激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书

O1YMPUS激光共聚焦显微镜FV1000（倒置显微镜IX81）简易使用书叮日V开启系统32打开计算机.打开激光器.(打开钥匙开关.)2-1.多线氩离子(458nm,488nm,514nm)ON2-2氦氖绿(543nm)ON2-3氦氖红(633nm)ON打开汞灯电源开关.登陆WindowsXP系统.UserID:AdministratorPassword:fluoview旦双击快捷方式：打开FV10-ASW应用软件.UserID:AdministratorPassword:Administrator*系统软件的启动需要等待一定时间.手控面板2显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.（参照④Mem。④.）插入起偏镜.插入微分干涉滑块.点击FV10-ASW软件中的图标.Note1:使用TD滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”，如果不是，用手柄按下DICT图标标本聚焦focwi尚.■silisnlrEH2④Memo④按照7-1的操作转换物镜的倍率之后，对：•物镜•各物镜对应的DIC元件*凸咛，奶Il,J』H£H1|dl^JFIK性|WF|rrFBei做旭'mm尸Linr*AiidhghdLPtarioiZ肩另酬附ill羊进行操作.7显微镜镜下观察荧光观察使用手控面板选择物镜.点击FV10-ASW软件中的图标.刁3.使用手控面板选择荧光滤色片.（参照④Mem。④.）4.标本聚焦.毋委slgZJFf5眠ra?■r|—|:■:物1叫・|1『zanc博r苗中咐4|羊④Mem。④关于荧光滤色片N旧A:蓝色激发/绿色荧光（例：FITC、EGFP等）WIG:绿色激发/红色荧光（例：Rhodamine、DsRed等）激光输出的调节明场观察（显微镜镜下观窈荧光观察（显微镜镜下观察染料选择光路图入扫描带宽选择TwinScanner设定取图条件的保存调出取图条件图像显示窗口扫描模式扫描速fmihq心mKrM!LH4nvr：H.ia>WLkfinkg虹TJ&1-7田、ffj»9MAM"914cIMli|WV"儡］IICK52怔*DDELambda扫描的设定物镜聚隹时间间隔和时间计数（用于XYT或XT^3描）扫描的按钮每个通道的调节共聚焦的孔径大小\卤素灯的光强调节Kalman方式图像的拇指索引内存中所显示的文件获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例:绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门.同时，点击按钮主关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列中，双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）FlX-iEiK-l染料选择后的显示界面IIIFl图像调节略述[1]际CH1Ale-xaFluor4SS5.0%--4.点击XYRepeat按钮开始扫描.调节绿色（FITC）图像.（图像调节的略述如下.更多的信息，参照附录1.）点击Stop按钮停止扫描.（参照④Memo④.）④Memo④扫描控制面板,:连续扫描四：停止扫描Stop|F弟TtP口H:快速扫描（隔行扫描）探测器的灵敏度调节（HV）共聚焦的孔径大小调节（C.A.）激光输出的调节（Laser）[3]45SP49#5155J5G33调节方法（例:HV调节）：点击滑块，HV直接提高（或降低）到指定的位置.点击此按钮匚士或者使用鼠标转轮进行微调.P:12.5nsL:7.525msF:3.S)21s&3l9s7.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）8.点击XY按钮取得一幅图像.109.点击SeriesDone按钮，“2DView-Livelmage(x)”2D界面就出现.10.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：JFVF网IT"—iM：.■11创建“一个含（16-bitTIFF）的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.OIB格式：创建单个的OIF格式的文件，方便进行移动和进行其它的操作./■rmLMEAj-uuikiiF!L.AufftJ[3]2M>15探测器的灵敏度调节（HV）共聚焦的孔径大小调节（C.A.）激光输出的调节（Laser）调节方法（例:HV调节）：点击滑块，HV直接提高（或降低）到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.8.点击XY按钮取得一幅图像.7.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）点击SeriesDone按钮，“2DView-Livelmage(x)”2D界面就出现.10.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：创建“一个含（16-bitTIFF）的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.OIB格式：创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.711■型S.U-FOfllfi>-1获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例:绿色荧光（Alexa488）+红色荧光（Alexa546）二重染色序列扫描（这里介绍线序列扫描.）1.