制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112534057A(43)申请公布日2021.03.19(21)申请号201980038184.1(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公(22)申请日2019.06.05司72001代理人章敏　李唐(30)优先权数据18176433.32018.06.07EP(51)Int.Cl.C12P13/04(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2020.12.07(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2019/0646272019.06.05(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/234092DE2019.12.12(71)申请人科思创知识产权两合公司地址德国勒沃库森(72)发明人W·克勒克纳　F·贝格尔　G·耶格尔　S·克拉夫尔　G·奥夫　权利要求书4页说明书20页附图4页(54)发明名称制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法(57)摘要本发明涉及使用发酵法制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法，其中(I)在通过发酵获得的发酵液中形成的氨基苯甲酸部分地，任选由于溶解平衡而尽可能地，结合为不溶性氨基苯甲酸钙，所述不溶性氨基苯甲酸钙然后(II)独自地或作为与发酵中所用的微生物的混合物分离出来，并转化成水溶性形式并析出不同于氨基苯甲酸钙的不溶性钙盐，然后(III)通过将二氧化碳在压力下引入已脱除沉淀钙盐的水溶液而使氨基苯甲酸沉淀。CN112534057ACN112534057A权　利　要　求　书1/4页1.制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法，其包括步骤：(I) 在发酵反应器中使用微生物和钙盐发酵原，其包含至少● 可发酵含碳化合物，优选淀粉水解产物、甘蔗汁、甜菜汁、含木质纤维素的原材料的水解产物或其混合物，和● 含氮化合物，优选气态氨、氨水、铵盐、脲或其混合物，从而获得悬浮在水性发酵溶液中的混合物，其包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙；(II)(1) 从水性发酵溶液中分离在步骤(I)中获得的(1)(i) 沉淀氨基苯甲酸钙或(1)(ii) 包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，(2) 通过将含有形成水溶性氨基苯甲酸盐的阳离子和形成水不溶性钙盐的阴离子的水相添加到来自(1)(i)的经分离的氨基苯甲酸钙中或添加到来自(1)(ii)的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物中，将结合在氨基苯甲酸钙中的氨基苯甲酸根转化成水溶性形式并形成不同于氨基苯甲酸钙的水不溶性钙盐，从而获得悬浮液，其在氨基苯甲酸根的水溶液中包含(2)(i) 沉淀水不溶性钙盐或(2)(ii) 包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物，(3) 将在步骤(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与来自(2)(i)的沉淀水不溶性钙盐或与来自(2)(ii)的包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离；(III) 在大于或等于1.50巴(绝对)的压力下将二氧化碳引入在步骤(II)(3)中分离出的氨基苯甲酸根的水溶液中以析出氨基苯甲酸，从而形成含有在水溶液中的氨基苯甲酸的悬浮液；(IV) 分离在步骤(III)中析出的氨基苯甲酸，其包括降低压力以释放二氧化碳，其中获得二氧化碳含量降低且脱除析出的氨基苯甲酸的水溶液；(V) 使用在步骤(IV)中获得的二氧化碳含量降低且脱除析出的氨基苯甲酸的水溶液作为在步骤(II)(2)中加入的水相的成分；(VI) 任选将在步骤(IV)(1)中分离出的氨基苯甲酸进一步反应成氨基苯甲酸反应产物，其中步骤(VI)优选包括下列反应之一：(1) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺；(2) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着进行苯胺与甲醛的酸催化的反应以形成二苯甲烷系列的二胺和多胺；(3) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着进行苯胺与甲醛的酸催化的反应以形成二苯甲烷系列的二胺和多胺，接着与光气反应以形成二苯甲烷系列的二异氰酸酯和多异氰酸酯；(4) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着将苯胺转化成偶氮化合物；(5) 将氨基苯甲酸转化成酰胺；(6) 将氨基苯甲酸转化成导电聚合物，例如优选聚邻氨基苯甲酸。2.如权利要求1中所述的方法，其中步骤(I)中所用的钙盐选自碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧2CN112534057A权　利　要　求　书2/4页化钙、氧化钙及其混合物。3.如权利要求1或2中所述的方法，其中在步骤(II)(2)中加入的水相包含锂、钠、钾和/或铵阳离子，优选铵阳离子，和碳酸根和/或碳酸氢根阴离子。4.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中步骤(I)中的发酵不连续地在发酵周期中进行。5.