(完整版)磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

磷酸盐缓冲液(PBS)配制科研实验2010-04-2022:25:48阅读935评论0字号：大中小订阅0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS缓冲液(pH7.2〜7.4)：NaCI137mmol/L,KCI2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L称7.9gNaCl,0.2gKCl,0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L。保存于4°C冰箱中即可。需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7・4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4,100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各种另PH值的0・2MPB(100ml)配方:pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419mI81m7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8gNaCI、0.2gKCI、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCI调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034x105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4°C冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/mI青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCI8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20.30.4根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取NaCI8g,KCI0.2g,Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L，常温保存备用。PBST缓冲液取300“lTween20加入PBS100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法。十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~PH8.0的PBS配方详细NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1L。高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS）的配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液：称取磷酸二氢钾，9.07g6.803g,加蒸馏水至1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内，于4°C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下：pH甲液ml乙液mITOC\o"1-5"\h\z5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。