动物细胞融合和单克隆抗体(用)

复习巩固：1.植物体细胞杂交2.植物组织培养2010-3-26*第一页，共25页。植物体细胞杂交植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合杂种细胞组织培养杂种植株去细胞壁纤维素酶、果胶酶化学法物理法诱导2010-3-26*第二页，共25页。1.概念：动物细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交（somatichybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成一个细胞的过程。一、动物细胞融合融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。2010-3-26*第三页，共25页。2、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）例如：仙台病毒2010-3-26*第四页，共25页。灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）生物法：灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）2010-3-26*第五页，共25页。病毒促使细胞融合的主要步骤如下：两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。2010-3-26*第六页，共25页。4、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、诱导方法质融合、核融合）单核细胞2010-3-26*第七页，共25页。5、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。2010-3-26*第八页，共25页。6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途制备单克隆抗体获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒2010-3-26*第九页，共25页。2、什么是抗体？二、单克隆抗体回顾3、抗体的分布？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克隆？“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.2010-3-26*第十页，共25页。由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。1、单克隆抗体概念:2010-3-26*第十一页，共25页。该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？思考：如何大量获取某种特定抗体？2010-3-26*第十二页，共25页。B淋巴细胞特点：３.每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。１.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。2010-3-26*第十三页，共25页。怎样才能大量生产单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？2010-3-26*第十四页，共25页。2、单克隆抗体的制备过程自学与思考：1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？2010-3-26*第十五页，共25页。B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2010-3-26*第十六页，共25页。比较项目第一次筛选第二次筛选原理在选择性培养基中添加某种药物，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长抗原—抗体的特异性结合目标杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞2010-3-26*第十七页，共25页。3.单克隆抗体的应用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与一定抗原特异性结合。优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗2010-3-26*第十八页，共25页。2010-3-26*第十九页，共25页。两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个优势课堂小结你记住了吗？－－灭活的病毒－－杂交瘤细胞－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势2010-3-26*第二十页，共25页。形成杂种细胞获得杂种植株结果物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目1、植物、动物细胞融合的比较课堂小结融合前处理用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散2010-3-26*第二十一页，共25页。2、单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体2010-3-26*第二十二页，共25页。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？课堂练习2010-3-26*第二十三页，共25页。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC(3)A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4)图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞产生专一抗体无限增殖课堂练习2010-3-26*第二十四页，共25页。B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC（5）__________技术是单克隆抗体的技术支持。动物细胞培养（6）单克隆抗体的特点________________，并可大量制备。特异性强，灵敏度高课堂练习2010-3-26*第二十五页，共25页。