如权利要求4中所述的方法，其中在发酵周期结束后，(A)通过从发酵反应器中排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液并截留悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物来进行步骤(II)(1)；通过将水相引入发酵反应器以在发酵反应器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和通过从发酵反应器中排出在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液来进行步骤(II)(3)，其中截留包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物并使其可供用于下一发酵周期；或(B)通过从发酵反应器中一起排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液与悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物并将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物在发酵反应器外与水性发酵溶液分开并再循环到发酵反应器来进行步骤(II)(1)；通过将水相引入发酵反应器以在发酵反应器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和通过从发酵反应器中排出在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液来进行步骤(II)(3)，其中截留包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物并使其可供用于下一发酵周期；或(C)通过从发酵反应器中一起排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液与悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物并将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物在发酵反应器外与水性发酵溶液分开并引入不同于发酵反应器的容器来进行步骤(II)(1)；通过将水相引入这种容器以在这种容器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4)中将这种分离出的混合物送回发酵3CN112534057A权　利　要　求　书3/4页反应器并使其可供用于下一发酵周期。6.如权利要求5中所述的方法，其中重复步骤(I)和(II)，直至在步骤(IV)中获得所需量的氨基苯甲酸或必须更换步骤(I)中所用的微生物。7.如权利要求1至3任一项中所述的方法，其中步骤(I)中的发酵连续地进行。8.如权利要求7中所述的方法，其中(A)从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，和通过在进行排出后将不溶性微生物和沉淀氨基苯甲酸钙与彼此分开和与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；通过将水相添加到由此分离出的氨基苯甲酸钙中来进行步骤(II)(2)；和其中在步骤(II)(1)中分离出的不溶性微生物部分至完全地再循环到发酵反应器；或其中(B)在截留未溶解微生物的情况下从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中的沉淀氨基苯甲酸钙，和通过在进行排出后将沉淀氨基苯甲酸钙与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；通过将水相添加到由此分离出的氨基苯甲酸钙中来进行步骤(II)(2)；或其中(C)从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，和通过在进行排出后将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；通过将水相添加到由此分离出的这种混合物中来进行步骤(II)(2)；和在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4)中将这种分离出的混合物送回发酵反应器并可供用于进一步连续发酵；或其中(D)从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，和通过在进行排出后将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；通过将水相添加到由此分离出的这种混合物中来进行步骤(II)(2)；和在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4a)中将这种分离出的混合物分成成分4CN112534057A权　利　要　求　书4/4页未溶解微生物和水不溶性钙盐，并在步骤(II)(4b)中将这些彼此分开的成分之一，优选水不溶性钙盐送回发酵反应器并可供用于进一步连续发酵，其中优选将新鲜微生物添加到发酵反应器中。9.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中(A)通过加入酸直至达到3.0至< 4.0的pH值而从步骤(II)(1)中获得的水性发酵溶液中结晶出氨基苯甲酸并分离出该结晶的氨基苯甲酸，其中留下氨基苯甲酸含量降低的母液；或其中(B)将步骤(II)(1)获得的水性发酵溶液再循环到步骤(I)的发酵。10.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中步骤(IV)包括下列子步骤：(1) 在等于或大于步骤(III)中的压力的压力下将来自步骤(III)的析出的氨基苯甲酸和水溶液分开，(2) 将在步骤(1)中分离出的水溶液减压以释放二氧化碳，由此获得二氧化碳含量降低的水溶液。11.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中将步骤(II)(3)中分离出的来自(2)(i)的水不溶性钙盐或来自(2)(ii)的包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物再循环到步骤(I)。12.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中收集在步骤(IV)中释放的二氧化碳并用于步骤(III)。13.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中在步骤(I)中使用选自大肠杆菌、恶臭假单胞菌、谷氨酸棒状杆菌、棉桃阿舒氏囊霉、巴斯德毕赤酵母、多形汉逊氏酵母、解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）、拜列氏接合糖酵母或啤酒糖酵母的类型的微生物，优选仅使用这些类型的正好一种的代表。14.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中步骤(I)在4.0或更大的pH值下进行。15.