当归补血汤补血功效及其物质基础研究

8 中药药理与临床 2003；19(2) 姜、半夏单用或以不同 比例配伍对小 鼠小肠推进的影响，将更 有利于了解小半夏汤这一经典方剂的配伍与辩证施治的机理。 参考文献 l 】3uo Chen．Chtm Fu W u．Li Huang，ei a1．Effect of the aqueous extract of Xiao-Ban—Xia—Tang on gastric emptying in mice．Am J Chin Med，2002； 30(2～3)：207～214 2 陈 多．吴春福，王长洪，等 ．旋复代赭汤促 胃肠动力作用研究(I)对 小鼠胃排空的影响．中药药理与临床，1997；13(1)：4～6 3 陈 多，吴春福，王长洪，等．旋复代赭汤促 胃肠 动力作用研究 (III) 对小鼠小肠推进的影响 中药药理与临床，1997；13(4)：7--9 4 张 胜，吴春福．车 轶，等．半夏泻心汤对小鼠胃排空的影响 中药 药理与临床．2000；16(1)：l～3 5 张 胜，吴春福，车 轶，等．半夏泻心汤对小 鼠小肠推进功能的影 响．中药药理与临床，2000；16(2)：1～3 6 彭平健 生姜的药理研究和临床运用．中国中药杂志．1992；17(6) 370 7 Yamahara J，Huang QR．Li YH．Ct al Gastt~Jinte．,'tirM motility en— hancing effect of ging er and its active constituents Chem Ph㈣ Bull (Tokyo)，1990；38：430～431 8 Niijkm A．Okui Y’Kub0 M．et a1．Effect of Pinellia temate tuber on the efferent activity of gastric vagus nerve in the rat Brain Res Bul1．1993； 32：103～ 106 9 Huang OR．1wamoto M．Aoki S，et a1．Anti一5一hydroxytryptamme3 ef— fect of galanolactone，diterpenoid imlated from ginger Chem Pharm Bull (Tokyo)，1991；39：397～399 Effect of Xiao Banxia Tang(小半夏汤)on small intestinal transit in mice Chen Duo，Wu Chunfu，Huang Li，Ning Zhuo (Department of Pharmacology，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 1 10016) Xiao Banxia Tang，a recipe prescribed in tWO thousands years ago by Doctor Zhang Zhongjing，is composed of Zingiber officinale and Pinellia temate．Clinically,it is used for treatment of vomit In the present study，the effect of Xiao Banxia Tang on charcoal transit in small intestine of mice was investigated．The results showed that Xiao Banxia Tang promoted intestinal propulsion in naive mice and antago— nized dopamine and 1-ephedrine induced transit inhibition．