁布了“指纹图谱研究的技术要求”，使指纹图谱制定规范化。详见“中药指纹图谱质控技术”专论。第四节DNA分子标记技术一、DNA分子标记技术简介DNA分子标记（DNAmolecularmarkers）或称遗传标记（geneticmarkers）是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，这种DNA片段是由基因组DNA经限制性内切酶切割或（和）聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）扩增或（和）分子杂交后在电泳胶上或杂交膜上进行检测的。DNA分子标记技术也称DNA分子诊断技术，是检测DNA分子由于缺失、插入、异位、倒位、重排或由于存在长短与排列不一的重复序列等机制而产生的多态性（Polymorphismdiversityorfingerprinting）的技术。DNA分子标记技术分为三类：第一类是以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术，其代表技术为限制性内切酶片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）和DNA指纹技术（DNAfingerprinting），前者主要是以低拷贝序列为探针进行分子杂交，后者主要是以重复序列[包括串联重复序列（如卫星DNA、小卫星DNA和微卫星DNA）和散布重复序列（如转座子和逆转座子）]为探针进行分子杂交；第二类是以电泳技术和PCR技术为核心的分子标记技术，其代表性技术为随机扩增多态性DNA（randomamplifiedpolymorphicDNA，RAPD）、简单重复序列（simplesequencerepeat，SSR；或称简单重复序列长度多态性，simplesequencelengthpolymorphism，SSLP；或称序列标记的微卫星位点sequence-taggedmicrosatellitesites，STMS）和扩增片段长度多态性（amplifiedrestrictionfragmentlengthpolymorphism，AFLP）；第三类是以DNA序列为核心的分子标记技术，其代表性技术有内转录间隔区（internaltranscribedspacers，ITS）测试分析技术。二、DNA分子标记技术的应用药用植物是中药材的主要来源，运用DNA分子标记技术可用于中药材品种鉴定及种质资源评价。它可从分子水平刻画中药材主流品种及其种属的遗传背景差异，为中药品种标准化提供先进可行的方法和稳定可靠的标准，进而为中药质量标准规范化奠定坚实的基础。这种方法比形态、组织和化学水平的检测更具有特征性和专属性。评价中药材种质资源王喜军收集了10种北五味子种质资源，采用简单重复序列区间（inter-simplesequencerepeat，ISSR）分子标记法对各产地样品进行PCR扩增，将扩增结果以软件POPGEN32分析，采用MEGA软件构建了北五味子的亲缘关系聚类图。利用11个引物扩增检测到82个多态性位点，以Shannon指数和Nei指数估算北五味子的遗传变异程度，Nei指数的变化范围在0.1476~0.2284之间，Shannon指数的变化范围在0.2182~0.3390之间。从二级聚类结果发现，黑龙江省神树林场、九连林场和柳河林场的北五味子聚为第1类；黑龙江省呼玛县、吉林省汪清县产的北五味子聚为第2类；辽宁省南芬地区、黑龙江省七台河产北五味子聚为第3类；黑龙江省虎林县、五常县、和尚志县产的北五味子聚为第4类。表明北五味子S.chinensis（Turcz.）Bail.保存着丰富的遗传多样性，具有较高的适应生存能力和进化潜能，对保持生态系统的稳定性和多样性具有重要意义。2kb1kb0.75kb0.5kb0.25kb0.1kb图2-5北五味子的ISSR引物UBC823的扩增结果1-呼玛2-五常3-柳河4-南芬5-九连6-Marker7-虎林8-尚志9-汪清10-神树11-七台河M：DL2000DNAladder徐红利用rDNAITS技术分析石斛属植物13种14个类群的遗传多样性，rDNAITS序列分析结果表明，石斛ITS1序列的差异百分率平均为20.47%，ITS2序列的差异百分率为17.67%，石斛各类群与外类群的差异百分率ITS1序列平均为25.5%，ITS2序列平均为27.37%。这些差异可作为中药石斛分子鉴定的标记。鉴定中药基源及中药材品种金成庸等对茵陈基源植物茵陈蒿的代用品韩茵陈及其同属植物白连蒿进行鉴定，测定了rDNAITS序列，序列之间的差异显示韩茵陈与白连蒿应为两种植物，尽管与茵陈蒿存在着密切的亲缘关系，但具有显著差异。吴平等从乌龟和其他20种龟类的组织材料中提取DNA，扩增约110bp的线粒体12SrDNA基因片段序列数据库。再利用龟甲检口中残存的DNA用PCR扩增相同的基因片段，与乌龟和其他龟的序列进行比较，区分正品与混淆品。以相同的方法，对中华鳖和山瑞鳖的同一基因片段进行扩增、测序，结合从Genbank检索到的缘板鳖序列，构建了3种鳖的12SrRNA基因片段序列数据库，从此作为鉴定鳖甲的依据。黄璐琦等应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对来源于13个种3个变种的天花粉及其类似品进行鉴别研究，用8个引物分别扩增得到清晰、稳定的条带共计83条。