如前述权利要求任一项中所述的方法，其中步骤(II)(2)在> 7.0的pH值下进行。5CN112534057A说　明　书1/20页制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法[0001]本发明涉及使用发酵法制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法，其中(I) 在通过发酵获得的发酵液中形成的氨基苯甲酸部分地，任选由于溶解平衡而尽可能地，结合为不溶性氨基苯甲酸钙，并且这种不溶性氨基苯甲酸钙然后(II) 独自地或作为与发酵中所用的微生物的混合物分离出来，并转化成水溶性形式并析出不同于氨基苯甲酸钙的不溶性钙盐，然后(III) 通过将二氧化碳在压力下引入已脱除沉淀钙盐的水溶液而使氨基苯甲酸沉淀。[0002]通过发酵法制备有机酸最近特别受关注。在此，重要的特别是以经济的方式和方法从所得发酵液中分离所需产物。从发酵液中分离有机酸已成为科学研究的课题；参见例如J. Microbiol. Biotechnol. (2016), 26(1), 1‑8。其中尤其描述了通过作为铵或钙盐沉淀而获得有机酸，如乳酸、柠檬酸和琥珀酸。举例描述了通过用Ca(OH)2或CaCO3沉淀而分离，随后过滤和用硫酸溶解滤出的钙盐。钙盐的消耗和低价值硫酸钙的形成被描述为这种方法的缺点。其它文献也涉及由发酵制备获得这些和其它有机酸；参见EP 2 562 263 A1和Chem. Biochem. Eng. Q. 19 (2) 159‑172 (2005)（乳酸）、US 2010/0094051 A1（琥珀酸）和Chemical Engineering and Processing, 81 (2014) 59‑71（谷氨酸）。[0003]德国专利申请DE 101 49 869 A1涉及通过其盐的部分蒸发结晶和随后或同时置换沉淀而从水溶液，尤其从发酵排出物中分离有机酸的盐以及优选借助电膜（Elektromembran）法从结晶物中释放有机酸的方法。在一个优选实施中，该有机酸是羧酸，尤其是多羟基羧酸，如2‑酮基‑多羟基‑C6‑羧酸。作为可能的酸也提到酮古洛糖酸、乳酸、柠檬酸、香草酸、艾杜糖酸和古洛糖酸，其中特别强调酮古洛糖酸2,4‑二酮基‑D‑古洛糖酸、2,5‑二酮基‑D‑古洛糖酸、2‑酮基‑L‑古洛糖酸和抗坏血酸。[0004]在可通过发酵获得的有机酸中，应该也特别强调氨基苯甲酸作为经济上重要的产品，其作为本身使用或作为由氨基苯甲酸通过（一个或多个）进一步化学反应衍生的其它化合物（下文称为氨基苯甲酸反应产物）制备中的中间体使用。例如，氨基苯甲酸用于制备染料、气味剂或药物（Wiklund, Current Organic Synthesis, 2006, 3, 379‑402）。用于制备另一产物的重要氨基苯甲酸后续反应的一个实例是脱羧以产生苯胺，苯胺本身作为异氰酸酯制备中的中间体尤其重要。[0005]氨基苯甲酸也引起了科学研究的兴趣。例如，Decker和Frye早在1966年就关于氨基苯甲酸形成螯合物的性质研究了取代模式的性质（参见Z. Naturforschg. 21 b, 522 – 526 [1966]）。研究了氨基苯甲酸与Mg(II)、Ca(II)、Cr(III)、Mn(II)、Fe(II)、Fe(III)、Co(II)、Ni(II)、Cu(II)、Cd(II)和Zn(II)的螯合物。[0006]在文献中描述了氨基苯甲酸的发酵制备。例如参考Balderas‑Hemandez, V. E.等人, “Metabolic engineering for improving anthranilate synthesis from glucose in Escherichia coli”, Microb. Cell. Fact. 2009, 8, 19 (doi: 10.118611475‑2859‑8‑19)。专利文献也包括这方面的公开；参见例如申请WO 2015/124686 A1和WO 2015/124687 A1和其中各自引用的文献。发酵法在水性环境中进行，并在制备氨基苯甲酸的情况6CN112534057A说　明　书2/20页下提供氨基苯甲酸的质量含量为10.0 g/L至100 g/L的水性产物混合物（发酵液）。[0007]特别重要的是氨基苯甲酸的邻位异构体，邻氨基苯甲酸。在细菌和酵母的代谢中，作为色氨酸合成中的天然中间体在莽草酸途径中形成邻氨基苯甲酸。在邻氨基苯甲酸的生物技术生产中，减少或抑制其在代谢途径中的转化，以实现在发酵介质中的积聚。在已提到的国际专利申请WO 2015/124686 A1和WO 2015/124687 A1中描述了生物技术生产邻氨基苯甲酸和随后将其催化转化成苯胺的这种概念。描述的可能的重组微生物是使用来自棒状杆菌或假单胞菌家族的细菌。更新的申请（WO 2017/102853 A1）描述了酵母的使用。[0008]如果目标是在中性至碱性pH范围中发酵生产邻氨基苯甲酸（如WO 2015/124686 A1和WO 2015/124687 A1所述），则需要加入碱以中和酸并防止在发酵过程中pH的过度降低。邻氨基苯甲酸在中性至碱性pH范围内以溶解的形式作为阴离子（氨基苯甲酸根）存在。发酵液中存在何种阳离子取决于用于中和的碱。在所述方法的一个实施方案中，在发酵后，通过加入酸将pH值降低到等于或接近pH 3.5（等电点）的值，即将溶解的氨基苯甲酸根转化–+回酸或“两性离子”（OOC‑C6H4‑NH3）。由于氨基苯甲酸的低残留溶解度，其在此作为结晶固体获得并可因此分离出来。这种方法具有下述两个重要的缺点：1. 由于在发酵中为避免pH降低而加入碱和由于在后续结晶中为降低pH而加入酸，在生产法中持续消耗碱和酸，这与明显的经济缺点相关联。在结晶中形成的盐以溶解在母液中的形式存在并且必须相应地弃置。[0009]2. 以溶解在发酵中的形式存在的氨基苯甲酸根可能在发酵液中的质量比例过高的情况下对细菌的代谢活性具有抑制作用，由此减少氨基苯甲酸的进一步生产或在极端情况下甚至停止。[0010]因此在氨基苯甲酸的发酵生产领域中仍然需要进一步改进。完全令人惊讶地，已经发现，当(I) 在发酵液中形成的氨基苯甲酸（主要至完全作为阴离子，氨基苯甲酸根存在）部分地，任选由于溶解平衡而尽可能地，结合为不溶性氨基苯甲酸钙，然后这种不溶性氨基苯甲酸钙(II) 独自地或作为与微生物的混合物分离出来，并转化成水溶性形式并析出不同于氨基苯甲酸钙的不溶性钙盐，然后(III) 通过将二氧化碳在压力下引入已脱除沉淀钙盐的水溶液而使氨基苯甲酸沉淀时，可以解决上述问题或至少减轻它们的影响。这以图解形式显示在所附方框图（参见图1）中。在其中用虚线箭头或方框表示任选步骤。下文使用的括号中的粗体表述参考该图。