However． it failed tO reverse the transit inhibition induced by dl—fenfluramine． The above results suggested that Xiao Banxia Tan g enhanced intestinal tran sit via the mechanisms of action involved in the dopaminergic and adrenergic，but not the serotonergic，systems． Key words Xiao Banxia Tan g；intertinal tran sit；dopamine；1-ephedrine；dl·fenfluramine 当归补血汤补血功效及其物质基础研究 危建安 黄兆胜 吴 利 (广东省中医院 广州中医药大学 佛 山市中医院 广州 510120) 提 要 目的：以T淋巴细胞百分数为指标，探讨当归补血汤的有效部分。方法：用极性由小到大的四种有机溶刺依次萃取 全方水煎液，所得各供试部分给血虚模型小鼠灌 胃。结果 ：未发现 某一供试部位对 T淋巴细胞百分数恢复作用强度等 同全方 ；各部 分相互组合后作用增强，正丁醇部分与水层部分组合功能最强，与全方比较无显著性差别(P>0 05)。结论 ：全方有效物质基础主 要存在正丁醇与水的极性 区间。 关键词 当归补血汤 ；物质基础 ；血红蛋白 1 实验 1．1 试 验药物与试 剂 黄 芪 Astrglus membranaceus(Fisch．) Bge．，产地山西；当归 Angelica sinensis(Oliv．)Diels，产地甘肃， 均购于广州金匮公司。复方阿胶浆 (山东东阿阿胶股份有限公 司出品：20000912—3)。 1．2 动物 NIH小鼠，22～26g，雌雄各半，由广东省医学实验 动物 中心提供，广东省实验动物合格证 2000A025号。 1．3 方法 1．3．1 试验样品 全方水煎液：当归与黄芪按 5：l比例称量， 预先浸 泡 3rain，第 一 次 加 7倍 药 材 的水 量，煮 沸 后 文火 煮 40min，第二煎加 3倍水量。煮沸后文火煮 40min。合并两次所 得药液，过滤，浓缩至 lg饮片／rrd水煎液，冷藏备用。 取 500ml当归补血汤水煎液，先后用石油醚、氯仿 、乙酸乙 酯、正丁醇萃取，最后所得水层保留，4种有机溶剂萃取液均用 旋转蒸发仪减压回机溶剂．用蒸馏水转溶，其中石油醚、氯仿萃 取部分所得浸膏需要加入少量吐 温 一8O助溶。乙酸乙酯部分、 正丁醇部分和水层部分能直接溶于蒸馏水 中。各部分转溶后， 均定量为250ml，即含 2g饮片萃取液浸膏／Tnl，冷藏备用。 1．3．2 气虚模型的复制与给药 小鼠按饲料量 lOOg／kg体重· d饲养 2日后，改为 50 体重·d，继续饲养 5日，分批把出现 体重下降、精神萎靡、皮毛枯槁易脱落 、尾巴发黄无光泽 、四肢无 力、耐寒能力下降等虚弱症状 的小 鼠挑选为实验动物，并用一 定饲料维持“气 虚”状态；未 出现“气虚”证小 鼠继续限食饲养，直 维普资讯 http://www.cqvip.com 中药药理与临床 2003；19(2) 9 至全部小鼠均出现“气虚”证。 造模完成后，随机分组．正常组不经任何处理，模型组给予 等体积蒸馏水 ；灌胃给药，同时恢复正常饮食，除高剂量组给药 2次／日，其余各组 1次／日，连续给药 7日，末次给药后 lh尾部 取血制作血涂 片。 1．3．3 血涂 片标本制作 固定 ：剪尾采血涂 片，血涂 片 自然干 燥，置 4℃ 甲醛。丙酮缓 冲液中 lmin，流水冲洗数次，蒸馏水 冲洗 2次，自然干燥。孵育 ：将固定干燥后的血涂片浸人孵育染色液 中，置 37℃孵育 3h后，冲洗与干燥方法同上。