点击FV10-ASW软件中的按钮'关闭汞灯快门.同时，点击按钮主关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中，双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）斐堂圈昌占rr染料选择后的显示界面12蛔夺-列G—.虬LMAMN』总ETC4.点击序列扫描，并选择线序列方式.“OR。|.时HVG.iiiOtbcl5.点击XYRepeat按钮开始扫描.调节绿色（AlexaFluor488）图像和红色（AlexaFluor546）图像.（图像调节的略述如下.更多的信息，参照附录1.）点击Stop按钮停止扫描.（参照©Memo④.）'图像调节略述探测器的灵敏度调节（HV）共聚焦的孔径大小调节（C.A.）商激光输出的调节（Laser）调节方法（例:HV调节）：点击滑块，HV直接提高（或降低）到指定的位置.点击此按钮M或者使用鼠标转轮进行微调.Mocter^-Fast12.5u3.PixelSloww»回问而堇］8.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）+-”咨P：1Z.5llSL：7.525I115F：3.92ISS3.9S9.点击XY按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone按钮，“2DView-Livelmage(x)”2D界面就出现.11.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）11OIB格式：创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：创建“一个含（16-bitTIFF）的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.Hriig|jLii]W叫Itnr*一MI-加登蝇□_)染料选择后的显示界面1.点击FV10-ASW软件中的按钮土关闭汞灯快门.同时，点击按钮切』关闭卤素灯快门.点击染料选择按钮.在染料列表中，双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.点击Apply按钮.（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）选择TD1.呈T童星奎圈目/图像调节略述5.点击XYRepeat按钮开始扫描.6.调节绿色（FITC）图像和微分干涉差的图像.（图像调节的略述如下.更多的信息，参照附录1.）7.点击Stop按钮停止扫描.（参照©Memo④.）④Memo④扫描控制面板6:连续扫描I除⑥：停止扫描51npFocikkZ—"I:快速扫描（隔行扫描）±Jkl也力±J探测器的灵敏度调节（HV）共聚焦的孔径大小调节（C.A.）激光输出的调节（Laser）调节方法（例：HV调节）：点击滑块，HV直接提高（或降低）到指定的位置.点击此按钮有或者使用鼠标转轮进行微调..8«Fflst1Z5isPixelSMiwa.®J旦［商的HVP:12.5u&L:7.525msF3JQ21sS:3J9s98.选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）9.点击XY按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone按钮，“2DView-Livelmage(x)”2D界面就出现.11.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）11④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：创建“一个含（16-bitTIFF）的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.OIB格式：创建单个的OIF格式的文件，方便进行移动和进行其它的操作.（XYZ扫描-双标）1.采用13和14页步骤1到7.确定Z轴的上限和下限如下.④Memo④_1和按钮%:点击移动1.0皿..一—]:点击移动0.1pm.输入StepSize大小（点击OP按钮可以使用推荐的值），并选择V.点击XYRepeat按钮开始扫描.点击_1和查按钮上移焦点位置.（参照④Mem。④.）当图像显示到达上限时，点击Set按钮确定.点击凰和订按钮下移焦点位置.（参照④Mem。④.）当图像显示到达下限时，点击Set按钮确定.点击Stop按钮停止扫描.（XYZ扫描-双标）1012选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下，背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.球2.）选择Depth按钮.点击XYZ按钮取得图像.点击SeriesDone按钮，“2DView-Livelmage（x）”2D界面就出现.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：创建“一个含（16-bitTIFF）的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.OIB格式：创建单个的OIF格式的文件,方便进行移动和进行其它的操作.如何取图(XYL光谱扫描)绿色荧光(YOYO-1)双标IM~ll~j■三匕pgT泱6^1、23点击FV10-ASW软件中的按钮3关闭汞灯快门.同时，点击按钮_|关闭卤素灯快门.点击按钮检查光路.I做如下设置.*可以通过调用扫描状态来实现该设置.更多的信息，参照附录5.