本发明的主题相应地是制备氨基苯甲酸或氨基苯甲酸反应产物的方法，其包括下列步骤：(I) 在发酵反应器中使用微生物和钙盐，尤其是无机钙盐(Ca盐)发酵原材料，其包含至少● 可发酵含碳化合物(C化合物)，优选选自淀粉水解产物、甘蔗汁、甜菜汁、含木质纤维素的原材料的水解产物或其混合物（即两种或更多种上述化合物的混合物），和● 含氮化合物(N化合物)，优选选自气态氨、氨水、铵盐（尤其是无机铵盐，如氯化铵和/或硫酸铵，优选硫酸铵）、脲或其混合物（即两种或更多种上述化合物的混合物），从而获得悬浮在水性发酵溶液中的混合物，其包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙(发酵液) (发酵)；(II) (1) 从水性发酵溶液中分离在步骤(I)中获得的7CN112534057A说　明　书3/20页(1)(i) 氨基苯甲酸钙(Ca(AB)2)或(1)(ii) 包含未溶解微生物(微生物)和沉淀氨基苯甲酸钙(Ca(AB)2)的混合物– (分离)，(2) 通过将含有形成水溶性氨基苯甲酸盐的阳离子和形成水不溶性钙盐的阴离子的水相(AQ)添加到来自(1)(i)的经分离的氨基苯甲酸钙中或添加到来自(1)(ii)的经分离的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物中，将结合在氨基苯甲酸钙中的氨基苯甲酸根转化成水溶性形式并形成不同于氨基苯甲酸钙的水不溶性钙盐，从而获得悬浮液，其在氨基苯甲酸根的水溶液(AB–(aq))中包含(2)(i) 沉淀水不溶性钙盐(CaX2 (s))或(2)(ii) 包含未溶解微生物(微生物)和水不溶性钙盐(CaX2 (s))的混合物(离子交换)，(3) 将在步骤(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液(AB–(aq))与来自(2)(i)的沉淀水不溶性钙盐或与来自(2)(ii)的包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离，优选随后将来自(2)(i)的水不溶性钙盐或来自(2)(ii)的包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物再循环到步骤(I) (分离)；(III) 在大于或等于1.50巴(绝对)的压力下，优选在5.00巴(绝对)至100巴(绝对)的压力下，更优选在7.00巴(绝对)至40.0巴(绝对)的压力下，最优选在20.0巴(绝对)至30.0巴(绝对)的压力下将二氧化碳(CO2)引入在步骤(II)(3)中分离出的氨基苯甲酸根的水溶液中并析出氨基苯甲酸，从而形成含有在水溶液(AQ)中的氨基苯甲酸(AB‑H)的悬浮液(AB‑H + AQ) (CO2结晶)；(IV) 分离在步骤(III)中析出的氨基苯甲酸(AB‑H)，其包括降低压力以释放二氧化碳(CO2)，其中获得二氧化碳含量降低且脱除析出的氨基苯甲酸的水溶液(AQ) (分离)；(V) 使用在步骤(IV)中获得的二氧化碳含量降低且脱除析出的氨基苯甲酸的水溶液(AQ)作为在步骤(II)(2)中加入的水相的成分(再循环)；(VI) 任选将在步骤(IV)中分离出的氨基苯甲酸(AB‑H)进一步反应成氨基苯甲酸反应产物，其中步骤(VI)优选包含下列反应之一：(1) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺；(2) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着进行苯胺与甲醛的酸催化的反应以形成二苯甲烷系列的二胺和多胺；(3) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着进行苯胺与甲醛的酸催化的反应以形成二苯甲烷系列的二胺和多胺，接着与光气反应以形成二苯甲烷系列的二异氰酸酯和多异氰酸酯；(4) 将氨基苯甲酸脱羧以产生苯胺，接着将苯胺转化成偶氮化合物；(5) 将氨基苯甲酸转化成酰胺；(6) 将氨基苯甲酸转化成导电聚合物，尤其例如聚邻氨基苯甲酸 –(后续用途)。[0011]在本发明中，术语“氨基苯甲酸反应产物”是指通过氨基苯甲酸的进一步化学转化获得的产物。8CN112534057A说　明　书4/20页[0012]发酵在水性介质中进行并提供包含悬浮（悬浮）在水溶液中的固体成分的产物混合物。在本发明中，这种产物混合物以其整体根据技术文献中常规的命名法而被称为发酵液。发酵液因此是水溶液和悬浮（悬浮）的不溶性固体的两相混合物。悬浮的固体含有所用微生物（或其至少一部分）和沉淀氨基苯甲酸钙。在本发明中，水溶液（即不含悬浮在其中的固体成分的发酵液）被称为水性发酵溶液。[0013]可发酵含碳化合物被理解为是指可被所用微生物的重组细胞用于生产氨基苯甲酸（或根据pH值，氨基苯甲酸盐）的各种有机化合物或有机化合物混合物。[0014]在本发明中，术语水不溶性或不溶性当然不应以绝对意义理解（因为甚至没有绝对不溶这样的东西）。因此，步骤(II)(2)中的表述“通过加入含有形成水溶性氨基苯甲酸盐的阳离子和形成水不溶性钙盐的阴离子的水相，将结合在氨基苯甲酸钙中的氨基苯甲酸根转化成水溶性形式并形成不同于氨基苯甲酸钙的水不溶性钙盐”当然不是指所有钙离子毫无例外地作为加入的阴离子的盐沉淀。相反，是指加入的阴离子形成钙盐，其溶度积足够小以致在给定边界条件下被超过，并且所用阳离子的氨基苯甲酸盐的溶度积足够大以致在给定边界条件下不被超过。因此，氨基苯甲酸根可进入溶液且因此“释放的”钙离子可相应地作为加入的阴离子的盐沉淀。[0015]在本发明中，除非另行指明，pH值是指在20℃下测得的pH值。[0016]为了更好地理解本发明，附上以下这些图：图1显示本发明的方法的方框图。在本发明的最宽泛配置中任选的步骤用虚线显示。[0017]图2显示谷氨酸棒状杆菌的生产邻氨基苯甲酸的菌种根据现有技术的补料分批发酵。在并行的两个发酵反应器中在其它方面相同的条件下进行实验。实心符号指示反应器1；空心符号指示反应器2。[0018]图3显示谷氨酸棒状杆菌的生产邻氨基苯甲酸的菌种根据本发明的步骤(I)在CaCO3存在下的补料分批发酵。在并行的两个发酵反应器中在其它方面相同的条件下进行实验。实心符号指示反应器1；空心符号指示反应器2。[0019]图4和图5显示谷氨酸棒状杆菌的生产邻氨基苯甲酸的菌种根据本发明的步骤(I)在CaCO3存在下的补料分批发酵的结果。在并行的两个发酵反应器中在其它方面相同的条件下进行实验。实心符号指示反应器1；空心符号指示反应器2。[0020]图6显示在封闭容器中用CO2结晶邻氨基苯甲酸的模拟结果。对照液相中的CO2质量比例(wCO2)在主轴上绘制以巴计的压力和以%计的邻氨基苯甲酸的沉淀比例（noAB,固体/noAB,总 × 100）。副轴显示pH值的进展。