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‘上海免痤学杂志'2o。0年第 20卷第 3期 l59 ·
文it编号:1~1-24"/8(∞0ol034)159-04
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枸杞多糖对糖尿病小鼠模型免疫功能的影响
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6500 31
。
,/”/ 昆明医学院微生物学与免疫学教研室 昆明 ,
摘要:利用静脉注射四氧嘧啶【l00-n吕/kg)诱导制备糖尿病小鼠模型.观察 I.BP-D对四氧喀嚏致糖尿病小鼠免疫功能的影
响。研究
明,小鼠在注射四氧嘧啶后 72h,灌胃(ig)给予I~P-D。连续 10d,糖屎病小鼠Ns对照组免疫功能明显降低,而
LBP-D组显示 LBP-D具有明显促进小鼠淋巴细胞增殖、调节 T淋巴细胞亚群及提高 IL-1和IL-2水平的功能,使四氧嘧啶糖
尿病小鼠免疫功能恢复接近正常。研究结果显示.LBP-D对糖尿病模型小鼠有免疫调节治疗效应。
关键词:LBP.D;四氧嘧啶;糖尿病;淋巴细胞增殖;T淋巴细胞亚群;IL-1;IL-2
中固分类号:R392.6 文献标识码:A
T1Ie Effects of LBP.D On Imllume Funelions in Alloxan-I.ndueed Diabetes M ioe
neI1gXueduan, un,Xie P【lIin,JiaI1ghlzM,Zhao Chong(脚 ofMicrobi·
Kumm'ngMedical College,陆fnm 650031)
Ahtm'aet An experiment diabetes i,llOLis.e model was induced by inhaw删 s jrIjeetions of alloxan II]0凸0h im【e(100mg/
k ).and LBP-D w∞administrated 72 hours afterinjections of alloxanfor10 succe商ve d研B.ItwasfmmdthatU}P.D
had 8 remarkahlly enhancing effects on the immtme functions including the~nh~ t of lymphocyte proliferation,up-
regulation in tIle IlI哪be巧 of T lymphocyte subsets,elevations of theⅡ,1 and IL-2 levels。and recovery of the iHlnlU/lO-
compromisedfunctior~s oftIle alloxan—indUCed diabetes mice nearto norma1.11lese experimental rcsuhsimplicatethat
ⅡIP.D appeam t0 have a m叫 酬 at0 effect onthe alkrxan.induced diabetesmice.
Key wards LBP-D;alloxan monohydrate;diabetes;lymphoeytes proliferation;T lymphocy~ subpopulafiom;
Ⅱ,1:Ⅱ,2
糖尿病是一种常见的多发的内分泌代谢性疾
病,近年来发病率处于上升趋势,其死亡率仅次于
肿瘤和心血管病。高血糖还可诱发冠心病和动脉粥
样硬化,严重危害人类的生命健康。新近研究表
明⋯1,糖尿病患者可出现多种免疫功能的紊乱。采
用环孢霉素、硫唑嘌呤等免疫疗法治疗有严重的副
作用( ,而降糖药长期使用会失效[ 。因此从天然
药物中筛选和研究降糖药.已为世界各国工作者所
瞩目。近年来国内外对具有降糖作用的植物多糖的
化学和药理研究进展迅速l4J,多糖类成分不仅是一
种非特异免疫增强剂,而且还起到抗菌、抗病毒、
抗肿瘤等功能.并具有降血糖、降血脂、降血压等
多种作用,且无毒剐作用。本文首次研究了枸杞多
槔 D组份(Lycium batbammPolysaccharides.D.LBP-D
)对四氧嘧啶糖尿病小鼠免疫功能的影响。
*云南省教委应用基金资助项目(9612117)
回昆明医学院物理学教研室;0昆明医学院第二附属医院内分泌
科;@北京中国医学科学院动物所生殖生物学宴验室
1 材料和方法
1 1 主要试剂 RPMI1640培养基、脂多糖(u)s)、
刀豆蛋白 A(Con A)、四氧嘧啶、TnetIlyl a-D-man.
no~ide(a-MM)和噻唑蓝 (wrT)均为美国 Sitar产
品。三 联 细 胞 裂 解 液:10% SDS-5% 异 丁 醇.