如何取图（XYL光谱扫描）44.点击按钮，出现光谱设置窗口.5.设置CHS1光谱带宽为10nm,以此为例.（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）6.点击XYRepeat按钮开始扫描.在观察图像的同时，移动光谱带到图像最亮的位置状态.（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）注:移动光谱带位置要保持光谱带宽为10nm不变.调节图像.（参照附录1.）9.点击Stop按钮停止扫描.・*低『弋*呼#国—14如何取图网光谱扫带«FiHI34£|弱心割立*JlI史xg"P归丽”10我04i的Fj5£.1±2gE!44k!Mi151510选择AutoHV,并选择扫描速度.*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下，背景噪音就会消除.（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）11设定要扫描的波长范围，光谱带宽和步距.•Start=开始波长•End=结束波长•Resolution=光谱带宽•StepSize=步距12选择Lambda按钮.13点击XYL按钮取得图像.14点击SeriesDone按钮，“2DViewLivelmage（x）”2D界面就出现.15.保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..（保存为“oib”和"oif”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）文本不同形状的ROI区域显示状态的切换点击按钮一』转换显示模式口IQIQW3。重建'投影的切换选择结束帧选择开始帧■DalaiI»murftiMKUp#rofMrtrjIII¥P4：4IIN.urr^IwC"O-6i<*b«n1.双击资源管理器中要选择打开的文件.toclpbaandAsmi5ai/eDlspay1.点击按钮并选择，2.要保存此图像，右击此图像，选择SaveDisplay并命名.ScleritAllRaiCd'AiZarcdSejectionFipSectionDd日b&AlROlsPasteRO]31+¥P『QfmE”：】5hoHProfile(Mori.)5：|.I^:-.wr邱Print（比例尺的使用）暮1.点击按钮疥.2.点击图像的同时,拖放此比例尺到一个特定的位置.3.点击手柄的左端或右端，移动鼠标.改|变比例尺的大小|.-II■.蜘I*X"26pmLiJtP.O1KNEV)CCfiYPOXDetete-ROl4.选择比例尺并右击选择属性的设置.LtrH-K匚血匚DelCcIdtBa-..i5.设置具体的比例尺属性.|改变文本，颜色，字体等.|RCdMariMEf■Hl¥>w_WI翌毛MEE皿."LILYPOulENM257"2574.点击按钮并选定5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.-要保存此图像,进行下一页第6步的操作.（3D图像的重建）以一定的角度观察3D图像点击按钮碍.创建3D图像.拖动鼠标以一定的角度观察图像.-要保存此图像，进行下一页第6步的操作.|观察3D图像的某个横截面(3D图像的重建保存上一页中第3、5选顼的图像6.点击按钮7.会创建一个2D图像(带文件名).保存该幅图像：右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图④Memo④FV10-ASW专用的图形格式OIF格式：创建“一个含(16-bitTIFF)的图像”和“一个附属文件，”不能单独分割.OIB格式：创建单个的OIF格式的文件，方便进行移动和进行其它的操作.m脸|~~3兰.刘—直I留i厦xzinl*点击按仙创建3D图像.3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.|动画的播放4.点击并控制按围绕着X-轴旋转.再次点击并控制按钮绕着Y-轴旋转.再次点击停止旋转.钮实现图像实现图像围点击并控制按钮.已Z-轴旋转.再次点击停止旋转.点击停止旋转.实现图像围绕着要保存动态旋转的图像,请参照如下的方法创建3D图像.加氏7柬网Animationmove:|Im自雨匆：Create<"Animation3AVIFile10例.试图旋转图像180度.点击按钮氐"点击Anglerotation菜单一选择旋转轴.8.输入旋转的角度.IStart=开始角度|End=结束角度:Frame/s二旋转速度|Interval=单次旋斯的角度iiiii:III1—1iiiiimiiimmui—Jiii—iiiiiimiiimmuni—anuiuhim■■iuni—in—him■■ifakainuinui选择AVI类型并点击Create按钮.输入一个文件名并点击Save按钮.bpjLiimi'H6.获得图像.此处显示分解光谱的通道分配例:绿色荧光(AlexaFluor488)和一'绿色荧光(YOYO-1)双标打开一幅AlexaFluor488和YOYO1双标的XYL图像.分别为AlexaFluor488和YOYO1选定一个封闭的区域.从Processing下拉菜单中选择SpectralDeconvolution图标.双击ROI1和ROI2区域.Unmixedimage5.检查处理类型设置为“Normal”并且点击Execute按钮.例:绿色荧光(AlexaFluor488)和绿色荧光(YOYO-1)双标打开一幅AlexaFluor488单标取样的XYL图像.为AlexaFluor488选定一个封闭的区域从Processing下拉菜单中选择SpectralDeconvolution图标.双击ROI1区域.点击SaveProfile图标.