EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究

EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞面标记表达的研究 EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细 胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究 在EBV转化或杂交过 程中表面标记发生了较大的变化{对LCL和杂交瘤知胞表面标记的检测可能为探寻 人B细胞在这些过程中染色体保留或丢失的规律提供一种手段.此外,LCL及人B 知胞杂交瘤细胞系有可能被用作一种新的模型,来研究人B淋巴细胞的分化和功 能 关键词表叵亘星;人窆窒盟;ApAAP 淋巴细胞杂交瘤一单克隆抗体技术的闻 世,为生物医学众多领域的发展提供了有力 的工具.具有产生拭体潜能的B淋巴细胞与 骨髓瘤细胞融合,所获得的杂交瘤细胞既可 在体外长期培养传代,叉能不断分泌抗体. 但是,对于B细胞在融合过程中发生的变化 了解不甚透彻.目前应用较多的制备人单抗 的方法之一是EBV,杂交瘤技术,人B淋巴 细胞在此过程中受到的影响因素就更为复 杂.研究人B细胞发生的变化,可能有助于 EBV转化及细胞融合确切机理的阐明.本文 用碱性磷酸酶一抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫 组化染色技术对EBV转化的人B淋巴母细 ? 国家863资助课题 稿亳 胞(LCL),人一鼠杂交瘤和人一(人一鼠)杂交瘤 及它们的亲本骨髓瘤细胞系的部分表面标记 进行了检测,以期了解这些细胞的特点. 1材料和方法 l,】细胞系LCL为EBV转化的正常人外 周血B细胞,体外连续培养2个月,分泌人 IgM及人IgG.人一鼠杂交瘤细胞系86—1,亲 本为小鼠骨髓瘤细胞系Ag8.653(购自美国 ATCC公司);人一(人一鼠)杂交瘤细胞系86— 2,亲本为人一鼠骨髓瘤细胞系SHM-D33(购 自美国ATCC公司).两株杂交瘤均是由EBV 转化的肾综合征出血热患者外周血单个棱细 ? 2? 胞,再与相应亲本细胞系融台所得(本室自 制),均分泌IgM()类抗肾综合征出血热病 毒人单抗,体外培养2个月.所有细胞系均 用RPMI1640—10FCS完全培基培养传 代. 1.2小鼠单克隆抗体本实验所用抗人 链,Y链,6链,抗人Ia及抗小鼠CD25(Tac) 杂交瘤细胞系均购自ATCC公司,由本室按 常规方法制备腹水.抗人CD25(Tac)由澳大 利亚IMVSBurns教授赠.抗CD20由天津血 液病研究所惠赠. 1.3APAAP免疫组化染色取对数生长状 态的细胞离心弃上清,用无血清RPMI1640 洗2次,再以RPMI1640—10FCS混悬细 胞,调整密度,用脑脊液细胞玻片离心沉淀 器制细胞抗原片,室温充分干燥后,用福尔 马林一丙酮固定渡4?固定30S,自来水充分 冲洗.按本室常规进行APAAP免疫组化染 色.苏木精衬染后于光镜下观察.同时设正 常小鼠血清作为阴性对照. 2结果 每种小鼠单抗.APAAP染色重复2次, 结果见表l.所有细胞抗原片只加底物液不 显色,表明细胞无内源性碱性磷酸酶.细胞 着染情况见图1(封4). 表15种细胞系细胞表面标记的检测结果 Tab1?m.~?zwj?ace5ceghke.~ *用大鼠抗小鼠I[~2RM,Ab检涮;**M未经克隆化 3讨论 细胞表面标记是免疫细胞相互协同,实 现其功能的物质基础.研究细胞表面标记是 了解免疫细胞本质的重要途径之一.受EBV 感染而转化的LCL以及人B淋巴细胞杂交 瘤细胞表面某些标记的结构和功能可发生较 大的变化,确切机理还不甚明了.目前对 LCL和人B细胞杂交瘤的表面标记研究寥寥 无几[“]. 杂交瘤细胞系86—1均分泌人IgM.它们 的表面有SmlgM,但无SmlgG,与分泌的Ig 类别一致.86—1细胞表面表达有SinIgD可能 与C和C基因片段间无转换区序列,由共有 的mRNA剪接而形成有关.以上结果从一个 侧面为EBV转化的B细胞无Ig类别转换的 报道?提供了佐证.LCI.,和杂交癌细胞既 ? 3? 有B细胞标记CD20,Ia和smIg,同时又具 有浆细胞分泌Ig的功能. 我们曾发现rHulLL2对86-1,86-2和 SHM-D33细胞系的生长有显着促进作用. 对LCL和Ag8.653无影响.细胞表面CD25 检测结果与增殖试验基本一致,只有86—2 虽无CD25(IL-2Ra链),对rHuIL-2却有明 显应答我们认为很可能86—2细胞上有1工广2 受体日链(P75),保留了与IL一2中亲和性结 合的能力.编码P75与编码型轻链的基因 同位于人类第22对染色体上.86—2分泌的 人IgM轻链恰为型,所以肯定该细胞系保 留了人第22对染色体. 人一鼠骨髓瘤细胞系SHM—D33为小鼠骨 髓瘤细胞系Ag8.653和人骨髓瘤细胞系 U266的杂交体,也可以说是一种人一鼠杂交 瘤细胞系它用作亲本细胞与人B细胞融合, 所得杂交瘤抗体分泌稳定性明显优于小鼠骨 髓瘤细胞系与人B细胞所产生的人一鼠杂交 瘤.Teng等认为稳定性好与该细胞系保留了 4,5条人染色体有关.我们通过对其表面 标记的初步研究,证实它至少保留了人染色 体第4对(编码CD38)和第1O对(编码 CT)25);而可能丢失了第6对(编码Ia),第 12对(编码CD20)和第14对(编码IgH)人染 色体因此,表面标记的研究无疑为杂交瘤 细胞内染色体的确认提供了一种简便可靠的 手段,对于探索人B细胞在杂交过程中染色 体保留或丢失的规律具有较大价值. 