【doc】国人ACE基因插入／缺失多态性分析及与血清ACE水平的相关性

【doc】国人ACE基因插入／缺失多态性分析及与血清ACE水平的相关性 国人ACE基因插入,缺失多态性分析及与 血清ACE水平的相关性 第 Acad 军医大学学 l997A门8(4):337~339AcadJSecMilMedUaug;v…………?337? 弓7一;;7 国人ACE基因插入/缺失多态性分析及与血清ACE水平的相关性 谈红张国元黄超V吴宗贵黄佐7,牛 摘要目的:词查中国人血管紧张素转换酶(ACE)基因的插人/缺失多态性分布与及 血清ACE水平的相关性.方法:采用多 聚酶链反应方法测定了63例健康中国人ACE基因型,同时采用微量比色法测定 其血清ACE水平=结果:中国人中ACE基 因DD型占20.6,DI型占46.1,II型占33.3,D与I等位基因出现频宰分别为0.44和 0.56.ACE基因多态性与血清 ACE水平密切相关,插人/缺失多态性可解释55的血清ACE总变异.结论:DD型 ACE基因可能通过影响ACE水平而导 致冠心病发病,为蛄床ACE抑制剂应用提供新依据. cE PolymorphismanalysisofACEgeneinChineseanditsrelationwith serumACElevel TanHong,ZhangGuoyuan,HuangChao,WuZonggui,HuangZuo (DepartmentofCardioVaso1ogy,ChangzhengHospital,SecondMilitary MedicalUniversity,Shanghai,200003) AbstractObjective:T0determineangiotensionconvertingenzyme(ACE)geneinsertion/de letion(I/D) polymorphismdistributioninChineseanditsrelationwithserumACEleve1.Metbods:ACE genotypeof 63healthyChinesewasdetectedbyPCRmethod,andserumACElevelswereconcomitantlymeasuredby microcolorimetricassay.Results:DDgenotypeofACEgeneinChinesewas2O.6,D1genotypewas 46.1andIIgenotypewas33.3.Allelefrequencieswere0.44fortheDalleleand0.56forthe1allele. TheI/Dpolymorphismaccountedfor55ofthetotalvarianeeofserumACE.Conclusion:DDgenotype ACEgenemightresultinpathogenesisbyinfluencingACElevel,andthenewbasisofclinicalusageof ACEIlsprovidedinthisstudy. Keywordsangiotensinconvertingenzyme;genepolymorphism;genetics 血管紧张素转换酶(ACE)在肾素血管紧张素 系统中具重要作用.它可促进血管紧张素?的产生 和缓激肚的降解,而后两种多肽在血管张力的诃节 和血管平滑肌细胞的增生中起作用,影响动脉粥样 硬化形成的过程.目前对ACE的研究已深入到分 子水平.内皮ACE和睾丸ACEeDNA先后被克隆, ACE基因结构得以阐明-.近年发现位于人类ACE 基因16内含子,涉及一段287bp片段的插入/缺失 (I/D)多态性.我们对中国人ACE基因I/D多态 性与血清ACE水平的相关性进行了分析研究. 1材料和方法 1.1样本选择63名健康个体来自本院1996年 1b月门诊健康查件者.男36人,女27人,平均年龄 53.6岁.健康诊断:体重指数(BMI)<28kg/ m. ,收缩压<18.6kPa,舒张压<12kPa,三酰甘油 <1|8mmo!/L,总胆固醇<5.85mmol/L,总胆红 素2,18ttmol/L,丙氨酸氨基转移酶<40U,空腹 血糖3.9,6.4mmol/L,胸部X线片,腹部B超及 心电图检查均正常. 1.2血清ACE测定取外周静脉血2ml,2000 r/rain离心10rain,取血清于一20?冻存.1周内检 测.ACE测定采用微量比色测定法.以马尿酰甘 氨酰甘氨酸为底物,反应产物马尿酸用乙酸乙酯萃 取后,以乙酸酐和对二甲氨基苯甲醛(DAB)吡啶溶 液显色,在458nm处比色.