输入保存的名字并且点击OK按钮将AlexaFluor488的光谱记载到数据库中.对于YOYO1单标，重复1-6步.Unmixedimage8.打开一幅AlexaFluor488和YOYO1双标的XYL图像.从Processing下拉菜单中选择SpectralDeconvolution图标.双击数据库中记载的AlexaFluor488和YOYO1图标.检查处理类型设置为“Normal”并且点击Execute按钮.12此处显示分解光谱的通道分配IniroducloryNotes、NameColorC亦liISe■-*1•启rJijizi.tu■wR/□n12获得图像.图像分析(Unmixing)例：两种类型荧光标记的样品1.打开一幅具有两种类型荧光标记的XYL图像.从Processing下拉菜单中选择SpectralDeconvolution图标.选中两个检查框用于计算.(具有三种类型荧光标记时要选中三个检查框.)5.获得图像.Unmixedimage检查处理类型设置为“Blind”并且点击Execute按钮.1•m才2SelectCilROTsCanedSd«ticriUp5业由cmCdritAJlROCfrPasteR01寸i如PrDfle(Vfert.]9iowPrcfic(Hcti.)Showi?t■町岛■CtrhnEiQrli-VSaveDI甲I沛SrjeAsJW]Ful5cr&n]mm伊带有比例尺的图像存为BMP格式的文件十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十***************************************1.右击该幅图像.2.选择SaveDisplay并以新的文件名保存该幅图像.动态图像存为AVI格式的文件右击该图像.选择SaveasAVI并以新的文件名保存该图像.XY或者XYZ图像的每个通道存为TIFF格式的文件右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..设置Saveas类型为TIFF并保存.*存为BMP和JPEG格式也可以.XY或者XYZ通道合并的图像存为TIFF格式的文件右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..设置Saveas类型为TIFF并保存.检查要合并的通道并保存.*存为BMP和JPEG格式也可以.十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十位个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个个小小：保存到CD-R1.插入一张CD-R光盘.2.点击OK.3.选择文件并拖放到CD-R的窗口.fee-rtu"Wntux]Wizard4.点击"WritethesefilestoCD.点击Next.开始刻录.点击Finish按钮结束..冶为眉诡鼻®快w3JWrnCEO't^KUICWIi''yHyl^nrmHjHpCwr^fav。QmAPg"jihidA*j.nri3.关闭激光器.(关闭钥匙开关.)3-1.多线氩离子(458nm,488nm,514nm)OFF3-2.氦氖绿(543nm)OFF3-3.氦氖红(633nm)OFF关闭系统1.选择File/Exit,退出FV10-ASW软件.2.退出WindowsXP.⑴选择Start/ShutDown.⑵在ShutDown窗口中，选择ShutDown并点击OK按钮.4.关闭汞灯电源.E附录1共聚焦的原理和调节原理HV:探测器灵敏度的调告WctoQe）给定值T＞顽度t＞图像亮度T（注意背景噪音变得突出J•排莓ffi为700V或70W以T'.H按钮：改变电压以1V为--个单位（投射光通道设定为1V）Gain调节（X）给定值T＞图像亮度t依瞧杖大率的变化，图像变得更亮，b按钮：改变增益以x0.01为一个单位Offset调节（%）给定值T＞图像亮度Im按钮：改变增益补偿以1%为-个单R10811111CA：共聚焦孔径大小的调节（um）给定值t＞C.A.大小t＞图像亮度T（注意光学切片的厚度变大J'推荐使用Auto段置一鲤过调F；C.A.要供殳初始加七再视点,hAutQ.有按钮:改变孔役大小以1pm为一个单位.MA「orHGNeG,&NeR:激洗输出理度的调苴（%）给定值T＞输山强度"＞图像亮度T（注意荧光漂白变得明显，）•激光输山强度足试醴小一按钮:改变输出强度以为一个申位一■Ld辆N北聚住孔授大小’光学切片摭度和图像臣度的K系厂Opticalslice“athicknessomPMTS3Q45fiW14睥■515日543633JJ-&.D-Q-G5.5.5U<).5_昌±1日±1Imagebrightness附录2④④获取图像如何降低背景噪音④④降低扫描速度巨laioilNlP:12.5usL:7.525msF:3.921sS:3.9s1.选择扫描速度.十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十十**********************************************************************************Kalman方式AutoON:扫描速度变慢时，背景噪音被去除而图像亮度不变.AutoOFF:扫描速度变慢时，背景噪音被去除而图像亮度增加.通过降低扫描速度探测器从开始检测就忽略背景噪音.优点：.相比Kalman方式，能够取到更锐的图.缺点：:单次扫描的速度很慢.・■Rn遍tJkqu制血Kgli1见*司__!圈通过重复获取一定数量的图像进行平均算法运算处理.从而去除背景噪音和粗糙度.优点：:单次扫描的速度很快.缺点：•由于图像平均而图像模糊.点击Kalman并选择Line或Frame方式.输入累计数字（扫描的次数）.