体外人B淋巴细胞模型很难建立,给研 究人B细胞分化及功能造成很大碾难.我们 的实验结果显示,LCL及杂交瘤细胞均具有 人B细胞的表面标记,所以或许有可能利用 它们作为模型来研究人B细胞有人就曾用 小鼠杂交瘤细胞对小鼠B细胞的分化及抗原 提呈作用进行过研究口”]. 综合研究结果,我们认为对LcL和人B 细胞杂交瘤细胞表面标记的研究有如下意 义:?探讨人B淋巴细胞杂交瘤分她抗体类 型与表面标记的关系;?观察某些表面标记 (如细胞因子受体)的表达程度对杂交瘤细胞 增殖与分化的影响;?为探索人B细胞在杂 交过程中染色体保留或丢失的规律提供了一 种手段{?作为一种新的模型研究人B细胞 的分化与功能. 参考文献 黄传书.等.中华徽生物学和免疫学杂志1990i 10(2):l】3 PosrterMR一.Hy~idoma1983;2(4):369 p?nerMR?H拍rldor~1982;6(8)}811 (~BartMA?吐J]mmunol1986}136(1):106 „曲CF,.I:~ocNatlAcadSeiUSA1985?82: 6495 Ten8NNH..EnglemanEGa(Fas)tHuman HybridomasandMonoclon~An同d.Plenum. NewYork1985?P71 GlimeaxerLH—.Nature1982;298-283 HamanoT,et-Ceillmmunol1984;83:330 AnalysisofTheExpressionofSurfaceMarkersonHumanLCLsandHuman B~LymphocyteHybridomaCellLines Yoga,z,啪,Xueso~咖 (DepartmentofImmunology,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xiran ,7t0032) l23456 AbStractHereweanalyzedtheexpressionof,v~omesur~,~eemarkersonEBvirus(EBV)transformed Blymph(Jblastoidcells(LCLs),humanB—lymphocytehybridomacellline sandtheirparentmyeloma celllinesusinlgalkalinepl10sph&ta辩一 anti—alkalinephosphatone(APAAP)immunocytochemis~rytcch nique.TheresultsdemonstratedthatthesurfacemarkersonhumanBlymphocyteschangedalotafter EBVtransformationorhybridization.Thus.analysisofsurfaoemarkerscouldbeusefulforexploring thenature0fchrom~omesretainedorlostinhumanBlymphocytcsduringtheprocessesabove.More 0vet,LCLsandhumanB~lymphocytchybridomacelllinesprobablyWerepotentialmodalsforstudying diffcrentiationandfunctionsofhumanBlymghoeytes. Keywordssurfacemarker;humanB—lymphocytcllybridomatAPAAP (收稿1995一(13—10) 小鼠循环可溶性CD44的特点:其水平受机体免疫状态 和肿瘤生长情况的影响(文摘) 近年来.可溶性细胞日子受体和可溶性 细胞粘附分子的研究越来越受到人们的关 注.CD44分子在许多生理过程中起着重要作 用,作者建立了小鼠可溶性CD44(sCD44)可 重复的定量分析模型,旨在进一步研究 scD4在体内的作用. 应用ELISA检测小鼠血清中sCD44,发 现它在小鼠血清中含量丰富,但在不同品系 的正常小鼠中其值有一定的变异(0.9至 2.10~/m1).免疫沉淀和SDS-PAGE法进一 步分析发现,已至少有3种不同形式的特异 性sCD44,其中最主要的为85,90KDa scD4.不论是从正常的还是转化的淋巴细 胞中,均可提取获得这种形式的CD44.电泳 的迁移性上与sCD44无明显差异,但在神经 氨酸酶加D一糖甙酶处理后,从淋巴细胞膜 上提取的CD44与循环中sCD44的电泳泳动 结果不同,后者的核心蛋白较前者约小为17 , 20KDa.针对CD44胞浆氨基酸残基的抗 体并不能识别循环或淋巴瘤培养上清中的 sCD44.这些观察与细胞表面CD44的清除相 一 致,在此过程中跨膜CD44将切除其胞装 区.而蛋白酶抑制剂可减慢培养的淋巴瘤细 胞上CD44的脱落过程. 免疫缺陷的CB17,SCID和BALB/cXid 小鼠的血清中sCD44水平显着降低,而荷瘤 小鼠中则明显升高与BXSB和MRL/1pr品系 小鼠中发生自身免疫性疾病的情形一样.发 生中度移植物抗宿主反应(GVHR)的小鼠血 清中的sCD44显着升高血清中高浓度的 sCD44可部分阻断透明质酸hyaluronate与 CD44阳性淋巴瘤细胞的结合,其抑制程度 与s<:D44的浓度呈正相关. 以上结果提示.血清中含量丰富的 sCD44是来自于细胞表面CD44的脱落,而 这一过程明显受到机体免疫系统活性和是否 有肿瘤生长等情况的影响.本文为临床提供 了一种极为有用的疾病指征. (赵茜摘译垒伯泉审校)