染色 ：置 1％孔雀 绿溶液中复染 5min，冲洗与干燥同上，保存，备观测。 1．3．4 T淋 巴细胞计数 在油镜下观察，核呈绿 色，占细胞绝 大部分，胞浆少的细胞 即淋巴细胞。其 中 T淋 巴细胞胞浆 中有 明显黑红色颗粒(而 B淋巴细胞 无此颗粒，以此区别两种淋 巴 细胞 )，计数 100个淋巴细胞，算出 T淋 巴细胞百分数。 2 结果 2．1 当归补血汤对气虚小鼠 T淋巴细胞百分数影响 表 1结 果表明，全方有明显提高 T淋巴细胞 百分数的作用。 表 l 当归补血汤对气虚小鼠 T淋巴细胞百分数的影响 ( ±s) 与模型组比较 *P<0．05 2．2 当归补血汤各提取部分对气虚小鼠T淋巴细胞百分数的 影响 结果见表 2、3。结果表 明，各部分有不同程度 的提高 T 淋巴细胞百分数作用，但与全方 比较有显著性差异(P<0 05)， 即各部分均不能等同全方提高 T淋 巴细胞百分数的功效。 表 3 乙酸乙酯、正丁醇和水屡部分对气虚小鼠 T淋巴细胞百分数 的影响( ±s) 与全方比较有显著性差异 *P<0 05 表 4 各提取部分组合对气虚小鼠 T淋 巴细胞百分数的影响 ( ! 表 2 石油醚部分及氯仿部分对气虚小鼠 T淋巴细胞百分数 的影 与全方组相比 P>O 05 响 ( ±s) 与全方组比较 *P<0 05 2．3 各提取部分组合后对气虚小鼠T淋巴细胞百分数的影响 各部分单独进行实验未 发现某一供试部位对气虚小 鼠 T淋 巴细胞百分数提高功能等同全方效果，此步 实验拟采用五个供 试部位两两组合灌 胃，各部位 剂量采用与全方相 同的剂量，为 13．2g／kg·d，其余操同上。结果见表 4，结果表明：正丁醇 +水 层组合部分作 用最强，且与全方组 比较无显 著性 差异 (P>0． 05)．推测认为该组合部分是全方补血的物质基础。 3 讨论 气虚是身体多脏腑的机能活动减退，也是 阳虚、脾虚、肾虚 等虚证的初级阶段。由于各种虚证 的病 因多半相同，生理生化 指标的改变在各种虚证中往往相同，这些给气虚动物模型制作 造成一定困难。 目前有根据“血虚气损”理论用慢性失血方法造 成家兔气虚模型、根据“过度 劳倦有伤形体”理论用强制性游泳 方法造成大 鼠气虚模型、根据 “饥则损气”理论用饥饿方法造成 小 鼠气虚模型等动物模型，考虑操作 的简 易性，故采用小 鼠饥 饿气虚模型。 全方具有明显提高 T淋巴细胞百分数的作用，各提取部分 单独实验时也有提高 T淋 巴细胞 百分数 的作用，但无显著性差 异；在提高 T淋 巴细胞百分数这一功效上，没～个部分补血功 效可以取代全方。组合给药后，正丁醇部分与水层、全方组 比较 无显著性差别 (P>0．05)，表 明乙酸乙酯部分 与正丁醇部分后 的功效与全方对血虚小 鼠 Hb升高 的促进功 能相 等或相 近，认 为是全方的主要物质基础。 极性相似的物质结构多相似，按照物质极性将传统复方分 离进行药理实验，探讨发挥药理功效的物质基 础的研究模式尚 未见相似报道，在当归补血汤的研 究中也是首次。各部分 单独 维普资讯 http://www.cqvip.com 10 中药药理与临床 2003；19(2) 实验未发现某一有效部分，组合后 实验发现正丁醇 与水层部分 组合是全方的主要物质基础。可推测发挥补血功效 的物质主要 集中在正丁醇与水极性区间，该极性区间的物质可能 主要是黄 芪的苷类、苷元及 当归 的酚性 物质等，具体成分有待进一步探 讨。 参考文献 1 金若敏，陈长勋。张峥蝾，等 ．内芪毛状根对造血功能的作用 ．中药 材。1998；21(1)：26--28 2 张英华，武桂兰．姜廷良 ．当归补血汤及其含药血清对小 鼠红系造血 祖细胞克隆的影响 ．中国实验方剂学杂志。1999；5(4)：33--36 龟龄集抗衰老作用研究 刘亚明 牛 欣 冯前进 王世民 曹月英 (北京中医药大学， 北京 100029， 山西中医学院， 太原 030024， 山西省中医药研究院， 太原 030012) 提 要 本文对老年小鼠灌服龟龄集0．