并采用聚类分析方法分析结果，将天花粉正品与类似品有效地分成三大类。其结果为天花粉及相关药材的鉴别提供了新的方法。识别药材的道地性党荣理等对新疆产草麻黄、中麻黄、木贼麻黄和膜果麻黄的RAPD图谱进行研究，结果发现，不含有效成分的膜果麻黄图谱与前三种相差最大，这说明药效成分与基因图谱之间存在一定相关性，为该类药材的地道性评价提供了分子依据。周延清等对地黄8个品种2个品系的遗传关系进行研究，结果发现，由17条引物构建的图谱可以有效鉴别各个样品，其中有2条引物能单独区别10个样品。第五节植物代谢组学技术一、植物代谢组学的概念代谢组学（metabonomics/metabolomics）是对某一生物或细胞在一特定生理时期内所有小分子代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科。植物代谢组学（plantmetabolomics）是以植物为研究对象的代谢组学，是对植物抽提物中代谢物进行高通量、无偏差全面分析的技术。它研究不同物种、不同基因类型或不同生态类型的植物在不同生长时期或受某种刺激干扰前后的所有小分子代谢产物，对其进行定性、定量分析，并找出代谢变化的规律。二、植物代谢组学的技术和方法（一）应用技术植物代谢组学要求对某种药用植物中的所有代谢物进行全面的定性和定量分析，因此在研究中须将多种技术联合应用，最大限度地获得更多的代谢产物的信息。色谱与质谱联用技术是目前植物代谢组学研究广泛应用的技术，如GC-MS，HPLC-Q-TOF、HPLC-ESI-MS，HILIC-ESI-MS，HPLC-PDA-ESI-MS/MS，UPLC-ESI-MS，LC-NMR等。目前，高分辨核磁共振氢谱（1HNMR）被认为是代谢组学研究最有力的分析手段之一，因为它不需要对样品进行过多的前处理，也不需要预先选择设定各种测量参数，就可以得到代谢物的信号轮廓（profileofmetabolitesignal）；傅里叶变换红外光谱质谱（FTIR-MS）联用最近也被应用于植物代谢组学分析。FTIR主要测定样品中各成分的功能基团和高极性键的振动，而特定的化学结构有特定的吸收频率，通过测定实验样品的红外吸收频率和强度，可以辨别出各个成分。FTIR-MS具有扫描速度快、光通量大、高分辨率、高信噪比及测定光谱范围宽的特点。（二）研究方法代谢组学分析流程包括样品制备、代谢物成分分析鉴定和数据分析与解释。由于药用植物中代谢物的种类繁多，而目前可用的成分测定和数据分析方法又多种多样，所以根据研究对象不同，采用的样品设备、分离鉴定手段及数据分析方法各不相同。1.样品制备分为组织取样、匀浆、抽提、保存和样品预处理等步骤。代谢产物通常用水或有机溶剂分别提取，提取液经固相微萃取、固相萃取及亲和色谱等方法预处理后备用。由于药用植物代谢物中很多物质不稳定，稍受干扰结构就会发生改变，目前尚无适用于所有代谢物的抽提方法，只有根据所要分析的代谢物的特性及使用的鉴定手段选择合适的提取方法，需对提取过程中的抽提时间、温度、溶剂成分和质量等因素进行筛选及考察。2.成分分析鉴定对样品中所有代谢物进行分析鉴定是植物代谢组学研究的关键步骤。代谢组学分析对象的大小、数量、官能团、挥发性、带电性、电迁移率、极性以及其他物理化学参数差异颇大，需对其进行无偏向的全面分析，单一的分离分析手段往往难以保证。色谱、质谱、核磁共振、红外光谱、库伦分析、紫外吸收、荧光散射、发射性检测和光散射等分离分析手段及其多维联用组合技术是分析的主要手段。一般根据样品的特性和实验目的，选择适当的分析方法。Fiehn等（2000年）利用GC-MS进行代谢组学对模式植物拟南芥的叶子提取进行了研究，定量分析了326个化合物，并确定了其中部分化合物的结构。LC-MS中目前应用较广的是高效液相色谱和质谱联用（HPLC-MS）。Fiehn（2003年）利用HPLC-MS检测笋瓜Cucurbitamaxima（GelberZentner）叶柄和叶片抽提物，检测到了超过400种代谢物，有90种被定性，其中大部分是氨基酸、糖和糖苷。Huhman和Sumner（2002年）在紫花苜蓿MedicagosativaL.（PolishVarietyKleszczewska）和蒺藜状苜蓿Medicagotruncatula中各鉴定出15个和27个皂角苷，并在紫花苜蓿中找到2个新的乙二酸皂角苷。3.数据分析与解释样品成分分析鉴定之后，需对所获得的海量数据进行相应的整合处理，这是代谢组学研究中十分关键的步骤。可应用模式识别和多维统计分析等方法从这些数据中获得有用的信息，从而使数据降维，以更易于可视化和分类。目前常用的数据处理技术有多元回归（multipleregression）、判别分析（discriminantanalysis）、主成分分析（principalcomponentanalysis）、聚类分析（hierarchicalclusteranalysis）、因素分析（factoranalysis）和经典分析（canonicalanalysis）等。同时，应充分利用网上数据库联接代谢组学与其他系统生物学分支的关系。目前，最成熟的数据库是关于模式植物拟南芥的TheArabidopsisInformationResource（TAIR）http://www.arabidopsis.org。其他常用的网上植物资源有http://www.york.ac.uk/res/garnet/garnet.htm，http:/