PEI细胞转染液使用方法（标准版）

PAGE1/NUMPAGES1PEI细胞转染液使用方法接种细胞：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。转染前18-24小时进行细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度大约在80%左右。注：培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。2.准备EZTrans-DNA复合物（1）转染前将所有试剂置于室温10分钟。下面，以转染24孔板培养皿为例，说明转染的具体方法（如果在别的培养器皿中进行转染，各试剂建议使用量见表1.：（2）将1μg质粒DNA稀释到40μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。（3）将3μLEZTrans转染试剂稀释到40μL无血清的高糖DMEM培养基，用移液枪吹吸3-4次。（4）将稀释好的EZTrans转染试剂一次性全部加入到已稀释好的质粒DNA中，立即用移液枪吹吸3-4次。（5）室温放置10-15分钟，以形成EZTrans-DNA复合物。表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZTrans、稀释液用量培养器皿培养液体积（mL）DNA量（μg）EZTrans(μL)稀释液(μL)48孔板0.30.51.52×2524孔板0.5132×4012孔板0.751.54.52×606孔板1392×12535mm培养皿1392×12560mm培养皿36182×250100mm培养皿912362×5003.转染细胞将上述80μLEZTrans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，让EZTrans-DNA复合物分散均匀。在CO2培养箱中37℃下孵育细胞，转染后12-18小时，去除含EZTrans-DNA复合物的培养液。（若细胞形态欠佳，可在转染3-5h后，添加1/2体积的包含30%血清的生长培养基，在转染12-18小时后完全去除含EZTrans-DNA复合物的培养液，用含血清和抗生素的新鲜培养液。）转染后zui快7h即可检测到转入基因的表达，可根据需要在24-48小时内检测转染效率。运输与保存方法常温运输，4℃保存，保质期12个月。使用注意事项质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。特别提醒1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70～80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。4.对大多数细胞来而言，每1μgDNA使用3.0μLEZTrans试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1～4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。EZTrans转染液用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）细胞型号培养基每孔细胞数DNA的量转染试剂量293HDMEM3×1040.2μg0.5μL293FTDMEM3×1040.2μg0.5μL293EDMEM3×1040.2μg0.5μL293FDMEM3×1040.2μg0.5μLCOS7DMEM1.5×1040.4μg0.5μLhelaDMEM2×1040.3μg0.5μLCaco2MEM3.5×1040.3μg0.75μLBHK21MEM2×1040.2μg0.5μLCHO-DG44DMEM+HT+pro2×1040.5μg0.5μLRAW264.7DMEM3×1040.2μg0.5μLMCF7MEM/NEAA+0.01mg/mLinsulin+sodiumpyruvat2×1040.1μg0.25μLSW480IMDM3×1040.4μg0.5μLMDCKDMEM4×1040.6μg1μLCHO-K1IMDM+Pro3×1040.2μg0.5μLHepG2DMEM3×1040.5μg0.75μLA549DMEM2×1040.3μg0.5μLNIH/3T3DMEM1.5×1040.1μg0.75μLveroDMEM3×1040.3μg0.75μLsf9SIMSF5×1040.4μg0.75μL精品资料欢迎下载