[doc] 中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验
中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的
治疗试验
1062中国兽医2009年8月第29卷第8期ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.8
中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验
王春元,韦旭斌,王鲁.,王秀敏.,褚秀玲,崔小霞.,申海清(1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春
130062;2.贵州大学动物医学系,贵州贵阳550025;3.北京生泰尔生物科技有限公司,北京100000;4.山东聊城大学
动物科学系,山东聊城252059)
摘要:采用鸡毒支原体标准株感染健康的7日龄鸡毒支原体阴性鸡,用1.33‰(高剂量),0.67%.(中剂量),0.33%0
(低剂量)的果根素进行混水饮用治疗,以500rng/L的泰乐菌素饮水治疗为对照,通过治愈率,平均体质量,料肉比
和气囊损伤的减少率
其治疗效果.结果
明:高,中剂量的果根素对鸡毒支原体感染的治愈率均在96.67以
上,且能明显提高感染鸡平均增重,降低料肉比,减轻MG对气囊的损伤,作用相当于泰乐菌素.
关键词:中药;鸡毒支原体感染;治疗
中图分类号:$852.62文献标识码:A文章编号:1005—4545(2009)08,
1062—04
ExperimentalstudyoncuringMycoplasmagallisepticuminchickensbyusing
GuogensuofChineseherbmedicine
WANGChun—yuan,WElXU—bin,WANGLu,WANGXiu—min.,CHU
Xiu—ling,CUIXiao—xia.,
SHENHai—qing(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,JilinUniversity,
Changchun130062,China;2.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang550025,
China;3.BeijingCentreBiologyCo.,Ltd,Beijing102206,China;4.CollegeofAnimalScience,
LiaochengUniversity,Liaocheng,Shandong252059,China)
Abstract:ToobservethetherapeuticefficacyofGuogensu(GGS)onchickenartificiallyinducedbyMycoplasma
gallisepticum(MG).Seven—day-agechickenwhichwerehealthyandhadno
MGinfectionhadbeeninfectedbyMG
typestrains.andweretreatedwithGGSof1.33%.(highdose),0.67%0(middledose)and0.33%0(1owdose)through
drinkingwithwater,500mg/Ltylosinwasascontro1.ThetherapeuticefficacyofGGSwasevaluatedthroughcure
rate,meanweight,feedconversionratioandballooninjury.Thecureratesofhi
ghdoseandmiddledoseGGSwere
96.67,andobviouslyelevatedmeanweightofinfectedchickenanddegradedf
eedconversionratioandlessenthe
ballooni~urybyMG,indicatingthatGGSeffectwascorrespondedtotylosin.
Keywords:Chinesetraditionalmedicine;Mycoplasmagallisepticuminfecti
on;treatment
*C0rrPsDgauthor
鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepticum,MG)
感染是以咳嗽,流鼻液,喷嚏,气管哕音和全呼吸道
炎症为临床特征的传染病,临床上被称为鸡慢性呼
吸道病(Chronicrespiratorydisease,CRD).本病
广泛分布于世界各国,在我国的感染率也很高,部分
地区可达75以上口],给各国养禽业带来巨大经济
损失,所以世界上许多国家都很重视该病的研究.
为了寻求安全有效的抗CRD的中药,去试验拟观察
果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡治疗的有效性及
收稿日期:200803一lO
作者简介:王春元(1982一),女,硕士.
*通讯作者
安全性
1材料与
1.1标准菌株及诊断试剂鸡毒支原体BG44T
株,鸡毒支原体血清平板凝集抗原及标准阳性血清
(批号:200401),购自中国兽医药品监察所.
1.2试验药品果根素是由纯中药制成的口服液,
由北京太空城生物科技有限公司2007年3月16日
生产,批号:07030161,成分:板兰根,合成牛黄,甘黄
等中药组成:i00mL/瓶,每毫升相当于生药3g;酒
石酸泰乐菌素可溶性粉,石家庄征宇动物药业有限
公司生产,批号070721,每毫克含泰乐菌素800单
位.
中国兽医2009年8月第29卷第8期
ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.81063
1.3培养试剂PPLO基础培养基,BD公司产品;
酵母浸出物,OXoID公司产品;醋酸铊,Sigma公司
产品;NAD,Genview公司产品,北京鼎国生物公司
分装;马血清,自制:其他均为国家分析纯试剂.
1.4试验动物240只1日龄海兰褐蛋鸡,购自长
春市北方种鸡场,未经MG疫苗免疫,饲喂至713
龄,经血清学检测为鸡毒支原体血清学阴性,取3O
只用于临床药物安全性试验,剩余210只用于鸡毒
支原体感染的治疗试验.
1.5主要仪器CO培养臬,型号:MCO一17AI,13
本三洋公司;高速冷冻离心机,型号:KUBOTA
7930,日本久保田;普通光学显微镜,日本OLYM—
PUS.
