肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制
肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的
研制
第15卷第3期
2002年8月
同位素
JournalofIsotopes
Vo1.15No.3
Aug.2002
肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制
燕强奋,王衍真,贺佑丰,陈永利
(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京102413)
摘要:采用两株CA125单克隆抗体,一株用于".I标记,另一株包被于试管作为固相抗体,稀释卵巢癌患者腹
水制备
品,建立了双位点夹心法人血清肿瘤标志物CA125免疫放射分析法.标准曲线的最大标准点免
疫结合与零标准非特异结合之比大于100;最小检测限为1.0U/mI;批内,批间变异系数分别为4.4,
5.8和8.4,9.9;样品中加入已知量CA125测定,回收率为96.8,112.5;对含高浓度CA125
的血清样品稀释测定,结果
明
的健全性良好.38例健康女性血清样品测定值范围为2.9,24.1U/
mL;;?2s为9.6?9.6U/mI.
关键词:肿瘤标记物;CA125;免疫放射分析(IRMA);试剂盒
中囤分类号:O571.423;0611.62文献标识码:A文章编号:1000—7512(2002)03—0157-04
CA125是卵巢肿瘤等细胞上产生的糖蛋
白,亦存在于血清中.半数的一期卵巢癌患者和
90二,四期卵巢癌患者血清CA125含量升 高,而正常人血清CA125含量绝大多数低于临 界值].血清CA125含量测定对上皮卵巢癌的 诊断,监测和预后有较大价值,同时也可作为结 肠癌,宫颈癌等癌症的辅助诊断指标j.Kene— mans等使用两株针对不同位点的单克隆抗体 建立了双位点夹心法CA125免疫放射分析.目 前已有多种单抗在国外药盒中使用l_4j.本工作拟 采用两株分别针对M11和OC125位点的单克 隆抗体,以国产塑料试管作为固相材料,研制 CA125免疫放射分析药盒.
l材料和方法
1.1主要实验材料
CA125单克隆抗体由美国进口,一株识别 M11抗原表位,用于I标记;另一株单抗识别 OC125抗原表位,用于固相抗体制备,两者均为 IgG;Na.I溶液(无还原剂,放化纯度>980A) 为美国杜邦公司产品;聚苯乙烯六角试管为浙江 黄岩塑料厂产品.卵巢癌患者腹水由临床医院提 供,健康女性血清样品来自北京核工业401医 院.
1.2实验方法
1.2.1CA125单克隆抗体I标记及标记物纯 化采用Ch—T法标记,SephadexG一25柱(1cm ×25cm)分离纯化.标记率,标记物放化纯度及 比活度由纸层析法测定].用含正常小鼠血清和 0.9NaC1的0.01mol/L,pH7.5的磷酸缓冲 液将标记物稀释至工作浓度.
1.2.2CA125单抗包被管制备于12mm×
78mm聚苯乙烯六角试管中,加入以0.05mol/ L,pH7.5磷酸缓冲液(PBS)稀释的CA125单抗 溶液,每管加入CA125单抗0.5/*g,室温温育过 夜.弃去管中溶液,用0.01mol/I,pH7.5含 0.9NaC1的PBS作为洗涤液,洗涤试管一次. 各管再加入500/,I含有10g/i牛血清白蛋白 的0.05mol/L,pH7.5的PBS室温封闭3h,然 后洗涤一次,于2,8C下保存.
1.2.3CA125标准品的制备将HbsAg阴 性,含高浓度CA125的卵巢癌病人腹水以3500 收稿日期:2001122O;修回日期:20()20409 作者简介:燕强奋(1963,),女(汉族),甘肃人,研究员,免疫分析专业
158同位素第15卷
r/min离心20min,取上清液,用小牛血清将其 稀释成系列浓度,加入0.1NaN.,以进口 CA125标准抗原(Rioprocessing公司产品,Cen— tocorCA125?RIA试剂盒定值)标定,分装,冻 干,于2,8C下储存.
1.2.4不同免疫放射分析程序比较一步法分 析程序为将标准品或样品血清及I—CA125单 抗各1OOI加入CA125单抗包被管中,室温温 育20?2h后,以体积比为1:10稀释的10 mol/L,pH7.4的PBS洗涤试管2次,测量各管 放射性;二步法即先加标准品或样品血清和含 1BSA的0.01mol/L,pH7.5PBS各1OOL 于固相包被管中,室温温育20h后弃溶液,洗 涤,再加标记物和标记物稀释液各1OOL,室温 温育6h后弃溶液,洗涤,测量.比较两者的标准
曲线.另外,一步法中分别采用37C3h和室温 20?2h温育进行实验,观察标准曲线和测定值 变化.
方法学鉴定采用上述一步法分析程序. 2结果
2.1一步法和二步法对标准曲线的影响 一
步法和二步法的标准曲线比较结果列于 表1.从表1看出二者略有差异,但二者的最大 结合与非特异结合之比均大于1OO,非特异结合 均小于0.29/5,均满足临床使用要求. 2.2温育条件对样品测定值的影响
一
步法37C温育3h和室温温育20?2h 相比,后者标准曲线各标准点的结合率明显高于 前者(结果未显示),两种条件下9例病人血清样 品测定结果列于表2;两者相关系数r一0.99,相 关方程为y一1.29X一4.5.
