原代细胞分离技术原代细胞分离技术
原代细胞分离技术
3取人或动物体内(或胚胎)的组织,将其剪碎至1mm的组织块,再采用的如下方法进行分离培养:
一、悬浮细胞的分离方法
1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。
2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。
3、用培养基重悬,调整适当细胞浓度后分瓶培养。
4、如选用悬液中某种细胞,可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
(一)机械分散法
1、纤维成分很少的...
原代细胞分离技术
原代细胞分离技术
3取人或动物体内(或胚胎)的组织,将其剪碎至1mm的组织块,再采用的如下
进行分离培养:
一、悬浮细胞的分离方法
1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。
2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。
3、用培养基重悬,调整适当细胞浓度后分瓶培养。
4、如选用悬液中某种细胞,可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。
二、实体组织
的分离方法
(一)机械分散法
1、纤维成分很少的脑组织,部分胚胎组织,用剪刀剪碎至1mm3的组织块。 2、用PBS清洗两次后
?用吸管吹打,分散组织细胞。
?或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内(用九号针),使细胞通过针头压出。 ?或在不锈钢纱网内用钝物(注射器钝端)压挤使细胞从网孔中压挤出。 3、收集细胞转入离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。
4、去上清,加入含血清的培养基,重悬后移至培养瓶中培养。
(二)消化分离法
1、酶消化分离法(过夜冷消化法)
?细胞间质较少的软组织,如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等,用Hanks液清洗组织三次,剪成碎块大小为4毫米左右。
?再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪组织。
?加入0.25%的胰蛋白酶,摇匀后放4?过夜。
?次日再用Hanks液洗涤,弃去上清,共洗2-3次。
?加入少量含血清的培养基吹打分散,细胞计数,按适当的浓度分瓶培养。
www.pricells.com.cn
2、非酶消化法(EDTA消化法)
?把组织块剪碎,呈1mm3大小的组织块。
?将碎组织块在平皿中用无钙镁PBS洗2-3次。
?加入消化液(胰蛋白酶或胶原酶或EDTA)于37?水浴中作用适当时间(中间可轻摇1~2次),若组织块膨松呈絮状可终止,若变化不大可更换一次消化液,继续消化直至膨松絮状为止。
?弃去上清,加入含有钙、镁离子的培养基中止消化反应,并洗涤2-3次后,加入完全培养基。
?用吸管吹打,使细胞充分散开后用纱网过滤后分瓶培养。
PriCells 提供:
1. 各种原代细胞特制基础培养基;
2. 各种原代细胞培养特制添加剂;
3. 原代细胞分离试剂盒;
4. 原代细胞鉴定试剂盒;
5. 原代细胞转染试剂盒;
6. 原代细胞总蛋白质抽提物;
7. 原代细胞总RNA;
8. 原代细胞总DNA;
www.pricells.com.cn
本文档为【原代细胞分离技术】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑,
图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。