[doc] ^51Cr标记法测定红细胞寿命的应用现状
3Cr标记法测定红细胞寿命的应用现状
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[2述山东省立医院内抖孔宪云守拉
1919年. II竹建立丁定扛细胞(R母c)寿命
的鉴别凝集法.从而使』,们对R烈:动力学有了较多
的了解.但莰法操作繁杂.难以在临床推广.J950
年,G加y和Sterl~g报告了用cr标记(cr—R烈:)测
定R?:寿命的方法,该法不仅操作简便.而且能同
时测定R麒:破坏郭位和血容量.对溶血性贫血(HA)
和其他一些疾病的诊断具有重要意义,因而引起人
们极大的兴趣,相继开展了有关方法学及其临床应
用的广泛研究.国际血液学标准化委员会(tCSH)于
1980年召开专
会议.统一了用Cr-RBC溯定R麒:
寿命的方法学及指标的正常值,促进其在临床上的
推广应用”].
一
,常用指标和正常值
0标记法测定R麒:寿命的常用指标有RBC
表观半寿期(erytllr~yt~a~tenthalf?limesurvival+
RBC-T)和RBC平均寿命(嗍cellli向J】,
McL).前音正常值为28天.后者为1204-J5天:.
0半衰期27.7天.适于R麒:寿命检查.0
标记法属随机标记法.D缺乏症和各胱甘肽合成酶缺乏症.R麒:寿
命得以改善.Ben~amtn报告用甘油醛(g】y.erayde)
治疗镰状细胞贫血.延长了RBC寿命D].R且c寿命
改善与否是评价治疗NA新药的可靠的客观指标.
NA病人的脾切棘手术效果同佯可用R卫c鼍命
改善与否加以评价.Ahu根据肝肆区体表计啦有关
指标决定脾切除手术指征.选择了J8倒符合指征的
HA病人.术前测定ItBC寿命均明显缩短,术后复
查.结果显着延长.证明根据体表计数决定手术指征
是可信的.
(三)溶血机制的研究
R烈:寿命测定不仅在HA的诊断和治疗上具有
实用价值.而且还可用来探讨溶血机制.M~gnanl用
“0一RBc研究十体年龄对R?:寿命的影响.芨现成
年老鼠R麒:寿命缩短,而R麒:压积正常.主要是通
过加强造血来代偿R卫c寿命的缩短_{j.R烈:膜唾液
酸与RB(:寿命的关系不甚清楚.热而有证据表明老
化RBC的膜唾液酸含量减少.Dur~her证实.用神
?224?
经胺酶(neurarninlda.se)去昧膜唾液酸后测定RBC寿
命缩短.提示该物质的减少是RBC破坏的一种机
制.al1ane观察到高胆固醇饮食造成高胆固醇血
癌同时发生了HA,认为RBC-T明显缩短是由于膜
磷脂含量减少,变形能力下降.易在脾内破坏
众所周知,脾脏是I生理性破坏的主要场
所Ferrant研究RBC的脾内通过时问(intrasp[enic
transittime,s不)与RBC寿命的关系,结果发现HA
病人中两者呈匣比关系(r__u-096),sTT越长,
MCL越短,提示sTT是反映HA病人脾脏破坏RBC
功能的一项有意义的指标].
三,血库工作和免疫血液学
自Cr-RBC测定RBC寿命的方法建立以来,用
f研究RBC体内相容性试验一直是广太输血工作
者和血液学家f『1敏感*趣的课题...在没有该浩时,
用常规方法配合血液辖注后的效果观察只能根据有
无明显的溶血性输血反应和病人症状的改善与否等
临床征象来粗略了解.Pin~la应用”0-RBC直接而
清楚地显示了辖注的供者RBC在受者体内的存活
时间有些贫血病人困反复输血等原因.件内产生了
多种抗体,使配血发生困难.甚至有时用常规配血方
法找不到相容的供血者.在这种情况下Cr—RBC特
驯有价值.可用来选择括注后能存活某一允许时问
的相xttt~容的供者血液.既可满足临床需要,叉能避
免严重的溶血反应_8]
RBC寿命测定昧用来帮助配血之外,对于血液
阼存和保养液的研究也有价值.关于库存血的冷
冻保存时间,常规标准是不超过6天ll.然而有些
时候需要冷冻保存6天以上,倒如某些需要输洼自
体血的情况.Rathbun研究了在AS-3营养液中库存
42天后叉冷冻保存8周的血液输注后的RBC存活
辜.结果表明.AS一3保养血液在42天之内任何时间
皆可冷冻保存以备所需,其RBC输注后的存活率完
全令人撼意.
RBC寿命测定对于免疰血液学的研究也很有
刚.Panzer现察了因妊娠或辖血而在RBC上表达的
HLA抗原对RBC寿命的影响.十q自l倒MCL均缩
表明HLA抗体可造成RBC打i,0缩短.Contrer~s
参考
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:2刈米重夫临睐放射线l986.31(3);9
[3Ben:~mLJ.?其中脾破坏增加者占52,2.原因可
能有RBC本身质量低和单核巨嘴细胞系统对RBC
过度清除.Lhatula观察MDs病人的眦寿命,发现
比正常人缩短-.还有人测定自血病病人的RBC寿
命,结果也有缩短.
Akmal测定慢性肾衰病人的RBC寿命,结旱显
示RBC—T显着缩短.其原因与继发性甲状旁腺功
能亢进,甲状旁腺激素水平增高有关.Kl1~na测
定先天性心脏墒患儿的RBC寿命,结果正常,认为
左一右分流的先天性心脏病与明显的溶血无关.