符号指示来自模拟的点；为改进可视化而加入虚线。[0021]图7显示在封闭容器中用CO2结晶邻氨基苯甲酸的实验结果。对照CO2压力(巴)在主轴上绘制以%计的邻氨基苯甲酸的沉淀比例（noAB,固体/noAB,总 × 100）。NH4邻氨基苯甲酸盐溶液的初始浓度为10质量%、20质量%和30质量%。[0022]下面首先概述各种可能的实施方案。[0023]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第一实施方案中，步骤(I)中所用的钙盐选自碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化钙、氧化钙及其混合物（即两种或更多种上述钙盐的混合物），其中优选使用碳酸钙和氢氧化钙的混合物作为钙盐。[0024]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第二实施方案中，在步骤(II)(2)中加9CN112534057A说　明　书5/20页入的水相包含●锂、钠、钾和/或铵阳离子，优选铵阳离子，和●碳酸根和/或碳酸氢根阴离子。[0025]在可与所有其它实施方案（条件是这些不以发酵的连续配置作为它们的主题）组合的本发明的第三实施方案中，步骤(I)中的发酵不连续地在发酵周期中进行。[0026]在作为第三实施方案的一种特定配置的本发明的第四实施方案中，在发酵周期结束后，●通过从发酵反应器中排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液并截留悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物来进行步骤(II)(1)；●通过将水相引入发酵反应器以在发酵反应器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和●通过从发酵反应器中排出在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液来进行步骤(II)(3)，其中截留包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物并使其可供用于下一发酵周期。[0027]在作为第三实施方案的另一种特定配置的本发明的第五实施方案中，在发酵周期结束后，●通过从发酵反应器中一起排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液与悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物并将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物在发酵反应器外与水性发酵溶液分开并再循环到发酵反应器来进行步骤(II)(1)；●通过将水相引入发酵反应器以在发酵反应器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和●通过从发酵反应器中排出在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液来进行步骤(II)(3)，其中截留包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物并使其可供用于下一发酵周期。[0028]在作为第三实施方案的再一种特定配置的本发明的第六实施方案中，在发酵周期结束后，●通过从发酵反应器中一起排出在步骤(I)中获得的水性发酵溶液与悬浮在其中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物并将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物在发酵反应器外与水性发酵溶液分开并引入不同于发酵反应器的容器来进行步骤(II)(1)；●通过将水相引入这种容器以在这种容器中获得悬浮液来进行步骤(II)(2)，所述悬浮液在氨基苯甲酸根的水溶液中含有包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物；和●在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未10CN112534057A说　明　书6/20页溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4)中将这种分离出的混合物送回发酵反应器，因此使其可供用于下一发酵周期。[0029]在可与以在发酵周期中的不连续发酵(步骤(I))作为它们的主题的所有其它实施方案组合的本发明的第七实施方案中，重复步骤(I)和(II)，直至在步骤(IV)中获得所需量的氨基苯甲酸或必须更换步骤(I)中所用的微生物。[0030]在可与所有其它实施方案（条件是这些不以发酵的不连续配置作为它们的主题）组合的本发明的第八实施方案中，步骤(I)中的发酵连续地进行。[0031]在作为第八实施方案的一种特定配置的本发明的第九实施方案中，从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，并且●通过在进行排出后将不溶性微生物和沉淀氨基苯甲酸钙与彼此分开和与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；●通过将水相添加到由此分离出的氨基苯甲酸钙中来进行步骤(II)(2)；其中在步骤(II)(1)中分离出的不溶性微生物部分至完全地再循环到发酵反应器。[0032]在作为第八实施方案的另一种特定配置的本发明的第十实施方案中，在截留未溶解微生物的情况下从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中的沉淀氨基苯甲酸钙，和●通过在进行排出后将沉淀氨基苯甲酸钙与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；●通过将水相添加到由此分离出的氨基苯甲酸钙中来进行步骤(II)(2)。[0033]在作为第八实施方案的再一种特定配置的本发明的第十一实施方案中，从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，和●通过在进行排出后将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；●通过将水相添加到由此分离出的这种混合物中来进行步骤(II)(2)；和● 在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4)中将这种分离出的混合物送回发酵反应器，以使其可在其中可供用于进一步连续发酵。