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石斑鱼神经坏死病毒传播途径阻断的初步研究 林克冰 方琼珊 吴建绍 周宸 何丽斌 林琪 王涵生 （福建省水产研究所，福建，厦门361012） 摘要：本文了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)苗种培育中亲鱼、卵、饵料等几个关键环节的病毒携带检测以及几种药物对病毒的消除效果的试验。用RT-PCR法检测，斜带石斑鱼亲鱼的粪便、卵、稚鱼、仔鱼，饵料轮虫、桡足类中都有检出神经坏死病毒(nervous necrosis virus，NNV)。聚维酮碘50～100 mg/L浸泡卵20min、浸泡轮虫、桡足类30min，盐酸吗啉胍3～5 mg/ L浸泡卵30min、浸泡轮虫、桡足类40min，聚维酮碘50mg/L+盐酸吗啉胍3mg/L浸泡卵20min、浸泡轮虫、桡足类30min可有效灭活所携带的神经坏死病毒活性。 关键词：斜带石斑鱼，神经坏死病毒，传播途径，阻断 鱼类神经坏死病毒(nervous necrosis virus，NNV)[1]，是一种世界范围内流行的海水鱼类病毒病，主要发生在海水鱼类种苗生产阶段，是近几年来石斑鱼苗种培育中危害最大的病原，鱼苗死亡率高达90%以上，给石斑鱼养殖业的发展带来严重的危害[3～4,7]。目前普遍认为神经坏死病毒的传播有水平传播和垂直传播两个途径[5～6]，明确两个传播途径病毒的携带者以及具体的传播途径，是种苗培育生产中防治神经坏死病毒病的关键。本文报告了斜带石斑鱼苗种培育中亲鱼、卵、饵料等几个关键环节的病毒携带检测以及几种药物对病毒的消除效果的试验，为深入研究神经坏死病毒传播途径奠定基础，同时也为石斑鱼苗种培育生产中神经坏死病毒病的防治提供理论依据。 1．和 1.1.1实验鱼：斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)亲鱼粪便分别于2007年8月16日取自福建省漳浦佛坛联合水产有限公司育苗室，2009年9月22日2010年10月18日取自诏安大华水产有限公司育苗场。 斜带石斑鱼卵、孵化稚鱼分别于2007年8月16日和2010年8月21日取自福建省漳浦佛坛联合水产有限公司育苗室、2009年8月26日取自东山乌礁湾育苗室、2008年9月23日2010年9月5日取自于澎湖渔业东山分公司育苗场。 斜带石斑鱼稚鱼分别取自于诏安大华水产有限公司育苗场和诏安海康水产养殖有限公司育苗场。 1.1.2饵料：轮虫分别取自诏安大华水产有限公司育苗场、诏安海康水产养殖有限公司育苗场、诏安梅岭海水鱼养殖土池，海区吊养牡蛎受精卵、海区捕捞桡足类、海区捕捞小杂鱼鱼糜。 上述样品取后立即冷冻后转入-65℃冷冻保存。 1.1.3 聚维酮碘：配成20mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200mg/L 盐酸吗啉胍：配成1 mg/L、3 mg/L、5 mg/L、7 mg/L、9 mg/L  聚维酮碘+盐酸吗啉胍：20mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200mg/L分别 加入3 mg/L的盐酸吗啉胍 1.1.4 卵、轮虫、牡蛎受精卵、桡足类分别用上述海水溶液浸泡一定时间后取少量立即 冷冻，然后转入-65℃冷冻保存 1.1.5 试剂盒：国家海洋局第三海洋研究所研制的神经坏死病毒RT-PCR检测试剂盒。 作者简介：林克冰,厦门东渡海山路7号9604，361012，Tel：,0592-*******，E-mail：kebingl@sina.com。 1.1.6 聚维酮碘为北大泰普科技有限公司生产，盐酸吗啉胍为吉林省博大制药有限公司生产 2．结果 1 斜带石斑鱼亲鱼粪便、1d稚鱼、杂鱼糜、牡蛎受精卵神经坏死病毒RT-PCR检测结果 Fig 1　NNV RT-PCR detection of Epinephelus coioides dung, 1d old larvae, surimi, oyster oosperm  批次 RT-PCR 批次 RT-PCR 批次 RT-PCR 粪便2007.08.16 ++ 稚鱼1（2007.08.06） ++ 鱼糜（2007.08.20） — 粪便2009.09.22 — 稚鱼2（2009.08.26） + 鱼糜（2008.09.25） — 粪便2010.10.18 — 稚鱼3（2008.09.23） — ML1（2007.08.07） —     稚鱼4（2010.08.21） ++ ML2（2007.09.13） —     稚鱼5（2010.09.05） — ML3（2008.08.20） —             ++ 表示强阳性，+ 表示弱阳性， — 表示阴性，ML 表示牡蛎受精卵 表2 聚维酮碘浸泡斜带石斑鱼卵20min前、后RT-PCR检测结果 Fig 2  NNV RT-PCR detection of Epinephelus coioides eggs before and after exposure to Povidone Iodine 20min 聚维酮碘mg/L 20 50 100 150 200 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 1（2007.08.06） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 2 （2008.09.23） — — — — — — — — — — 3（2009.08.26） + — + — + — + — + — 4（2010.08.21） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 5（2010.09.05） — — — — — — — — — —             