近午束.RBC寿命作为一项指标已应用于许多
学科的课题研究.Tatmk研究体外循环对RBC寿命
的影响.结果MCL缩短,证实体外循环对RBC确有
损伤.Ray探讨外科大手术中输注自体血的方法,显
示墒注的RBC寿命正常,认为该法安全实用,既降
低了对供者血的需要,叉减少了宿主抗移植物反应
和疾病传播【?.Sornchai发现患疟疾者愈后RBC寿
命仍短,茸机制并非由抗体或朴体介导,可能是疟原
虫感染非持异性激活了阿状由皮系统所致[“].
结语
如上所连,RBC寿命测定当前已广泛应用于溶
血性疾病的诊断,贫血原因不明时的鉴别诊断,溶血
机制的捐{讨,HA病人药物治疗和手术治疗的敛果观
察,血库工作和免痤血液学的研究,以及其他许多学
科的研究,且新用途也处于不断的探讨中.cr标记
法测定RBC寿命较为简便易行,RBC寿命测定为血
液学和他许多学科提供了一项有意义的指标Ch-
标记法测定RBC寿命的不足之处为需刚梭素,需撤
体内试验和存在生物差异,cr还有逸脱.寻找非枝
索方法或体外应用枝索测定RBC寿命的试验日前
_r处于研究之中.
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人红细胞血型糖蛋白:生物化学和抗原性质
Blanchard,D
人红细胞唾藏酸糖蛋白(SGes),也叫血型糖蛋
白(GPs),可通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝腔
电泳(s噼PAGE)继以过碘酸希夫氏反应染色
(PAS)鉴定.采用Laerrtmli的不连续缓冲系统电泳,
PAS染色可检出4种GP:GPA,GPB.GPC和GPD
GPs的PAS图谱复杂,因为GPs不能被SDS充分解
离.常以二聚体(AX2,BX2)和异二聚体(A+B)方
式泳动.可用各带洗脱物的再次电泳或双向电泳分
析各募聚物的组成.
血型糖蛋白的免疫化学
血型糖蛋白的纯化
田GPs唾藏酸含量高,用有机溶剂抽提红细胞
膜时.进入水相.用于抽提的有机溶剂有多种,但其
含大部分GPs的水相中,或多或少有杂蛋白.
为了获得不古杂蛋白的GPs,并有好的回收率,
作者采用65X3的酚/盐水抽提.得到含GPs的抽提
液;按FurtIurmyr等的方法凝胶过滤得GPA,混杂有
少量GPA的GPB+GPC组分,再上阳离子高效液
牛目层析(PLPLC)柱,Naa梯度洗脱.GPB被0.25M
Naa首先洗脱.GPC在0.35MNaCI被冼脱.纯度在
80~85.可在表面活性剂存在下用HPLC柱凝胶
过滤进一步纯化达纯度.该法可以从一单位血
中纯化出足够量的GPB和GPC(分别为14Dnmol和
40nroo1)用于结构分析.因此适用于研究与这些分子
相关的稀有的血型变异型.因为酚/盐水抽提藏中不
古糖基化程度低的GPD,故GPD不能用此法纯化.
可用丁醇抽提和TSKG3000柱凝腔过滤层析获得富
含GPD和GPB的组分.再用制备性SDS-PAGE进
一
步纯化,获得可用于结构分析的GPD.
血型糖蛋白A的生物化学性质
GPA的坫恂GPA是主要的GP,从J单位红
细胞中可得ltamoleGPA纯品.故软早就巳测得其
131个氨基酸残基的完整序列.GPA是一种贯穿细
胞膜的蛋白质,由3部分构成,第一部分为糖基化的
膜外结掏域(1—72位氨基酸残基).第二部分为膜
中部分(73—95位氪基酸残基),第三部分为非糖基
化的胞浆内区段(93一J3J位氨基酸残基).N-末端
的膜外结构域通常连接有一个N-聚糖和J5个O
聚糖.大部分o_聚塘为四聚精,和丝氨酸或苏氨酸
相连,其结构为,唾液酸2—3半乳糖BI-3(唾液酸
葩一6)N-乙酰氨基半乳塘一丝氨酸/苏氨酸.尚有J
J5的O-聚糖为三聚糖,其结构为:唾液酸兰!半
RI?
乳糖N-乙酰氨基半乳糖一丝氨酸/苏氨酸.N1
聚糖连结于天冬酰胺.其结陶为:
唾藏酸旦半乳糖乙酰氨基葡萄锖甘露糖
lal,6
甘露糖N乙酰氨基葡萄糖卫N乙酰氨基葡萄糖
唾液酸!堡半乳塘乙酰氟基葡萄锖旦甘天酰胺
GPA的N末端结构域含肯胰蛋白酶和木瓜蛋
白酶的作用位点,但用靡蛋白酶作用完整细胞.GPA
只部分破水解.与GPD相比,GPh的C末端与膜骨
架结台较弱.
GPA的抗原性质GPA载有M和N血型抗
原.M.N抗原的结构差异在于GPAN未端的塘基
化五肽.因为大多数抗一M和抗一N抗体与抗原的结
台需唾液酸,推测M和N抗原有不同的唾液酰化
O一聚糖,M和N基因编码唾液酰转移酶.但某些抗
M和抗一N抗体与抗原的结合不需唾液酸.进而,M
和N抗原之间的差异被明确归国于J和5位氮基
酸的多态胜(M:丝氪酸/甘氨酸{N:亮氨酸/各氮
酸).
某些稀有个体表现为EI】(a一)表型,缺步GPA{
可以产生与直接针对GPA的抗-M和抗一N抗体不
同的抗体(抗一En?).其抗原结构按其对蛋白水懈的
易感性分类:En?髑,En?Fs分别被胰蛋白酶无花果
蛋白酶水解.而En?FR抵抗无花果酶的水解.免疫