血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定

血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。ALTL-丙氨酸+-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+HLDH（乳酸脱氢酶）+L-乳酸+NAD++H2O加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1]标本：2.1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。标本运输：常温条件下保存运输。标本拒收：标本溶血、细菌污染的标本。实验材料6.1试剂申能ALT测定试剂盒（货号：141270171701试剂16×64ml试剂26×16ml）6.1.1试剂组成试剂1（R1）：Tris缓冲液pH7.5100mmol/LL-丙氨酸500mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/L试剂2（R2）：a-酮戊二酸15mmol/LNADH0.18mmol/L磷酸吡哆醛试剂：Good’s缓冲液pH9.60.7mmol/L磷酸吡哆醛0.09mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。仪器：贝克曼AU680生化分析仪操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品ALT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。12.参考值范围[4]不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛女性<31U/L10～35U/L男性<41U/L10～50U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。临床意义[1,2]：丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反应。ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测，可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。比率<1y=1.00x+0.00U/L含磷酸吡哆醛预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。操作性能14.1线性范围4～800U/L14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。不含磷酸吡哆醛批内xsCV天间xsCV精密度(U/L)(U/L)(%)精密度(U/L)(U/L)(%)n=20n=20样品122.80.703.08样品122.21.386.22样品242.60.681.60样品244.81.172.62样品399.30.920.92样品31011.021.00含磷酸吡哆醛批内xsCV批间xsCV精密度(U/L)(U/L)(%)精密度(U/L)(U/L)(%)n=20n=20样品133.30.992.96样品133.81.253.71样品272.11.361.88样品272.02.042.83样品31331.761.32样品31282.772.1614.3方法学比较：不含磷酸吡哆醛本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行ALT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：；r=0.999。本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对80个样品进行ALT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.994。14.4灵敏度：本试剂的检测限为4U/L。14.5病人结果可报告范围4U/L-800U/L15.超出范围结果处理本法对ALT活力检测的最大A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。病危报警值的处理方法局限性17.1本法对ALT活力检测的最大A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度684mol/L，血红蛋白浓度4.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。参考文献1.ThomasL.AlanineaminotranSHerase(ALT),AspartateaminotranSHerase(AST).In:ThomasL,editor.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.55-65.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.3.BergmeyerHU,HorderM,RejR.InternationalFederationofClinicalChemistry(IFCC)ScientificCommittee,Analyticalsection:approvedrecommendation(1985)onIFCCmethodsforthemeasurementofcatalyticconcentrationofenzymes.Part3.IFCCmethodforalanineaminotranSHerase(L-alanine:2-oxoglutarateaminotranSHerase,EC2.6.1.2).JClinChemClinBiochem1986;24:481-95.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.EinfuhrungderneuenStandardmethoden1994zurBestimmungderkatalytischenEnzymkonzentrationenbei37℃.DGKlinischeChemieMitteilungen1995;26:190-2.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置》执行。