所用试剂HGG,HEPES 作者单位第二军医大学长征医院心血昔内科,上海, 200003:?第二军医大学长征医院实验谚断科 谈虹,女,l967年8月生,硬士,住院医师,现在挤南军区总 院心血管内科,挤南,250031 , 一 , \ ? 338?第军厦大学1997Aug;18(』 购自Sigma公司,DAB,马尿酸,吡啶,乙酸乙酯等 为国产分析纯.一个ACE活性单位定义为在37? 下,每分钟每毫升血清酶反应产生lnmo[马尿酸. ACE活性一—(D— T-- —— D T, e)~76— . — 62 D,D.,Ds分别为测定管,空白管及标准管在 458nm处D值 1.3AcE基固WD多态性检测取外周静脉血1 mI,15EDTA抗凝,一20C冻存.按分子克隆常 规方法抽提白细胞染色体DNA.目的片段扩增参照 Rigatl2设计一对引物: j'CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3' 5'GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3' 反应体系pH8.0,含引物0.5m0l,Tris10 mmol,KCl50mmo[,Mg2.5mmo[,dNTPs200 nlol,Taq酶(购自华美生物工程公司)50U/1O0l, 反应终体积2Ol,用PE9600PCR扩增仪进行扩 增98?预变性5rain,DNA扩增35个循环,设置 93?变性30s,66C退火和延伸lrnin,反应产物在 1.5琼脂糖凝胶上电泳(50mV,20rain),PCR marker(购自华美生物工程公司)作为参照,进行多 态性分析.反应产物为缺失插入片段的190bp的片 段(D等位基因)及含插入片段的490bp的片段(1 等位基因),产生3种基因型:Dr),DI及I1. 1.4统计学处理数据以=示,各基因型问 ACE活力比较采用方差分析,其他各临床指标比较 采用f检验. 2结果 2.1多态性分析结果ACE基蹦I/D多态性分 布:DD型13例,占20.6;DI型29倒.占46.1; 11型21例占333.D与1等位基因出现频率分 别为0.44与0.56(附图) 一 490hp 一 49900 一 】9,ap 附图ACE基因插入,映失多态性分析 FigACEgeneinserlion/delelionpo1.vmo]'Phismanalysis 2.2不同ACE基因型血清ACE活力及临床指标 的变化3种基因型间年龄(Age),收缩压(SBP), 舒张压(DBP),胆固醇(Ch),三酰甘油(TG),血糖 (Glu)等指标平均值无显着差异(P>0.10.而血清 ACE水平与ACE基因多态性显着相关(P<0. 001)3种基因型中,DD型个体ACE水平最高,D1 型者次之,I1型者最低(附表).全部63例样本平均 血清ACE活力为76.30U,不同ACE基因型之间 血清ACE活力差值42.0U,ACE基固插入/缺失 多态性可解释5的血清ACE总变异. 附表不同ACE基因型血清ACE活力及临床指标的变化 TabChangesofserumACElevelandotherclinicaldamindifferentACEgenotype 士 3讨论 血液循环中ACE可能来源于血管内皮细胞循 环ACE分泌的生化机制不明,有疏水端的蛋白裂解 及膜连接酶的被动裂解等几种假说血清ACE重复 测定时保持高度稳定性.但个体间差异很大.本研究 发现在3种基因型个体间,血清ACE水平有显着差 异,DD型ACE水平最高,杂台子次之,I1型最低.遗 传效应可解释55的血清ACE总变异. 本研究结果提示中国人D和I等位基因出现频 率分别为0.44和0.56,与白种人中调查结果近似但 略有差异].近年来国外许多研究发现ACE基因I/ D多态性与多种心血管疾病有关.有报道冠心病,原 发性扩张型心肌病,经皮冠状动脉成形术后再狭窄 第二医太学17AugIl8【4?339? 发生及原发性高血压人群中DD基因型发生频率显 着升高n.基因多态性与血清ACE的相关为上述 发现提供一种可能的解释ACE可使血管紧张素I 转变为血管紧张素?,后者是一种强效收缩剂.并可 刺激肾上腺球状带细胞释放醛固酮,导致水钠储留. 另外,ACE还与缓激胩的降解有关.缓激肽作用于 内皮p.激肽受体刺激0产生,通过促进血管内膜 平滑肌细胞增生,过多细胞间质形成及急慢性血管 痉挛等多个环节.加速冠状动脉粥样硬化进程.DD 基因型对血清ACE水平有影响.