隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析
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・457・
病毒病诊断与治疗.
丽水地区无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析
纪勇平,赵龙友,周斌,钟美莲,庄杰,袁权
【摘要】
目的
隐匿性乙型肝炎感染一直是困扰献血中健康血清筛查的一个重要因素,通过高
度灵敏的Nest—PCR检测方法对献血者中的OBI进行调查,了解该地区隐匿性HBV感染情况和基因
分析。方法共收集10080例献血者血浆,进行进口雅培HBsAg试...
隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析
±堡塞墅塑堕壅丛耋兰壁查垫!!堡!!旦筮型鲞筮!塑垦!垫!竺』兰理璺!垫!!型:望!!!里!!!!!!!:!些箜:壁堡垒
・457・
病毒病诊断与治疗.
丽水地区无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析
纪勇平,赵龙友,周斌,钟美莲,庄杰,袁权
【摘要】
目的
隐匿性乙型肝炎感染一直是困扰献血中健康血清筛查的一个重要因素,通过高
度灵敏的Nest—PCR检测方法对献血者中的OBI进行调查,了解该地区隐匿性HBV感染情况和基因
分析。方法共收集10080例献血者血浆,进行进口雅培HBsAg试剂和北京万泰抗-HBe及抗.HBs
试剂平行检测,采用高灵敏度的Nest・PCR进行核酸检测和基因调取。结果
10
080例无偿献血者
中,共检出雅培(超敏)HBsAg阳性108例(阳性率1.07%),抗-HBC单独阳性767例(阳性率
7.67%)。10080例献血者中筛查出25例血浆HBsAg检测阴性HBVDNA检测阳性的隐匿性HBV
携带者。隐匿性HBV感染者的发生率为0.25%。HBV基因c型12例(48%),基因B型13例
(52%),未发现其他基因型。基因B型和基因C型之间没有明显的统计区别(P>0.05),序列分析显
示其中5例在HBsAg“a”表位(aal24一anl47)存在突变(20%)。结论我国无偿献血中存在较高比
例的隐匿性乙型肝炎感染,且不同地区的基因型与突变情况存在差异。
【主题词】肝炎病毒,乙型;感染;表位;突变;基因型;供血者
Investigationandanalysisof
occult
hepatitis
Bvirus
infection
amongvoluntary
blooddonorsin
Lishui
area
J/Yong-ping,ZHAO
b增-you,ZHOU
Bin,ZHONG
Mei—lian,ZHUANG胁,Yuan
Q眦n.
LishuiBloodCen抛r.Lishui
323000,China
Corresponding
author:JlYong-ping,Email:jyp666888@yahoo.corn.clt
【Abstract】
ObjectiveOcculthepatitisBinfectionofvoluntaryblooddonorshasbeenplaguedin
theserumscreening.DeterminedtheOBIthroughthehighlysensitivedetectionmethodsNest-PCRamongtheblooddonors,andthenlearnedoccultHBVinfectionandanalysedthegenotypesofthisarea.Methods
10080
serumsofdonorswere
determined
respectivelybytheimportedAbbottHBsAgkitandBeijingWantai
anti-HBcandanti-HBsreagents,obtainedthegeneanddetectedDNAsequencesbythehighsensitiveNest-PCR
method.Results
Among
10
080
cases
ofunpaid
blood
donors,108
cases
were
detectedHBsAg
positivelybyAbbottsensitivitykit(positive
rate
of
1.07%),767
eases
wereanti—HBe
single—positive
(positive
rateof
7.67%).25
patients
screenedblooddonorswho
testednegativeforserumHBsAgand
positiveforHBVDNAinthe10080cages.OccultHBVinfectionincidence
rate
was0.25%.12
caseswere
HBV
genotypeC(48%),13easesweregenotype
B(52%),and
no
othergenotypes.GenotypeBhas
no
statisticallysignificantdifference
to
genotype
C(P>0.05).Sequenceanalysisshowedthat5patientsinthe
HBsAg
epitope…a’(aal24一aal47)have
mutation(20%).Conclusion
Thehighproportion
ofoccult
hepatitis
Binfected
among
voluntaryblooddonorsin
our
country.Alsogenotypeandmutationwasdifferences
indifferentregions.
