手工法及自动血细胞分析仪法进行红细胞、白细胞、血小板检查

手工法及自动血细胞分析仪法进行红细胞、白细胞、血小板检查血液的基本知识AddYourText血液的组成conceptConceptConceptConcept血液的基本知识血液的概况血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。水分占91%~92%。理化特征：红色（血红蛋白）不透明，含量占体重的7-9%，约5L。Ph值为7.35~7.45，比重为1.05~1.06，相对粘度为4~5，渗透压为2.6~3.9kPa。血液的基本知识血细胞的分类和形态寿命：7天120天8天直径：60~120fl120~1000fl2~30fl(20um)(6.7~7.7um)(2~3um)功能：抗感染，免疫　　携氧，代谢产物　　　　凝血功能白细胞红细胞血小板血液的基本知识白细胞的种类中性粒细胞（75%）单核细胞（5%）淋巴细胞（25%）嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞（顺序同下图）经过瑞氏染色后的各种白细胞手工法检测血细胞手工计数红细胞（显微镜法）检测原理显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定范围内的红细胞，经换算得每升血液中的红细胞数。操作1、10ul末梢血或EDTA抗凝静脉血2、加入2ml等渗液中，混匀3、混悬液充入改良牛鲍计数板4、高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个中方格内的红细胞总数A。5、换算手工法检测血细胞手工计数白细胞（显微镜法）检测原理显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定范围内的白细胞，经换算得每升血液中的白细胞数。操作1、20ul末梢血或EDTA抗凝静脉血2、加入380ul等白细胞稀释液液中，混匀3、混悬液充入改良牛鲍计数板4、高倍镜下计数四角及中间5的大方格的白细胞总数A。5、换算手工法检测血细胞手工法计算血小板显微镜直接计数法（1）普通光学显微镜计数法（2）相差显微镜计数法1、普通光学显微镜检查（手工法）原理：类似红（白）细胞手工法计数计数中央大方格内四角和中央共5个中方格的血小板。2、相差显微镜直接计数法利用样品中质点折射率的不同或质点厚度的不等，产生光线的相位差，提高细胞的清晰度和立体感，增强分辨率。（手工法的参考方法）自动血细胞分析仪检测血细胞血细胞分析仪的知识1、血球仪发展50年代~80年代（半自动）：需将样本经机外稀释后才能检测，易受干扰，随机误差也大。80年代后（全自动）：血液直接被吸入血液细胞分析仪后，在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测，有较高的精确度和准确性。近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、涂片机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。自动加样系统和真空采血管的应用，避免实验室的随机误差，提高工作效率，避免实验环节造成的血行感染，成为仪器发展和使用的潮流。自动血细胞分析仪检测血细胞2、细胞分析原理：阻抗法血红蛋白测量:光电比色法氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法。其它参数：通过计算机内换算白细胞分析原理自动血细胞分析仪检测血细胞白细胞分析原理加溶血素后，白细胞大小分布如下：第一群：小细胞区（35~90fl）淋巴细胞第二群：中间细胞（90~160fl）嗜碱性、嗜酸性、单核第三群：大细胞区（160fl以上）中性粒细胞自动血细胞分析仪检测血细胞血细胞分析仪的基本工作原理血细胞分析仪的类型电学型电阻型：利用血细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。电容型：利用电极间加高频，血细胞通过时，静电容量发生变化而计数光学型血细胞固定型：利用光散射计数。血细胞流动型：利用流体力学原理计数自动血细胞分析仪检测血细胞1、电阻抗法电阻阻抗法计数原理血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件---阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。