125g／kg、0．25g／kg和党参0．5 50天，测定SOD，MDA、GSH．PX、NA和DA，结果 显示，龟龄集能明显提 高老年 小鼠 SO D和 GSH-Px的含量，减 少 MDA含量，龟龄 集还能明显增加老年小鼠单胺类神经递质的含量． 表明龟龄集有抗衰老作用。 关键词 龟龄集 ；抗氧化 ；NE；DA 龟龄集有增强小 鼠免疫 功能，促 进性激素、肾上腺皮质激 素合成，促进小 鼠 RNA、蛋白质合成，增加心血排出量．抗疲 劳、 抗缺氧和保肝等作用 ’¨引。我们发现龟龄集有显著的抗脂质过 氧化作用 J．为了进一步观 察 龟龄集 的抗 衰老作用及机理．本 文对老年小鼠中枢神经递质去 甲肾上腺素 (NE)、多 巴胺 (DA) 及 SO D、GSH-Px、MDA含量进行 了测定，现将结果报道如下。 1 材 料 1．1 试验药物 龟龄集散剂，山西中药厂产，批号 990713。 1．2 动物 昆明种小 鼠，体重 33±2g，雌雄各半，由山西省 中 医药研究院实验动物 中心提供。 1．3 试剂 去甲肾上腺素(NB)重酒石酸盐 (中国药 品生物制 品检定所．批号 9402)；多 巴胺(DA)盐 酸盐 (中国药品生物制 品 检定所．批号 9404)；S0D试剂盒、MDA试剂盒、GSH—Px试剂盒 (均购 自南京建成生物工程研究所．批号 990828)。 1．4 仪器 高效 液相 色谱仪 LC-10Avp系 列(日本 岛津 )。L— ECI)-6A电化学检测器。 1．5 方法 1．5．1 标准液配制 取去 甲肾上腺素(NE)、多 巴胺 (DA)标准 液分 别配成浓度为 lg／L的标准液。贮存于 一20℃ 冰箱 内， 时配成浓度为 0．1mg／L的应试液。 1 5．2 色谱测定条件 荧光检测激发波长设置为 280nm．发射 波长设置为 315nm，室温保持在 25℃左右，以峰面积定量计算。 并建 立标 准品的分离色谱 图及 NE、DA工作 曲线及线性方程 式。 1．5．3 分组与测定 将老年小 鼠(3月龄)50只，随机分 5组 ： 即老龄组，龟 龄集 小、中剂量组和 党参 组。另取 10只 (1．5月 龄)小 鼠为对照组。小 鼠每 日灌服蒸溜水或药物饲养 50d。处 死小 鼠取血分离血清参照文献 J方法分别进行小鼠 MDA、SO D 及 GSH—Px含量测定。另将 动物 断头置于 冰台上，迅速取 出脑 组织并快速保存于液氮中备测。另将小鼠全脑(除去小脑)称 重后，放入含 0．5mol／L EDTA、0．01％半胱氨 酸的 0．4mmol／L HCIO4冷溶液中匀浆．于 4"C10000g离心 10retain。取 清液与 1／2体积的钾盐溶液混 合，冰溶液 中静置 10min 进样前 用 0 45 m的滤膜过滤，10000g高速离心 10rain，取上清液 20tA测定 NE、DA含量。 2 结果 龟龄集对老年小 鼠血清中 MDA、SOD及 GSH—Px含量的影 响见表 1。 表 1 龟龄集对老年小鼠血清中 MDA、SOD及 GSH．Px含量的影响 (j：±s，rl=10) 与老龄对照组比 *P<0 05，**P<0 01(F同) 龟龄集对小鼠脑单胺类神经递质含量的影响见表 2。 表 2 龟龄集对小鼠脑单胺类神经递质含量的影响 (j±s) 3 讨论 脂质过氧化是指机体代谢产生 的 自由基诱导生物 膜中不 饱和脂肪酸发生氧化反应，形成过氧化产物 Mr)Ac衰老可使细 胞膜磷脂分子产生脂质过氧化。MDA能使膜蛋白、酶发生交联 反应，使膜通透性增加，导致细胞膜结构、功能和代谢 发生改变． 对机体造成损害。血清MDA含量多少能反映细胞膜脂质过氧 化的强弱，龟龄集能 明显抑制衰老动物血清 MDA生成和 明显 维普资讯 http://www.cqvip.com