【Keywords】Hepatisis
B
virus;Infection;
Epitopes;Mutation;
Genotype;Blooddonors
乙型肝炎病毒(HBV)感染主要靠输血传播和HBsAg检测试剂阴性但HBV.DNA阳性的感染被称母婴传播,在献血者中筛查乙型肝炎表面抗原为隐匿性HBV感染(Occult
HBV
infection,OBI),引
(HBsAg)是检测乙肝病毒感染的最常用指标,
发OBI的原因有多种,其中较被认同的是HBsAg表位突变导致HBsAg试剂漏检…和病毒受宿主免疫、DOI:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2011.06.017
作者单位:323000浙江省丽水市中心血站(纪勇平、赵龙友、
其他病毒共感染抑制,本研究通过高灵敏度的巢式周斌、钟美莲、庄杰);国家传染病诊断试剂与疫苗
技术研究中
PCR方法,对浙江省丽水地区的无偿献血者进行隐心(褒权)
匿性HBV感染筛查,通过本研究观察隐匿性HBV通信作者:纪勇平。Emsil:jyp666888@yahoo.tom.cn
感染的病毒分子特征和基因类型。
万方数据
1.4
l材料与方法
1.1标本10080份无偿献血标本由浙江省丽水市中心血站2009年10月至2010年4月期间采集,均来自18—55周岁的无偿献血者,全部标本经HBsAg胶体金试剂(杭州艾康生物技术有限公司)初筛为阴性,其中男性5784份和女性4296份(男女比例1.35:1),标本收集后及时存放于一70℃冰柜保存。
1.2酶免检测HBsAg采用雅培(超敏)试剂盒进行检测,抗.HBe及抗.HBs检测试剂均来自北京万泰生物药业有限公司。全部免疫检测均按厂家说明进行检测。
1.3病毒核酸的提取HBsAg阳性和抗HBc阳性而HBsAg与抗HBs阴性标本逐份进行病毒核酸提取,其他血清学模式标本采用10份混合的方式进行
HBV-DNA检测及S基因片段测序HBV.
DNA以不同区域的三套巢式PCR(表1)进行检测。所用试剂为日本TaKaRaTaq“试剂盒[宝生物工程(大连)有限公司,DROOlA],按照产品
进行试剂配制。第一轮PCR扩增35个循环(94℃40
55℃40s、72。C40
8、
8),第二轮PCR采用相同条件扩
增25个循环,PCR产物进行3%凝胶电泳鉴定。S基因区“a“表位片段(aall0一aal65)测序由上海英骏生物技术有限公司用ABI仪进行。
1.5基因型及HBsAg“a”表位基因突变分析测得的“a”表位片段(A)和S基因片段(S)序列与各自的基因型参比序列用MEGAv3.1(W
ww.