表1两种加样程序对标准曲线的影响 标准浓度各标准点净计数率/min_. /U?mL一步法20?2h二步法2O+6h 2.3CA125免疫放射分析标准曲线
一
步法CA125免疫放射分析标准曲线示于 图1,用双对数拟合方法计算,相关系数r> 0.99.
表2温育条件对样品测定结果的影响 样品序号
样品CA125含量/U?mL_.
37C3h室温20?2h
1g(标准浓度/U?mL-)
图1CA125免疫放射分析标准曲线
2.4方法学鉴定
灵敏度:以20个零标准管的计数率平均值 +2对应的浓度为最小检测限,最小检测限为 1.0U/mL.
回收率:4份人血清样品中加入已知量的 CA125,测定结果列于表3.由表3可知本法的 回收率为96.8,l12.5.
精密度:两个质控样品多次测定,结果列于 表4.从表4看出批内变异系数4.4%,5.8%; 批间变异系数为8.4%,9.9%.
表3回收实验结果
2lO1
\
第3期燕强奋等:肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制159
表4批内,批间测定结果
健全性:两份高浓度CA125病人血清样 品,用小牛血清稀释后测定,结果列于表5.由表 5结果计算测定值和期望值呈线性相关,线性方 程和相关系数为Y一0.99x一5.15,r一0.990 (样品1)和Y一0.98X一0.68,r一0.999(样品 2).
2.5正常参考值
38例健康女性血清样品的CA125测定值 在2.9,24.1U/mI内,?2s为9.6?9.6U/ mL,和国外同类试剂盒报道[6较接近.
2.6弯钩现象
采用一步法分析程序,检测血清样品中 CA125含量,结果示于图2.由图2可知,当 CA125浓度?1900U/mL时,出现了弯钩现 象.
表5健全性实验结果
CA125含量/U?mI
稀释倍数样品1样品2
期望值实测值期望值实测值
60
50
4O
兰
_E3O
簪
2O
10
O
CA125含量/U?mLi
图2弯钩现象
3讨论
本工作研制的药盒各项技术指标(灵敏度, 回收率,健全性,精密度)均满足临床要求.采用 一
步法分析较快速方便,但当样品CA125浓度 大于1900U/mL时,出现弯钩现象,特别是当 CA125浓度大于7600U/mL时,测定值表现为 低于500U/mL(见图2),此时应采用两步法或 将样品稀释后进行测定.
不同温育条件实验结果表明,37C下温育3
h和室温温育20?2h样品测定值相关性较好
(表2),所以在用于某些筛查测定时,可采用37
C下温育3h以缩短分析时间.
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同位素第15卷
DevelopmentofImmunoradiometricAssayKit forTumourMarkerCA125
YANQiangfen,WANGYan—zhen,HEYou—feng,CHENYong—li,
(DepartmentoJ'Isotope.ChinaInstituteofAtomicEnergy,Beijing102413,China) Abstract:AtWOsitesandwichimmunoradiometricassayforquantifyingCA125inserumisdeveI—
opedbyusingtWOmonoclonalantibodies.OneoftheantibodiesislabeledwithIasatracerand
theotherrecognizingadifferentantigenicdeterminantoftheCA125moleculeisimmobilizedtOplas—
tictubesasthesolidphase.Thestandardsarepreparedfromtheabdominalfluidofovariancancer
patients.Theratioofthemaxiumdosebindingandnonspecificbindingofthestandardcurveis morethan100.Thesensitivityoftheassayis1.0U/mLandtherecoveryofaddedCA125is96.8 ,
l12.5.Theintraandinter,assayCVsare4.4,5.8and8.4,9.9respectively.The
correlationcoefficientsbetweenmeasuredandexpectedvaluesaremorethan0.99afterdilutionof
thesampleswithhighconcentrationsofCA125.Thevalueforfemalenormalsamples(一
38)is2.9
,
24.1U/mL.
Keywords:tumourmarker;CA125;IRMA;kit
专利简讯:
一
种放射性同位素镉一109的制备工艺
【公开日]2002.03.27【分类号】C22B17/00【公开号11341761
【申请号lOl131439.7【申请日12001.09.10【申请人】中国原子能科学研究院
【文摘】一种放射性同位素镉一109的制备工艺,涉及利用回旋加速器加速的质
子束轰击银靶,生
成的放射性同位素镉109的分离提纯工艺.其特征在于根据氧化还原电位原理,首
先在质子轰击过
的银靶溶解液中加入标准电极电位值大于镉离子,小于银离子的金属离子,作为镉离子的保护剂,然
后加入过量水合肼定量地还原银离子,还部分地还原加入的保护剂,使镉离子不被还原.本发明较文
献报道的用肼还原银靶溶解液中的银离子,提纯镉的工艺操作方便,流程短,银的去除率高一个量级.
(摘自《科技信息))2002年第2期)