[0034]在作为第八实施方案的再一种特定配置的本发明的第十二实施方案中，从发酵反应器中连续排出悬浮在水性发酵溶液中并包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，和●通过在进行排出后将包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物与水性发酵溶液分开来进行步骤(II)(1)；●通过将水相添加到由此分离出的这种混合物中来进行步骤(II)(2)；和●在步骤(II)(3)中将在步骤(II)(2)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液与包含未11CN112534057A说　明　书7/20页溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物分离后，在步骤(II)(4a)中将这种分离出的混合物分成成分未溶解微生物和水不溶性钙盐，并在步骤(II)(4b)中，将这些彼此分开的成分之一，优选水不溶性钙盐送回发酵反应器，在此其可供用于进一步连续发酵，其中优选将新鲜微生物添加到发酵反应器中。[0035]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第十三实施方案中，通过加入酸直至达到3.0至< 4.0的pH值而从步骤(II)(1)中获得的水性发酵溶液中结晶出氨基苯甲酸，并分离出结晶的氨基苯甲酸，其中留下氨基苯甲酸含量降低的母液。[0036]在作为第十三实施方案的一种特定配置的本发明的第十四实施方案中，氨基苯甲酸含量降低的母液通过一系列吸附步骤和解吸步骤浓缩，其中通过用pH值为6.0至11.0的解吸剂洗脱来进行解吸步骤，其中由此获得的解吸产物任选用作在步骤(II)(2)中加入的水相的另一成分。[0037]在作为第十四实施方案的一种特定配置的本发明的第十五实施方案中，吸附步骤中所用的吸附剂是活性炭。[0038]在可与所有其它实施方案（条件是它们不通过加入酸而从步骤(II)(1)中获得的水性发酵溶液中结晶出氨基苯甲酸）组合的本发明的第十六实施方案中，将步骤(II)(1)获得的水性发酵溶液再循环到步骤(I)的发酵中。[0039]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第十七实施方案中，在步骤(III)中只有一部分，优选5.0%至90%的包含在步骤(II)(3)中获得的水溶液中的氨基苯甲酸根作为氨基苯甲酸析出。[0040]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第十八实施方案中，步骤(IV)包括下列子步骤：(1) 在等于或大于步骤(III)中的压力的压力下将来自步骤(III)的析出的氨基苯甲酸和水溶液分开，(2) 将在步骤(1)中分离出的水溶液减压以释放二氧化碳，由此获得二氧化碳含量降低的水溶液。[0041]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第十九实施方案中，将已在步骤(II)(3)中分离出的来自(2)(i)的水不溶性钙盐或来自(2)(ii)的包含未溶解微生物和水不溶性钙盐的混合物再循环到步骤(I)。[0042]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第二十实施方案中，收集在步骤(IV)中释放的二氧化碳并用于步骤(III)。[0043]在可与所有其它实施方案组合的本发明的第二十一实施方案中，在步骤(I)中使用选自大肠杆菌、恶臭假单胞菌、谷氨酸棒状杆菌、棉桃阿舒氏囊霉、巴斯德毕赤酵母、多形汉逊氏酵母、解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）、拜列氏接合糖酵母或啤酒糖酵母的类型的微生物，其中所用微生物优选仅由这些类型的正好一种的代表构成，其中非常特别优选的是谷氨酸棒状杆菌ATTC 13032。[0044]可与所有其它实施方案组合的本发明的第二十二实施方案中，步骤(I)在4.0或更大的pH值下，优选在4.0至7.5，更优选5.0至7.0的pH值下进行。[0045]在可与所有其它实施方案，优选与第二十二实施方案组合的本发明的第二十三实施方案中，步骤(II)(2)在> 7.0，优选> 8.0的pH值下进行。12CN112534057A说　明　书8/20页[0046]下面详细阐述上文概述的实施方案和本发明的进一步可能的配置。在此，这些实施方案可任意地互相组合，除非从上下文中显而易见相反的意思。[0047]本发明的方法的步骤(I)包括实际发酵步骤，而后面的步骤包括在发酵中形成的产物混合物的后处理和进一步加工。[0048]氨基苯甲酸以三种异构形式（邻‑、间‑和对‑氨基苯甲酸）存在。原则上，根据本发明的方法可用于所有三种异构体，既可以是异构体纯的形式、也可以作为不同异构体的混合物。对于本发明的所有实施方案适用的是，在步骤(I)中通过发酵制备的氨基苯甲酸优选包含邻位异构体。要在步骤(I)中制备的氨基苯甲酸更优选包含基于存在的所有氨基苯甲酸异构体的总摩尔量计至少50.0摩尔%，再更优选至少90.0摩尔%的邻位异构体。非常特别优选地，要在步骤(I)中提供的氨基苯甲酸由异构体纯的形式（即异构体纯度 > 99.0摩尔%）的邻位异构体组成。[0049]步骤(I)中的发酵优选如此进行，以使得所得水性发酵溶液中的pH值不低于4.0的值，因为在较低pH值下氨基苯甲酸不再充分结合为钙盐 ‑ 即使微生物适于该目的。建立的pH值在此也取决于所用钙盐的类型，更确切地说是抗衡离子的碱度。优选地，步骤(I)如此进行，以使得在所得水性发酵溶液中建立4.0至7.5，优选5.0至7.0的pH值。如果需要，可通过加入氨水或气态氨、氢氧化钾水溶液或氢氧化钠水溶液（当pH值太低时）或盐酸、硫酸或硝酸（当pH值太高时）来调节pH值。在所提到的范围内的不同pH范围可能对于不同的微生物而言是特别最佳的；这在下文中详细阐述。[0050]用于进行步骤(I)的优选微生物是细菌或真菌，更确切地说优选酵母。在此特别优选的是选自大肠杆菌、恶臭假单胞菌、谷氨酸棒状杆菌、棉桃阿舒氏囊霉、巴斯德毕赤酵母、多形汉逊氏酵母、解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）、拜列氏接合糖酵母或啤酒糖酵母的类型的微生物，其中优选不使用这些以外的其它微生物。步骤(I)中所用的微生物非常特别优选仅由这些类型的正好一种的代表组成，其中极其非常特别优选的是谷氨酸棒状杆菌ATTC 13032。如已经提到，在发酵中要遵循的pH值取决于所用微生物。