岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪操作规程

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪操作规程一．系统配置系统组成：本系统由DGU-20A3脱气机、2个LC-20AT溶剂输送泵（分为A，B泵）、7725i手动进样器、色谱柱（2个C18柱，3个手性柱）、SPD-20A紫外-可见检测器、LCSolution（Version.1.2）中文工作站等组成。二．准备工作1．流动相准备：使用前按待检测样品的检验方法准备所需的流动相（水使用蒸馏水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的0.45μm滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，水相使用前必须过滤，有机相用肉眼观察有颗粒时必须过滤）。2．色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向）。3．样品溶液配置：配置样品和溶液，用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。4．检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。三．开机、参数设定及平衡系统1．开机：接通电源，依次开启B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。2．排气泡或更换流动相的操作方法1）将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2）逆时针转动A/B泵的排液阀180o；3）按A/B泵的【purge】键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4）将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5）如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。6）如按以上方法不能排尽气泡，从色谱柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为5ml/min冲洗3分钟，停泵后重新接上色谱柱并将流速重新设定为规定值。3．参数设定1）波长设定：一般设为254nm。2）流动相设定：流速开始不宜太高应为正常分析流速的50％～80％冲洗一段时间，等待柱压平稳后可调节到正常流速（调节流速时应该每次增减0.1ml/min，不宜调节过快，柱在线时流速一般不超过1ml/min）。流动相比例设为初始比例冲洗柱子，等待基线平衡。4．平衡系统和色谱柱1）在工作站操作软件上设定各项方法参数，系统至少需要平衡0.5h，色谱柱需冲洗至基线平稳。2）等度洗脱方式eq\o\ac(○,1)用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。eq\o\ac(○,2)检查各管路连接处是否漏夜，如漏夜应予以排除。eq\o\ac(○,3)观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可判断为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作eq\o\ac(○,4)观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.1mV/min时，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。3）梯度洗脱方式eq\o\ac(○,1)以检查方法规定的梯度初始条件平衡系统。eq\o\ac(○,2)在进样前运行1~2次空白梯度。eq\o\ac(○,3)梯度洗脱后至少需要10倍柱体积的初始比例流动相冲洗柱子至平衡才可再次进样。4）如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。5）如系统为正相或反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。四．数据采集1．进样前基线调零，点击【SingleStart】快捷方式，键入样品ID,选择数据存储路径及数据文件名，点击【OK】。2．用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。3．在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至“load”状态，注入样品，旋回“inject”位置，抽出进样针，进样结束，开始采集数据。4.再次分析时待色谱柱平衡后重复上述操作。5．在不进样时随时插入封口针。五．分析数据的处理和分析报告的打印1．分析数据的处理：点击工作站启动图标的【Postrun】进入数据分析，在左侧数据栏里找到要分析的数据文件，双击，点击左侧辅助栏中的【Wizard】一步一步进行积分设置，积分完成后保存数据文件。2.分析报告的打印：点击左侧辅助栏中的【DataReport】，选择想要的报告模式，将处理好的数据文件拖曳到报告模式里，打印报告。六．清洗系统关机1．手动进样器清洗：用注射器吸20ml超纯水后套上冲洗头，将冲洗头轻轻顶在进样口上（不宜用力过大，否则容易损坏进样口），使进样阀保持在“load”位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。2．色谱柱清洗：分析结束后继续以分析中使用流动相冲洗10分钟以上，待基线平稳后关闭检测器，继续冲洗色谱柱10个体积。1）如果流动相不含缓冲盐，可以用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30分钟以上后把流速设为零，然后关闭所有仪器设备，顺序为：先退出工作站软件，再依次关闭检测器、泵。2）如流动相含缓冲盐可先用纯水冲洗20～30分钟后再用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）冲洗30分钟以上，流速设零后再关闭仪器各部分电源，然后关闭总电源离开实验室。编写人：王辉审核人：