1.6临床用药安全性试验取30只7日龄海兰褐
鸡公为3组,每组10只,分别以0.25,0.5,1mL/只
(相当于生药量0.75,1.5,3g/只)的剂量灌服果根
素,2次/d,连用5d,每天观察并记录鸡的临床表
现,5d后每组任选5只剖检,观察内脏变化.
1.7病理模型的复制
1.7.1MG的复壮,分离及攻毒菌液的制备24h
在液体培养基中达到对数生长高峰期(采用毕丁仁
等[2方法测定培养物含菌浓度约为10CFU/mL)
的3代MGBG44T株培养物,经点眼,滴鼻和胸腔
注射接种于7日龄海兰褐蛋鸡,0.5mL/只,待出现
临床症状时用灭菌棉拭子擦拭鼻后裂或喉头接种于
PPLO培养基上,再纯化培养2代,收集菌体并调整
菌体密度到2×10CFU/mL用于本试验.
1.7.2试验分组与攻毒将试验鸡分为果根素高
剂量组(1.33‰),果根素中剂量组(0.67%o),果根素
低剂量组(0.33%o),泰乐菌素组,感染对照组和健康
对照组,每只鸡气囊接种MGBG44T株培养物0.3
mL,点眼滴鼻共0.2mL,健康组以生理盐水作对
照.
1.8建立诊断依据I临床症状鉴别,病理学变化和
实验室综合诊断.
1.8.1病理剖检按常规方法进行.
1.8.2病原的分离鉴定活鸡从鼻后裂,喉头取
样,死鸡从鼻腔,眶下窦,气管或肺采样接种于PP—
LO液体培养基中,依次1O倍稀释至10一,密封,
37?培养,同时接种于固体培养基上进行培养,纯化
和鉴定.于37?,含5CO,80,909/6的相对湿
度培养箱中培养.每天检查液体培养基酸碱度,发
现pH值变化后立即接种于固体培养基中培养,如
经3,5d仍未出现颜色变化,则要传代,盲传5代
后仍无变化者弃去.固体培养基上的菌落隔3d用
低倍显微镜观察1次,1周后仍无可疑菌落者弃去.
取典型菌落在液体培养基中扩大培养,进行生物学
特性观察.生物学特性的观察方法为:将分离的纯
培养物涂于载玻片上,瑞氏染色,油镜下观察菌体形
态;将纯培养物在不加青霉素和醋酸铊的液体培养
基中连续传5代,接种于固体培养基上,观察菌落形
态,进行Dienes染色[2,观察结果;取经洗涤调整为
0.3的鸡红细胞生理盐水混悬液注入菌落发育的
培养皿中,室温作用15min,用生理盐水冲洗3次,
40,100倍光镜下观察.
1.8.2血清学诊断感染1周后每组抽10只鸡采
血作血清快速平板凝集试验,做进一步确诊.
1.9治疗接种后用果根素实施治疗,以泰乐菌素
作为对照药物,剂量分别为:高剂量1.33‰,中剂量
0.67‰,低剂量0.33‰,泰乐菌素组500mg/L,兑
水后让患鸡自由饮服,连用5d,药液每天配换1次,
停药后观察21d.
1.10疗效评价记录各试验组鸡的病死数,治愈
数,初体质量,末体质量和饲料消耗量,计算病死率,
治愈率,平均增重和料肉比,以统计学方法比较各组
问的差异.试验结束时每组抽10只鸡剖检做气囊
损伤计分,评价气囊损伤率,计分方法参照文献E33
计分标准,将气囊病理损伤分为5级:
0级,气囊正常,薄而透明;
1级,气囊仅有稍增厚的灰色区或黄色渗出斑
点;
2级,部分气囊易见到灰至黄色渗出,有时出现
泡沫,气囊增厚;
3级,大部分气囊增厚,布满大量黄白色干酪
物;
4级,几乎整个气囊布满黄白色干酪样渗出物,
气囊严重增厚.
鸡平均气囊病理损伤度(计分):所有鸡气囊损
伤度总和/被检鸡数.
气囊损伤减少率一(感染对照组每只鸡气囊损
伤平均分一试验组每只鸡气囊损伤平均分)/感染对
照组每只鸡气囊损伤平均分.
2结果
1.1临床药物安全性试验结果3组试验鸡精神
状态均良好,饮食欲正常,试验期间未出现临床症
状,每组随机抽5只进行剖检,未见异常.结果表
明,使用0.67%o的15倍(1.005)剂量果根素兑水
饮用5d对鸡安全.
2.2病理模型复制感染对照组鸡于接种后第2
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ChinJVetSciAug.2009Vo1.29No.8
天部分鸡表现精神不振,食欲减退,羽毛松乱,第5
天个别鸡出现甩头,喷嚏症状,在接种后第7天普遍
出现呼吸困难,喷嚏.死亡鸡剖检,气囊增厚,浑浊,
内有少量黄白色干酪样渗出物,部分鸡喉头,气管积
有粘液,气管粘膜充血,出血变化.从感染鸡的喉
头,气管和肺脏中分离出微生物,经生物学特性鉴定
完全符合MG的生物学特性;对感染7d后鸡,采血
进行鸡毒支原体平板凝集试验,结果呈阳性,证明感
染成功.