微生物如谷氨酸棒状杆菌、恶臭假单胞菌或大肠杆菌优选在在“中性pH值”下（即在6.0至7.5，优选6.0至7.0的pH值下）培养。相反，微生物如啤酒糖酵母优选在酸性环境中（即在4.0至6.0，优选5.0至6.0的pH值下）培养。[0051]在每种情况下，优选选择来自步骤(I)的微生物以在发酵中形成氨基苯甲酸的邻位异构体。[0052]在本发明的一种优选配置中，使用细菌作为微生物。在这方面，特别参考专利申请WO 2015/124686 A1和WO 2015/124687 A1，它们描述了使用细菌的发酵法（参见例如WO 2015/124687 A1，(i) 第15页第8行至第16页第30行，(ii) 实施例1（第29页第4至26行），(iii) 实施例3（尤其是第34页第10至18行），(iv) 实施例4（尤其是第55页第9至31行）。优选使用能在合适的氮源存在下将可发酵含碳化合物转化成氨基苯甲酸而没有将由此形成的氨基苯甲酸立即消耗在细胞内生物化学过程中的细菌，以使得氨基苯甲酸富集在细胞中并最终转移到发酵液中。[0053]在本发明的另一种优选配置中，使用酵母作为微生物。在此特别参考国际专利申请WO 2017/102853 A1。特别地，使用能在合适的氮源存在下将可发酵含碳化合物转化成氨基苯甲酸而没有将由此形成的氨基苯甲酸立即消耗在细胞内生物化学过程中的酵母细胞，13CN112534057A说　明　书9/20页以使得氨基苯甲酸富集在细胞中并最终转移到发酵液中。酵母优选在酸性环境中（即在本发明的方法中在4.0至6.0，优选5.0至6.0的pH值下）培养。[0054]为了获得这种细菌或这种酵母，原则上可使用两种途径，它们也可在优选配置中组合：(i) 可以提高细菌细胞或酵母细胞中的氨基苯甲酸代谢途径中的酶促反应，以使氨基苯甲酸的生产比消耗快。[0055](ii) 可以减轻或切断用于将氨基苯甲酸转化成进一步代谢物或产物（例如色氨酸）的后续反应，以使得甚至野生型菌种中的氨基苯甲酸形成速率也足以使氨基苯甲酸富集在细胞中。[0056]获得具有上文指定的性质的细菌或酵母细胞的方法是现有技术中已知的。可以例如通过筛选将氨基苯甲酸分泌到周围介质中的突变体来识别合适的细菌或酵母细胞。但是，优选借助基因方法特异性修饰关键酶。使用常规基因工程方法，可以视需要增强、减小或甚至完全抑制基因表达和酶活性。结果获得重组菌种。[0057]更优选地，能在含氮化合物存在下将可发酵含碳化合物转化成氨基苯甲酸的细菌或酵母细胞含有对邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性的修饰，这降低所述酶活性。由于所述修饰，减少或完全抑制邻氨基苯甲酸酯转化成N‑(5‑磷酸‑D‑核糖基)邻氨基苯甲酸酯。由此使氨基苯甲酸富集在细胞中。术语“邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性”在此是指用于催化邻氨基苯甲酸酯转化成N‑(5‑磷酸‑D‑核糖基)邻氨基苯甲酸酯的酶活性。[0058]在酵母中，通过天然基因TRP4（YDR354W）基因编码邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性。在细菌谷氨酸棒状杆菌中，通过trpD基因（cg3361、Cgl3032、NCgl2929）编码邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性。在恶臭假单胞菌的情况下，经由trpDC操纵子内的trpD基因（PP_0421）实现编码。[0059]邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性的所述降低原则上可以三种途径实现：(i) 可以修饰用于邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性的基因表达的调节，以减少或抑制该基因的转录或随后的翻译。[0060](ii) 可以修饰用于邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性的基因的核酸序列，以使通过修饰基因编码的酶具有较低的比活性。[0061](iii) 用于邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶活性的天然基因可被源自不同生物体的另一基因替代，并可编码具有比上述天然基因（例如TRP4、trpD或trpDC）低的邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶比活性的酶。[0062]无论使用何种微生物，发酵液在步骤(I)中的发酵开始时包含所用微生物的重组细胞和至少一种可发酵含碳化合物（和至少一种氮化合物作为氮源）。发酵液优选另外还含有选自缓冲体系、无机营养素、氨基酸、维生素和该重组细胞的生长或维持代谢（Erhaltungsstoffwechsel）所需的其它有机化合物的其它成分。该发酵液是水基的。在启动发酵过程后，发酵液还包含氨基苯甲酸，即目标发酵产物。[0063]如已经提到，可发酵含碳化合物在本发明中被理解为是指可被所用微生物的重组细胞用于生产氨基苯甲酸的各种有机化合物或有机化合物混合物。氨基苯甲酸的生产在此可在存在或不存在氧气的情况下进行。[0064]在此优选的是可另外充当所用微生物的重组细胞生长的能量源和碳源的那些可14CN112534057A说　明　书10/20页发酵含碳化合物。特别合适的是淀粉水解产物、甘蔗汁、甜菜汁和含木质纤维素的原材料的水解产物。同样合适的是甘油和C1化合物，优选一氧化碳。[0065]无论所用微生物和所选的碳源和氮源如何，步骤(I)中所用的钙盐优选选自碳酸钙、碳酸氢钙、氢氧化钙、氧化钙或两种或更多种上述化合物的混合物。尤其优选使用碳酸钙和氢氧化钙的混合物。碳酸钙在水中的悬浮液 – 由于碳酸钙部分溶解并且溶解的碳酸根离子与水形成碳酸氢根和氢氧根离子 – 始终含有一定比例的氢氧化钙，并因此被措辞“碳酸钙和氢氧化钙的混合物”所涵盖。使用这种钙盐的优点在于不再需要或最多只需要较少量地作为缓冲剂加入其它碱，例如氢氧化钠（参见例如WO 2015/124686 A1和WO 2015/124687 A1中描述的方法）。碳酸钙在此可最初以固体形式装载在发酵反应器中。也可以作为水性悬浮液加入。氧化钙原则上同样可以固体形式引入发酵反应器。但是，如果作为钙源提供氧化钙，其优选首先用水淬火并因此转化成氢氧化钙。氢氧化钙和碳酸氢钙优选以水溶液的形式计量加入。[0066]本发明的发酵（步骤(I)）如已经提到优选在4.0至7.5，优选5.0至7.0的pH值下进行。在这些pH条件下，在其它条件下不溶的钙盐中的钙离子也可至少部分进入溶液，并且这些随后能够络合并沉淀出形成的氨基苯甲酸盐。