3100
DNA全自动测序
megasoftware.net)中的ClustM方法进行同源列队。同源队列用MEGAv3.1中的Neighbor-Joining法
(Kimura
two
parameter模型)构建进化树,Bootstrap
病毒核酸提取。提取试剂盒采用北京金麦格生物技
术有限公司的病毒DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法),按照厂家操作说明在Beckman室全自动工作站系统上完成。
裹1
Tab.1
验证复数为1000,Bootstrap值大于70%的系统进化分支认为具有较高的可信度。“a“表位基因片段按HBsAg的读码框
成氨基酸序列,通过与参比序列的比较分析其氨基酸突变情况嵋1。
Biomek
NX实验
三对检测乙肝病毒巢式PCR的引物
情况
Threepfime伟setsofnested—PCRassayforHBVDNA
2结果
2.1
贼HBsA毒慧篇蔷嚣乳嚣紫篙篙
10080
酶免检测及HBV隐匿性感染情况
阳性767份(阳性率7.67%),剩余9205份未检出阳性。其中HBsAg阳性108份和抗一HBC单独阳
份血浆用进口雅培HBsAg试剂和北京万泰抗一HBC
万方数据
性767份,共计875例完成了HBV—DNA逐份多区段检测。108例HBsAg阳性(年龄:29.7±8.01,男/女:l:1.04)标本有53例(49.1%)获得a表位基因序列,767例HBcAb单独阳性(年龄:35.8±9.47,男/女:1.66/1)标本有25例(3.3%)获得a表位基因序列。另外9205例其他反应模式标本以10例一组等量混合后进行HBV.DNA检测。
9972例HBsAg(一)标本中(抗一HCV、抗一HIV、抗.TP均为阴性,ALT正常),共发现25例HBV-DNA(+)的隐匿性感染者(0.25%)。25例均为抗HBc单独阳性标本,其他血清学模式标本均未检测出HBV—DNA阳性标本。
2.2隐匿性HBV感染携带病毒基因型分析
从
10
080份血浆中采取得15份a序列和16份s序
列。MEAG3.1软件进化分析测得,HBV基因C型12例(48%),基因B型13例(52%),未发现其他基因型。基因B型和基因C型之间没有明显的统计区别(P>0.05)。
2.3
HBsAg阳性HBV感染携带病毒基因型分析
从108份HBsAg阳性血清中采取得53份序列。MEAG3.1软件进化分析测得,HBV基因C型31例(58.5%),基因B型22例(41.5%),未发现其他基因型。基因B型和基因C型之间没有明显的统计区别(P>0.05)。
2.4隐匿性HBV感染者表面抗原“a”
发现5例
标本(20%)的毒株序列在该区域发生了异常变异(不包括血清型相关的氨基酸替代)。其中包括1例单独D144A突变(HZXZ-57,C基因型);1例T131P突变(HZXZ-441,C基因型);1例Q129H突
变(HZXZ埘5,B基因型);1例T126A突变(HZXZ-
490,B基因型);1例G145宰突变(HZXZ-590,B基因型);在HBsAg(+)所获取的53份序列中,发现10例标本(18.9%,型间突变126T除外)在“a”表位发生突变,隐匿性HBv.感染与HBsAg阳性感染者在“a”表位的突变率无差异(P>0.5)。3讨论
隐匿性HBV感染是指HBsAg检测阴性,HBV—
万方数据
DNA检测为阳性的一种感染情况。目前我国筛查献血者中是否感染HBV,主要采用酶联免疫检测HBsAg,HBsAg阴性,ALT正常的血液为合格血液。多数研究表明HBsAg阴性献血者中有隐匿性HBV感染者,比例在0.03%一0.3%¨。。
本研究中隐匿性HBV感染检测率达到0.25%,与各个地区隐匿性HBV感染情况存在较大差异,这可能与筛选方法与使用的试剂有关。
本研究中隐匿性HBV感染的基因型比例无明显的C型和B型差异,这与我们以往的研究存在区别。分析25例隐匿性HBV感染的S基因的“a”表位突变分析,隐匿性HBV感染(5/25,20%)与HBsAg阳性感染者(10/53,18.9%)在“a”表位的突变率无差异(P>0.5)。
隐匿性HBV感染发生机制有很多可能性H1,隐匿性HBV的分子病毒学研究的很多,s基因“a”高突变被认为与隐匿性感染发生机制存在很大关系”1,本研究中并未有此现象。隐匿性HBV感染的发生机制还未确切的阐明,在隐匿性HBV感染方面还需要进一步的研究。4参考文献
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NorderH,CouroueeAM,CoursaqetP,cta1.Geneticdiversityofhepatitis
B
virus
strainsderived
worldwide:genotypes。
subgenotypes,andHBsAg
subtypes.Intervirology,2004,47:
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WeinbergerKM,BauerT,BohmS,eta1.Highgeneticvariability
ofthegroup—-specifica・-determinantofhepatitisBvirussurface
antigen(HBsAg)andthecorrespondingfragmentoftheviralpolymeraseinchronicviruscarrierslackingdetectableHBsAgin
∞lxlm.GeneralVirol,2000,81:1165・1174.
(收稿日期:201l-05-26)
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