2.3实验室诊断从感染鸡喉头,气管和肺脏分离
病原,对分离物进行纯化,涂片瑞氏染色,油镜观察
可见典型的球形菌体(图1A);分离物在不加青霉素
和醋酸铊的培养基中连续传5代,再接种到固体培
养基上,可见典型的”煎蛋样”菌落(图1B);用
Dienes染色法染色,菌落边缘呈淡蓝色,中央隆起
部呈深蓝色,且在30min内不退色(图1C),可以排
除L型细菌;菌落吸附鸡红细胞试验结果显示,在
低倍镜下可见菌落周围吸附了大量的红细胞(图
1D).试验结果表明,分离物生物学特性与MG相
吻合.
对感染7d后鸡进行血清平板凝集试验,结果
呈阳性.通过综合诊断结果证明,感染成功.
2.4治疗结果各用药组在开始用药的第2天症
状有所缓解,病鸡饮食欲增加,精神状态好转,第3
天大部分鸡呼吸困难和下痢症状减轻,部分鸡症状
消失,到第5天饮食欲,精神状态好转,呼吸困难和
下痢也基本消失,1周后,病鸡恢复正常.
2.4.1治愈率,平均体质量和料肉比试验结果显
示,果根素高剂量组,预防组和泰乐菌素组病鸡完全
成活,而中剂量组的成活率高于96.79/6,明显高于
感染对照组和低剂量组(90).感染后第7天,感
染组平均体质量显着低于健康组(P<0.05),其余
各组间差异不显着(P>0.05);感染后第2l天,果
根素高,中剂量组,泰乐菌素组和健康组间平均体质
量差异不显着(P>0.05),但显着高于果根素低剂
量组和感染组(P<0.05),果根素低剂量组显着高
于感染组(P<0.05).料肉比以感染组最高
(2.36),各用药组与健康组相当(表1).
图1MG形态及部分生物学特征A.鸡毒支原体光学显
微镜下瑞氏染色(1000×);B.光学显微镜下鸡毒支
原体菌落形态(100×);C.光学显微镜下鸡毒支原体
的菌落形态(Dienes染色)(100×);D.鸡毒支原体菌
落吸附红细胞(100×)
表1果根素对鸡毒支原体感染的治疗效果
注:大写字母不同表示组间差异显着(P<O.05)
2.4.2气囊损伤情况试验结束时每组取10只
鸡,剖检观察气囊病变,作气囊损伤记分,计算气囊
损伤减少率.
从表2中可以看出,2种药物均能降低MG对
鸡气囊的损伤,其中以中剂量的果根素和泰乐菌素
作用效果最佳,气囊损伤减少率均为81.3.
3讨论
通过果根素对鸡毒支原体感染的治疗结果可以
表2毒支原体感染鸡气囊的病理损伤(n一10)
看出,在治愈率方面,高,中剂量的果根素与泰乐菌
素作用相当,明显高于低剂量组;感染后21d平均
(下转1084页)
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体GH和PRL的调节途径来影响奶畜的泌乳活动,
其详细的调节作用有待于进一步研究.
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(上接1064页)
增重显示,各用药组虽低于健康组,但显着高于感染
组(P<O.05),说明果根素和泰乐菌素能显着改善
因感染造成的增重迟缓.在感染后21d剖检发现,
用药组气囊病变较感染组轻,说明药物能阻止或减
轻支原体对气囊的损伤,其中以中剂量的果根素和
泰乐菌素作用效果最佳.综合以上结果,果根素高
剂量对降低感染鸡的死亡率优于中剂量,但感染后
21d平均体重和气囊损伤减少率等方面与中剂量
果根素相当,考虑到实际养殖中用药成本的问
,因
此
使用0.67Z0作为果根素治疗鸡毒支原体感
染的剂量.
鸡毒支原体感染在中兽医属外感火热之邪或风
寒之邪,郁而化热,肺气宣降失常范畴.肺脏积热,
煎津成痰,阻于气道,肺气不利,故咳嗽气喘,鼻流稠
涕.因此用清肺降火,化痰止咳方剂治之.
本中药依据中兽医对鸡毒支原体感染进行分析
进而成方,其方剂组成为板蓝根,合成牛黄,青黛,冰
片,玄明粉,猪胆汁粉和甘草.方中板蓝根,青黛具
有清热解毒之功;牛黄清热解毒,化痰开窍;冰片散
热利咽;猪胆汁清热解毒,清肺止咳;玄明粉解毒消
肿;甘草具有补脾益气,润肺止咳,清热解毒,调和药
性之功.诸药合用,共达清热解毒,止咳平喘之效.
大量药理实验表明,这些药物中大多数均有较强的
抗菌消炎,抗病毒,抗过敏功能,还能提高机体免疫
力等功能.一
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