0.O12mol/L HC1(w/v/v),小牛血清为中国医学科
学院血液研究所产品。小鼠T淋巴细胞亚群检测试
剂盒,购于北京医科大学免疫系。
1.2 药品 LBP-D按文献[5]方法从枸杞子中提
取。实验时用生理盐水(NS)配成所需浓度。
1.3 实验动物 ICR小鼠,体重 18—24g.雌雄兼
用.云南省天然药物研究中心动物室提供。BAL8/
c小鼠.23±2g,雄性,上海实验动物中心供应。
1.4 主要仪器 荧光显微镜,日本产Olympus(昆
明医学院第一附属医院中心实验室免疫室提供)。
722型光栅分光光度计.上海第三
仪器厂出品
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l60 ‘上海免疫学杂志)砌 年第∞卷第3期
(Q/YXLH4-92型)。ELISA仪(美国产 B~tek E 340
型,云南省天然药物药理重点实验室提供)。
1.5 动物模型 实验性四氧嘧啶糖尿病动物模型
的制备参见文献[6],四氧嘧啶由小鼠尾静脉注入,
剂量为 100mg/kg。正常对照组小鼠血糖为 5.89±
0.21mmoVL,模型组小 鼠用药前血糖 为 18.44±
0.81trano~L,用药后血糖在 8.60±0.38mmo~L~
9.81±0.~rmnol/L。LBP.D对四氧嘧啶糖尿病小鼠
血糖的影响另文发表。
1.6 给药方法 【cR小鼠随机分成5组(每组小鼠
数见结果表中),正常对照组和四氧嘧啶动物模型
组。后者在四氧嘧啶注射后 72h,开始灌胃给药
(ig)。正常对照组和四氧嘧啶动物模型的 对照
组:Ns每只鼠O.5ml/次;LBP.D三个剂量给药组
(200、400、~Omr/ .d)连续用药 l0d,第 l1天检
测免疫学功能。
1.7 淋巴细胞增殖实验 胸腺细胞和脾细胞增殖
实验按文献[7]进行。
1.8 T淋巴细胞亚群的检测_日 大鼠抗小鼠 cD4
及L 2单克隆抗体(MeA1))和 FITC.兔抗大鼠IgG
MeAb用 0.01~I/L P 按 1:10稀释。取 ICR小 鼠
的脾细胞(1×1o7/Hd)50 移人 40孔塑料培养板
中,离心沉淀弃上清后 ,加 cD4或 CD8 McAb40 L/
孔。非特异染色对照加等量的 RPM[1640液混匀,
4℃反应 30II1in,洗涤三次,弃上清,每孔加^
FIT(:.兔抗大鼠IgG 4叫 ,混匀,4℃反应 301/lin,洗
涤三次后加 1o0 Hanks液混匀,吸取 1O 置血球
计数板上,在荧光显微镜(激发光 490mn,屏障滤
板透光范围520nfn~530rim)下观察计数。每个样
品共计数 200个细胞 ,其中阳性荧光细胞数换算成
阳性百分率(%)。
1.9 Ⅱ 的测定
1.9.1 小鼠腹腔巨噬细胞(M中)的制备:取 ICR小
鼠,无菌收集腹腔渗出细胞(PEc),同组合并后用
~ 1640培养液洗二次,将细胞悬浮于含 10%小
牛血清 ~MI1640完全培养基中,调整细胞浓度到
2×106/Hd,接种至培养板上,于 37℃、5%c 饱
和湿度条件下培养 2—3h,然后洗去未贴壁细胞。
得到 M中单层。
1.9.2 Ⅱ厂1的诱生与检测L J:将上述 PEC悬液.