表3 盐酸吗啉胍处理斜带石斑鱼卵30min前、后RT-PCR检测结果 Fig 3  NNV RT-PCR detection of Epinephelus coioideseggs before and after exposure to Moroxydine Hydrochloride 30min 盐酸吗啉胍mg/L 1 3 5 7 9 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 1（2007.08.06） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 2 （2008.09.23） — — — — — — — — — — 3（2009.08.26） + — + — + — + — + — 4（2010.08.21） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 5（2010.09.05） — — — — — — — — — —             表4 聚维酮碘、盐酸吗啉胍处理斜带石斑鱼卵20min前、后RT-PCR检测结果 Fig 4  NNV RT-PCR detection of Epinephelus coioides eggs before and after exposure to Povidone Iodine ＆Moroxydine Hydrochloride 20min 聚维酮碘mg/L 盐酸吗啉胍mg/L 20+3 50+3 100+3 150+3 200+3 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 1（2007.08.06） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 2 （2008.09.23） — — — — — — — — — — 3（2009.08.26） + — + — + — + — + — 4（2010.08.21） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 5（2010.09.05） — — — — — — — — — —             表5 聚维酮碘浸泡轮虫、桡足类30min前、后RT-PCR检测结果 Fig 5  NNV RT-PCR detection of rotifers＆copepods before and after exposure to Povidone Iodine 30min 聚维酮碘mg/L 20 50 100 150 200 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 轮1（2007.08.06） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 轮2（2007.08.10） — — — — — — — — — — 轮3（2008.08.13） + + + — + — + — + — 轮4（2009.09.02） — — — — — — — — — — 轮5（2010.09.15） — — — — — — — — — — 桡1（2007.08.30） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 桡2（2007.09.20） — — — — — — — — — — 桡3（2008.09.06） ++ — ++ — ++ — ++ — ++ — 桡4（2008.09.15） — — — — — — — — — — 桡5（2009.09.02） — — — — — — — — — — 桡6（2007.09.19） — — — — — — — — — —             轮：表示虫，桡：表示桡足类 表6 盐酸吗啉胍浸泡轮虫、桡足类40min前、后RT-PCR检测结果 Fig 6  NNV RT-PCR detection of rotifers＆copepods before and after exposure to Moroxydine Hydrochloride 40min 盐酸吗啉胍mg/L 1 3 5 7 9 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 处理前 处理后 轮1（2007.08.06） ++ ++ ++ — ++ — ++ — ++ — 轮2（2007.08.10） — — — — — — — — — — 轮3（2008.08.13） + + + — + — + — + — 轮4（2009.09.02） — — — — — — — — — — 轮5（2010.09.15） — — — — — — — — — — 桡1（2007.08.30） ++ + ++ — ++ — ++ — ++ — 桡2（2007.09.20） — — — — — — — — — — 桡3（2008.09.06） ++ ++ ++ — ++ — ++ — ++ — 桡4（2008.09.15） — — — — — — — — — — 桡5（2009.09.02） — — — — — — — — — — 桡6（2007.09.19） — — — — — — — — — —             轮：表示虫，桡：表示桡足类 表7 聚维酮碘、盐酸吗啉胍浸泡轮虫、桡足类30min前、后RT-PCR检测结果 Fig 7  NNV RT-PCR detection of rotifers＆copepods before and after exposure to Moroxydine Hydrochloride＆Povidone Iodine 30min 继续阅读