聚丙烯酰胺凝胶的快速脱色及干胶的简易制作_张晓楠

聚丙烯酰胺凝胶的快速脱色及干胶的简易制作_张晓楠医学分子生物学杂志,2008,5(1):40-41　JMedMolBiol,2008,5(1):40-41通讯作者：张晓楠(电话:0,E-mail:zhangxn@fmmu.edu.cn)Correspondingauthor:ZHANGXiaonan(Tel:135********,E-mail:zhangxn@fmmu.edu.cn)技术与方法聚丙烯酰胺凝胶的快速脱色及干胶的简易制作张晓楠1，王爽2，侯颖31第四军医大学生物化学与分子生物学教研室　西安市,7100322第四军医大学电子显微镜中心　西安市,7100323第四军医大学药理学教研室　西安市,710032【摘要】　目的　建立一种聚丙烯酰胺凝胶快速脱色的方法及干胶的简易制作。方法　将滤纸条置于自来水中并加热作为脱色液，脱色完全后，用培养皿作为支持物制得干胶。结果与结论　本法所用脱色液脱色彻底﹑快速，所制干胶光滑平整，保存时间长。【关键词】　聚丙烯酰胺凝胶；脱色液；干胶；培养皿【中图分类号】　Q819QuickDecolorationofPolyacrylamideGelandSimplifiedPreparationofDryGelZHANGXiaonan1,WANGShuang2,HOUYing31BiochemistryandMolecularBiology,2CenterofElectronMicroscope,3theFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an,710032,China【Abstract】　Objective　Thetechniquesofquickdecolorationofpolyacrylamidegelandsimpli-fiedpreparationofdrygelwereintroduced.Methods　Filterpaperwasputintapwaterandheateduptobeusedasdecoloringsolution.Aftercompletedecoloration,thedrygelcouldbeobtainedbyusingculturevesselsassupport.Resultsandconclusion　Thismethodcanachievequickandcom-pletedecoloration,andthedrygelsoobtainedissmoothandlastlonger.【Keywords】　polyacrylamidegel;decoloringsolution;drygel;culturevessel　　用于蛋白电泳的聚丙烯酰胺凝胶经考马斯亮兰染色后，目前一般采用的脱色方法是用甲醇-醋酸体系或乙醇-醋酸体系[1-2]，同时制作聚丙烯酰胺凝胶干胶的方法大多是将凝胶置于玻璃板上或其他支持物上，然后将四周分别固定﹑封闭制得[3-4]。但在平常的实验中，脱色液用量相当大，长期使用，不但试剂成本耗费比较高，且甲醇也有毒性。为此。我们建立了一种不耗费试剂成本，也能达到满意脱色效果的脱色方法。当脱色完全后，用4周只封闭一次的培养皿制作法制得干胶，此法简单易行、且制得干胶效果好于一般传统的方法。1　材料和方法丙烯酰胺及双丙烯酰胺为华美公司产品；滤纸及培养皿均为国产产品。2　方法2.1　凝胶的快速脱色聚丙烯酰胺凝胶经过考马斯亮兰染色后用自来水冲洗3遍，将凝胶浸泡于盛有适量自来水的培养皿中，同时在皿中放入几条滤纸。再将培养皿置于微波炉中加热到70℃左右，置于脱色摇床震摇脱色。弃去变蓝的自来水，重新加入自来水，重复步骤3直至脱色满意。2.2　凝胶干胶的制作当脱色程度满意后，将胶置于含7%乙酸、5%甘油、20%乙醇的溶液中浸泡10min。取一个直径大于凝胶最长一边1cm左右的培养皿(底或盖均可，开口的一面朝下)。同时取一张尺寸比培养皿直径大2cm左右的玻璃纸，用水浸透，平铺于培养皿上。取出凝胶，将其平铺于已经放置了玻璃纸的培养皿上，再取一张与上张同等大小的玻璃纸，小心平铺于胶面上，同时用玻璃棒赶尽气泡。最后将胶上下两张玻璃纸四周多余的部分紧贴于培养皿边缘后用橡皮筋箍紧。将培养皿水平放置于阴晾处，等胶自然干燥后，撤去橡皮筋，按胶的大小剪去多余的玻璃纸，即制成干胶(装置见图1，图2)。图1　装置正面图图2　装置侧面图3　结果与讨论本实验所建立的脱色法简单易行，脱色液随手可得并大大节约了实验经费，且能达到和传统的脱色方法一样的效果。干胶制作快捷方便，保存时间长且避免了传统制胶时因紧贴胶的四周固定﹑挤压而产生过多的气泡，从而导致制凝胶的干裂。在脱色及制作干胶过程中需要注意的是:①微波炉加热脱色时，为了快速脱色，应少量多次加入脱色液，一次不宜加水太多；另外加自来水时，不要冲着胶面，以防胶被冲裂。凝胶脱完色后不宜长期保存于自来水中，否则会导致细菌的生长或一些染色较弱的条带在水中长时间浸泡会彻底脱掉，凝胶在水中长期存放也会变软易裂，如暂不做干胶，应置于7%乙酸、20%乙醇的溶液中保存。②制作干胶时为了防止凝胶干裂，一定要用干胶液(7%乙酸、5%甘油、20%乙醇)浸泡。气泡一定要排尽，否则凝胶会干裂，可在水中把气泡赶尽；凝胶一定要水平放置，否则多余的水流出后，凝胶也会干裂。另外，用橡皮筋箍前，先将胶四周的玻璃纸向下展抚，使其紧贴于培养皿的边缘。③凝胶干得过快，也易干裂，自然阴干最好，不要烘烤。如是银染，最好避光。另外橡皮筋不要过早取下，如胶未全干，凝胶会变形。为了防止干胶卷曲变形，剪去多余的玻璃纸后，将其夹于较厚的本中保存一周左右。本实验所建立的脱色及干胶制作法也适合银染后用。参考文献[1]　张延凤，张晓楠.微波在蛋白电泳染色和脱色中的应用[J].生物化学与生物物理进展,2002,29(1):158.[2]　张延凤，张晓楠.高浓度聚丙烯酰胺凝胶的简易干燥法[J].细胞与分子免疫学杂志,2001,17(6):526.[3]　张晓楠，张延凤.凝胶干胶的实验台制作法[J].生物化学与生物物理进展,2000,27(1):104.[4]　张玉魁，潘忠诚.一种快速DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染干胶技术[J].中国医科大学学报,2001,32(4):309.(2007-10-08收稿)·41·医学分子生物学杂志,2008,5(1):40-41　JMedMolBiol,2008,5(1):40-41