按每孔 1Hd加到 24孔培养板上,得到M中单层,
于各孔中加入 u)s(终浓度为 1 舀/Hd),培养 24h
后收获上清,作为 1样品。 1活性的测定用
Con A(2.5峭/n11)活化的 BAIB/c小鼠胸脲细胞增
殖 hfrr法 。
1.10 Ⅱ,2的测定
1.10.1 脾细胞的制备:BALB/e小鼠,摘除眼球
取血,断颈处死后,无菌取脾,制备单个细胞悬
液,将细胞用Hanks液洗两次,将细胞重悬于 RP.
~1640培养液,活细胞率>90%。
1.10 2 c∞A活化小鼠脾细胞的制备 J:取上述
小鼠脾细胞 5×106/Hd加 c∞ A 1O ,lml/孔分装
于24孔组织培养板个孔中,置 co2孵箱内培养
48h。收集培养细胞用 a-MM洗液(含 a.MM 20mg/~
的 RP~1640培养液)洗三次以除去 con A,然后重
悬于 ~ 1640培养液中作为 2活性的检测细
胞。
1.10.3 小鼠 Ⅱ,2活性测定"|9 J:Mrr比色法测定
Ⅱ 的水平。将 5×106/Ⅱd c∞ A活化的小 鼠脾细
胞 1o0 分别加入 96孔板中,再加入 1o0 1:8稀
释的待检样品,设培养液对照孔。经 4h培养后,
加入 hfrr溶液 20 ,孑L;继续培养 4h后,加入三
联液1o0 ,于37℃放置过夜,用 ELISA仪,选择
检测波长57onfn,参考波长630nm测定 值。
1.11 统计学分析 实验数据以 ±s表示,组间
比较采用 £检验。
2 结果
2.1 L田IP.D对小鼠淋巴细胞增殖的影响 小鼠在
注射四氧嘧啶后 72h,ig给药,模型 Ns对照组和
正常对照组均给等量 NS。连续用药 1od,第 11天
检测小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增殖实验,结果见表
1。由结果可见,模型 Ns对照组与正常对照组比
较,小鼠淋巴细胞增殖明显降低(P<0.O1),模型
LBlP-D三个剂量给药组均不同程度促进淋巴细胞增
殖,800me/ .d组能使小鼠胸腺淋巴细胞增殖基
本恢复至正常。
表 1 LBP-D对四曩嘧啶糖屎病小■;I‘巴细胞增矗的髟响
摸型 NS对照组与正常对帽组比较.△△P<0 01
用药组与 Ns对照组比较, P(0_0】:⋯ P
标准。另设正常对照组 100例.
均为本院体检的健康成人。受检者采静脉血2~3ml,分离
血清检测。
1 2 方法 IKISA法检测 Ⅱ 口、IL-2及 Ⅱ (采用海南华
美生物公司提供试剂盒)
2 结果
病毒性肺炎、哮喘发作期及对照组血清IFN- 、IL-2和
Ⅱ厂4测定结果(表 1)。
裹 1 病毒性肺炎 哮喘发作期爱对照蛆血清细胞因子含量(i± .n ,L
与对照组比较.*P(0.05
3 讨论
病毒感染造成 IFN-~I和IL-2大量产生,致使血清中的
Ⅱ 口和IL-2含量增加,而使 Ⅱ 受抑制,血清中Ⅱ 含量
降{氐。
哮喘的发病机制属于I型变态反应.当有抗原进人机
体后,诱发B细胞产生特异性 I uJ,已知Ⅱ,4可使静止 B
细胞活化并参与 类别转换产生特异性 I 。当哮喘处于
急性发作期时,Ⅱ,4大量产生,使得血清 Ⅱ 含量增加,
抑制了I~-rl、IL-2台成,致使血清中IFN-rl、IL-2的含量降
低。
关键词:病毒性肺炎;哮喘;细胞因子
中国分类号:R44,6.6 文献标识码:B
参考文献
[1] 武忠弼主编 .病理学 .第四版 北京:』、民卫生出版社,l9嘶:
2"29 (1999~4-14收稿,19994~-06日惨回)
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