由此，钙盐，如碳酸钙此时也逐渐溶解（在碳酸钙的情况下由碳酸根离子形成二氧化碳，其‑ 至少部分 ‑ 排气）。[0067]基于预期生产的氨基苯甲酸的量计，步骤(I)中所用的钙盐优选以至少化学计算量使用。也可以使用过量，例如钙离子与预期生产的氨基苯甲酸的量的摩尔比为1:1或更大。[0068]在本发明的一个实施方案中，步骤(I)连续地进行，即将反应物连续供入发酵反应器并从发酵反应器中连续取出产物。在最简单的情况下，从发酵反应器中连续取出的产物在此是悬浮在水性发酵溶液中的包含未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的混合物，即发酵液。但是，也可想到，通过使用合适的分离法，将微生物选择性截留在发酵反应器中并仅排出氨基苯甲酸钙的水性悬浮液。优选通过利用氨基苯甲酸钙和微生物的不同密度，例如在浮选法中（在这种情况下微生物“浮”在上面），或通过使用离心进行这种分离。[0069]在本发明的另一实施方案中，步骤(I)在不连续工艺方案（“分批运行模式”）中以发酵周期的形式进行。在此，发酵周期优选包括将微生物最初装载或添加到培养基中、最初装载和/或添加营养素、微生物的积聚、形成所需产物（即氨基苯甲酸）、以及在发酵结束后完全或部分排空反应器。在不连续运行模式的一个变体中（所谓的“补料分批运行模式”），反应物连续供入发酵反应器，只要反应器体积允许，而不从反应器中取出产物 – 任选不包括经由反应器至废气系统的连接件排出的气体成分。在加入尽可能最大量的反应物后中断反应并从发酵反应器中取出产物混合物。下面进一步阐述在此仅简要概述的这些运行模式的细节。[0070]无论确切的运行模式如何，发酵反应器优选包含用于测量重要的工艺参数，如温度、pH值、底物和产物的浓度、溶解氧含量、发酵液的细胞密度的装置。发酵反应器特别优选包含用于调节至少一个（优选所有）上述工艺参数的装置。[0071]合适的发酵反应器是搅拌釜、膜反应器、活塞流反应器（"活塞流反应器"）或环流反应器（参见例如Bioprozesstechnik, Horst Chmiel, ISBN‑10: 3827424763, Spektrum Akademischer Verlag）。搅拌釜反应器和环流反应器（优选是气升式反应器，其中通过鼓泡15CN112534057A说　明　书11/20页实现反应器中的液体循环）对需氧和厌氧发酵都特别优选。[0072]在本发明的方法的步骤(II)中，首先在第一步骤(II)(1)中从水性发酵溶液中分离出在步骤(I)中沉淀的氨基苯甲酸钙。这选择性实现，即在也分离出未溶解微生物的情况下，或非选择性进行，即含有未溶解微生物和沉淀氨基苯甲酸钙的发酵液的固体成分的混合物作为不变的整体与水性发酵溶液分离。后者可通过简单过滤、沉降或离心实现。选择性分离可以例如通过利用氨基苯甲酸钙和微生物的不同密度，例如在浮选法中（在这种情况下微生物“浮”在上面），或在离心法中实现。如关于步骤(I)已经阐明，也可进行微生物与氨基苯甲酸钙的这种分离，以使得将微生物截留在发酵反应器中。[0073]在步骤(II)(1)中在分离出氨基苯甲酸钙后剩余的水性发酵溶液具有优选4.0或更大的pH值，这取决于发酵的确切条件。由于这种水性发酵溶液仍可能含有一定比例的溶解氨基苯甲酸根，可以有利地通过加入酸直至达到3.0至< 4.0的pH值而从中结晶出氨基苯甲酸，并分离出结晶的氨基苯甲酸，其中留下已缺乏氨基苯甲酸的母液。适用于这一用途的酸优选是无机酸，如硫酸、磷酸或盐酸；盐酸和硫酸特别优选。所得母液仍含有残留含量的氨基苯甲酸。因此优选通过一系列吸附步骤和解吸步骤浓缩该母液。在此可通过用pH值为6.0至11.0的解吸剂洗脱来进行解吸步骤，由此获得的解吸产物可有利地用作在步骤(II)(2)中加入的水相的成分。在另一实施方案中，在强酸性范围内进行解吸（即解吸剂具有小于3.0的pH值），并通过将pH值提高到≥ 3.0的值，优选到3.0至< 4.0的值而对解吸产物进行后结晶。在吸附步骤中可用的合适吸附剂的实例是活性炭。[0074]可能可取的是，将结晶前的在步骤(II)(1)中在分离出氨基苯甲酸钙后剩余的水性发酵溶液和/或吸附前的在结晶中获得的母液进行脱色。在一个实施方案中，优选进行这种脱色，以使水性发酵溶液或母液经过含有固体填料的柱，以通过吸附除去染料。可用的可能的固相是例如硅藻土、活性炭或离子交换填料。在另一实施方案中，通过与粉状活性炭或粉状硅藻土一起搅拌、随后过滤来进行脱色。[0075]原则上也可想到的是，代替结晶，将在步骤(II)(1)中在分离出氨基苯甲酸钙后剩余的水性发酵溶液部分地再循环到步骤(I)的发酵中。但是，由于反应混合物的与此相关的稀释，在结晶的情况下的实施方案通常是优选的。[0076]在步骤(II)(2)中，通过转化成水溶性形式，释放在步骤(II)(1)中分离出的氨基苯甲酸钙中结合的氨基苯甲酸根（离子交换步骤）。这优选通过向在步骤(II)(1)中获得的工艺产物（即氨基苯甲酸钙或含有氨基苯甲酸钙和未溶解微生物的混合物）中加入水相来实现，所述水相包含锂、钠、钾和/或铵阳离子，优选铵阳离子，和碳酸根和/或碳酸氢根阴离子。[0077]在此特别优选的是碳酸铵的溶液。氨基苯甲酸根在此作为引入的阳离子的盐进入溶液，而引入的阴离子作为钙盐沉淀。该离子交换步骤通常在环境温度下在几分钟内实施。例如通过剧烈搅拌使加入的水相与氨基苯甲酸钙密切混合是有利的。不必在步骤(II)(2)中溶解氨基苯甲酸钙中结合的所有氨基苯甲酸根；可能剩余的未溶解残留成分可在如本文所述的后续步骤(II)(3)中再循环到步骤(I)。这不脱离本发明的范围。[0078]步骤(II)(2)优选在> 7.0，优选> 8.0的pH值下进行。如果在所选工艺条件下没有自动建立这样的pH值，适当的是加入碱，优选氨水或气态氨。16CN112534057A说　明　书12/20页[0079]在步骤(II)(3)中，将步骤(II)(2)中获得的工艺产物（即沉淀的固体– 水不溶性钙盐[(2)(i)]或含有水不溶性钙盐和未溶解微生物的混合物[(2)(ii)] – 悬浮在含有已进入溶液的氨基苯甲酸根的水溶液中）分成其固体和液体成分，其中任选也可将钙盐[(2)(i)]和未溶解微生物[(2)(ii)]分开。在每种情况下，可以使用与上文对步骤(II)(1)所述相同的分离技术。在本发明的所有实施方案中，优选将步骤(II)(3)中分离出的固体再循环到步骤(I)，因为其在那里可有利地用于提供钙盐。如果氨基苯甲酸钙中结合的氨基苯甲酸根在前一步骤中没有全部进入溶液，则未溶解的氨基苯甲酸钙留在这种固体中并与其一起再循环到步骤(I)，因此没有发生损失。[0080]在步骤(III)中，通过将二氧化碳在升高的压力下引入在步骤(II)(3)中获得的氨基苯甲酸根的水溶液中，析出氨基苯甲酸（结晶步骤）。通过注入二氧化碳，由于形成质子迁移平