自动血细胞分析仪检测血细胞电阻阻抗法计数原理自动血细胞分析仪检测血细胞白细胞的计数1、白细胞的三分类血液细胞分析仪将白细胞按体积大小（电压幅值的高低）从35~450fL分为256个通道，每个通道1.64fL，细胞按大小放在不同的通道中，得到白细胞的直方图。第一群（35~90fL）：淋巴细胞第二群（90~160fL）：单核细胞（中间细胞）第三群（>160fL）：中性粒细胞（大细胞）自动血细胞分析仪检测血细胞WBC直方图自动血细胞分析仪检测血细胞RBC直方图自动血细胞分析仪检测血细胞PLT直方图自动血细胞分析仪检测血细胞2、新的方法①容量、电导、光散射（VCS）测导法②阻抗与射频技术联合检测分类法③光散射与细胞化学技术联合应用④其它：多角度偏振光散射白细胞分类（MAPSS）自动血细胞分析仪检测血细胞1、激光法近十余年来，随着半导体激光器技术的进步，使用（相关试剂处理加激光加流式细胞术）方法的白细胞五分类血球仪成为当前的主流。激光法五分类血球仪使用光散射进行测量都是基于Mie散射理论，如东亚SF3000通过激光激发产生荧光进行血细胞分析成为高档机型的基本技术，如东亚XT1800系列，XE2100自动血细胞分析仪检测血细胞激光法检测原理自动血细胞分析仪检测血细胞2、多角度激光偏振光散射检测法90°消偏振光散射将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来10°狭角散射光用来测定细胞结构0°前角散射光用来测定细胞的体积90°垂直散射光对细胞内部颗粒及细胞质进行测量自动血细胞分析仪检测血细胞3、鞘流技术液体流动状态有一个分界点，这是一个常量等于2300，既称为雷偌数Re。Re=dρv/ηd–管内经，ρ-密度，v–流速，η-粘滞系数当Re<2300时液流处于层流状态，Re>2300时液流处于湍流状态。假设：流体为纯水ρ=1，η=1，d=100μm代入公式计算得：v=23米/秒此值即是纯水的湍流、层流分界点。自动血细胞分析仪检测血细胞射频检测原理细胞壁不能使低频电流通过能通过高频电流。细胞核的大小和密度不同，它们对高频电流的阻抗也不同，因此可以用来区分白细胞。射频与电阻抗联合检测原理自动血细胞分析仪检测血细胞5、电阻抗和射频电导这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞①淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细和中性粒细胞三个群体。②嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统：在细胞悬浮淮中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。③幼稚细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。SYSMEX公司的SE9000血细胞分析仪自动血细胞分析仪检测血细胞血液分析仪法检测红细胞采用电阻抗法或激光检测法方法学评价方法优点缺点适用范围显微镜计数法传统方法，设备简单，廉价费时费力，精密度低参考方法；分析仪异常结果复核血液分析仪法操作便捷，易于化，精密度高价贵；环境要求较高健康人群普查；大批量标本筛检血液分析仪法检测血小板电阻抗法核酸染色荧光散射法单克隆抗体染色荧光散射法1血小板2大血小板3红细胞4红细胞碎片5碎片6红细胞影B低角度放大的散射光信号A高角度放大的散射光信号XE-5000双方法检测血小板方法一：鞘流电阻法(PLT-I)能准确计数绝大数正常形态和数量PLT方法二：核酸荧光染色光散射法(PLT-O)－对数量少形态异常PLT准确性高－鉴别PLT、小RBC、各种细胞碎片准确性高荧光染色光散射法流式细胞仪法用免疫法荧光素标记特异的血小板单克隆抗体。（参考方法）方法学评价计数方法优点缺点备注相差显微镜直接计数法准确性高，血小板易于识别所用仪器昂贵手工血小板计数的参考方法血细胞分析仪计数法计数简便、快速、重复性好，同时测定MPV、PDW等多项指标不能完全区分血小板与其他类似大小的物质常规筛检方法流式细胞仪法特异性强，可区分红细胞和血小板检测成本高参考方法血液细胞分析仪的评价精确度（准确性）高携带污染率低重复性好线性范围可比性高手工法与自动血细胞分析仪检测血细胞的对比手工法血细胞分析仪手工法操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实验结果的精确性、准确性差。血细胞分析仪测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、高效。为临床提供更多有用的实验数据ThankYou!