并与冠心病,心肌 梗塞相关,因此对人群进行ACE基因I/D多态性普 查,并进行前瞻性研究和ACE抑制剂干预,对提高 冠心病,心肌梗塞的防治水平可能有意义 参考文献 HubertC,HouotAM,Corvo]PalStructureoftheangioteasin 1一convertingenzm….JBiochemt1991L266(23)}15377 2RtgatB,HubertC,Coro[Pal deletionpolymorphismofthe enzymegene.NuelelcAcidsRes- PCRdetectionoftheLnse~ion/ 第二军医夫学1997Aug{18(4):339 3李少华,是中讧.血清皿管紧张翥转化酶的散量比色测定法第二 军医丈学,1986I7(6):437 dMalluRK,NeedhamEWA.GabonDIalADNAvariantatthe arterydiseaseintheCaerphiliyHeartStudy.Circulation.1g95:g1 (2):270 5WangXLtMcCredieRM.WilckenDF[,Genotvpedistributionol andcoronR~yarterydisease.Arteriosc[erThrornbVascBiol,1q96} 16(1):115 6Y0neyaK.OkamotoH,MachideMa1.Angimensin—converting e~ymegenepo[yrnorphlsminJapanesepatientswithhypertrophic cardiorny0pathyArnHeartJ,1995;l30(53:1089 7…BoekxmeerFM.MamottecDS,GibbonsFAet?f Angiotetminconvertingenz~'n2eandapolipoproteiaEgenotypesand restenosisa(tercoro~ryangioplasty.Circulationt1995{92(8) 2066 8MoriseT,TakeuchiY,TakedaRAngiotensinconvertingenzyme polymorphismandessentia[hypertensionLancett1994{343【8): 】25 (1997—02—27收稿,l鲫7,06—15修阿) (车文编辑刘跃 骨盆肿瘤切除同种异体半骨盆置换一例报告 蔡郑东顾雄华孙庆斌吴岳嵩 1临床资料患者.男,38岁.因右髋部疼痛2年,加重伴 活动受限8个月于1996年4月24日^院.患者自1994年2 月起无明显诱固感觉右侧髋部酸胀不适,以臀部负重时为 甚近8个月来右侧髋痛加重.伴右髋关节屈忡不便一无发 热.检查:一般状况良好.心肺检查无异常.骨盆无畸形右 侧会阴部饱满.可触及约8cm×8cm×l0cm肿块,较固定, 质地偏硬,边界不清.有压痛;右髓关节活动受限.屈忡10. 内旋20.外旋正常.x线片示右侧坐,耻骨,髋臼广泛性破 坏.CT示右侧坐,耻骨膨胀破坏改变.伴7cm×7cm×9cm 软组织肿块.诊断为右侧骨盆软骨肉瘤或骨巨细胞瘤". 1996年5月8日全麻下行右侧半骨盆肿瘤切除同种异体半 骨盆置换术.供体准备:无菌条件下取意外死亡健康』,右侧 半骨盆,一158C液氨保存,直线加速器20kGy照射l0rain, 1:1000新洁尔灭浸泡24h备用.手术取右侧Smith— peterson切I=I和右大腿内侧基底部弧形切E1.于右髋臼上缘 切断骨盆,完整切除右侧骨盆肿瘤,置^异体半骨盆,螺丝钉 和克氏针固定手术顺利,术中出血约3800ml,术后切口一 期愈合,行右下肢皮牵引8周.病理诊断为恶性组织细胞瘤, 故定期行大剂量化疗.随访1年余,现患者一般状况良好,生 括自理,能不扶拐行走(跛行).右髋屈7O.外晨3O.,后伸 3O.,内外旋转40,无肿瘤复发现象.无排异反应; 2讨论骨盆肿瘤在临床上并不少见,尤其是累及髋臼 的骨盆肿瘤,但处理较为困难.半骨盆肿瘤切除髋关节旷置 术易引起肢体短缩,关节疼痛可调式人工半骨盆假体置换 术,因假体设计和材料的缺陷,疗效欠满意为此,我们在进 行了100余例异体半关节置换和10余例^工半骨盆假体置 换的基础上.设计了半骨盆肿瘤切除,同种异体半骨盆置换 术.术前以直线加速器照射,达到减轻抗原性和灭菌的作 用.手术既切除了肿瘤,又保持了髋关节的完整性.术后患肢 功能恢复较满意.国内至今未见异体半骨盆置换报道.本手 术为骨盆肿瘤的治疗提供了新的有效方法 美键词骨盆肿瘤;异体骨穆值 中国图书资料分类法分类号R738105 (】997—01—25收稿.1997—04—10修回) (率文编辑刘既) 作者单位第二军医大学长海医院骨科,上海200433 蔡郏东,男,1961年10月生.硕士主治医师