高效液相色谱法同时测定枸橼酸苹果酸粉消毒剂中枸橼酸和苹果酸的含量_梁劲康

动物医学进展，２０１７，３８（４）：７５－７９Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ高效液相色谱法同时测定枸橼酸苹果酸粉消毒剂中枸橼酸和苹果酸的含量　收稿日期：２０１６－０９－０７　作者简介：梁劲康（１９９０－），男，广东开平人，硕士，主要从事兽药新剂型与新技术研究。＊通讯作者梁劲康，方炳虎，黎乃添，吴志玲，吴广辉，张桂君＊（广东温氏大华农生物科技有限公司，广东云浮５２７４００）　　摘　要：建立同时测定兽用消毒剂枸橼酸苹果酸粉中枸橼酸和苹果酸含量的高效液相色谱方法。采用Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，以乙腈－１０ｍＬ／Ｌ磷酸溶液（２．５∶９７．５，Ｖ／Ｖ）为流动相进行洗脱，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２１０ｎｍ，柱温为３５℃，进样量为２０μＬ。枸橼酸和苹果酸色谱峰分离度良好。枸橼酸和苹果酸分别在１００μｇ／ｍＬ～１　０００μｇ／ｍＬ和５０μｇ／ｍＬ～５００μｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。精密度、稳定性和重现性等考察结果的相对标准偏差（ＲＳＤ）均小于１．０％；而平均回收率均在９８％～１０１％之间，ＲＳＤ均小于０．５％，符合方法学要求。６份供试品中枸橼酸和苹果酸的含量也均符合要求。建立的高效液相色谱法能够同时定量测定枸橼酸和苹果酸的含量，可用于枸橼酸苹果酸粉的质量控制。　　关键词：枸橼酸；苹果酸；速可净；高效液相色谱法；含量测定中图分类号：Ｓ８５９．７９９．１文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１７）０４－００７５－０５　　枸橼酸苹果酸粉是一种新型生态环保的复合有机酸消毒剂，其杀菌作用快速、持久，已经在畜牧业中广泛使用。研究明，枸橼酸苹果酸粉稀释至一定浓度时能够完全杀灭大肠埃希菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌等细菌以及Ｈ５Ｎ１亚型禽流感病毒、口蹄疫病毒等病毒［１－２］。枸橼酸苹果酸粉中的主要有效成分是枸橼酸（ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ，含量约为４０％）和苹果酸（ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ，含量约为１０％），这两种有机酸在水中均能够解离出大量的Ｈ＋渗入细菌细胞内，改变细胞渗透压，使细胞质酸化和蛋白变性，从而杀灭细菌［１］。因此，枸橼酸和苹果酸的含量控制是枸橼酸苹果酸粉质量标准的关键。本文在参考相关文献［３－４］的基础上，建立了可同时测定枸橼酸和苹果酸含量的高效液相色谱法。该方法快速简便，结果准确可靠，可为枸橼酸苹果酸粉的质量标准评价方法提供一定的参考。１　材料与方法１．１　材料１．１．１　仪器设备　Ｗａｔｅｒｓ　ｅ２６９５高效液相色谱系统配置２４８９ＵＶ／Ｖｉｓ检测器，美国Ｗａｔｅｒｓ公司产品；ＣＰＡ２２５Ｄ型电子天平，德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司产品；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超纯水仪，美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司产品；ＳＨＺ－Ｄ（Ⅲ）循环式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司产品；ＫＱ－１００Ｅ型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品。１．１．２　药品和试剂　枸橼酸和苹果酸对照品（批号分别为１１１６７９－２００４０１和１９００１３－２０１００１），中国药品生物制品检定所产品；枸橼酸苹果酸粉（商品名：速可净），北京中农牧公司产品；乙腈（色谱纯），德国Ｍｅｒｃｋ公司产品；磷酸（分析纯），江苏强盛功能化学股份有限公司产品。１．２　方法１．２．１　色谱条件　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；以乙腈－１０ｍＬ／Ｌ磷酸溶液（２．５∶９７．５，Ｖ／Ｖ）为流动相；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２１０ｎｍ；柱温为３５℃；进样量为２０μＬ。以苹果酸和枸橼酸色谱峰计算，理论塔板数不得低于３　０００。１．２．２　对照品母液和供试品溶液的配制　精密称取２５．２０ｍｇ枸橼酸对照品和１２．４９ｍｇ苹果酸对照品，置于２５ｍＬ容量瓶中，加入适量超纯水使枸橼酸和苹果酸溶解后，补加超纯水至刻度，摇匀，制得枸橼酸和苹果酸混合对照品母液。另外，分别精密称取适量枸橼酸和苹果酸对照品，同法操作，分别配制枸橼酸对照品溶液和苹果酸对照品溶液。上述对照品溶液均经０．２２μｍ滤膜滤过，滤液用于液相检测。DOI:10.16437/j.cnki.1007-5038.2017.04.015精密称取０．１ｇ枸橼酸苹果酸粉样品于１００ｍＬ容量瓶中，加入适量超纯水后超声使样品全溶，补加超纯水至刻度，摇匀，制得供试品溶液。供试品溶液经０．２２μｍ滤膜滤过，滤液用于液相检测。１．２．３　专属性试验　分别取空白溶液（水）、枸橼酸对照品溶液、苹果酸对照品溶液、枸橼酸和苹果酸混合对照品溶液以及供试品溶液，按１．２．１项下的色谱条件进样分析，记录色谱图。１．２．４　最低检测限（ＬＯＤ）和定量限（ＬＯＱ）　分别精密移取一定体积的枸橼酸和苹果酸混合对照品溶液于１０ｍＬ的容量瓶中，超纯水定容，进行逐级稀释。稀释液按１．２．１项下的色谱条件进样分析，以信噪比（Ｓ／Ｎ）≥３的检测量为ＬＯＤ，以信噪比（Ｓ／Ｎ）≥１０的检测量为ＬＯＱ。１．２．５　苹果酸和枸橼酸线性关系　分别精密移取一定体积的１．２．２项下的混合对照品母液于１０ｍＬ的容量瓶中，超纯水稀释定容，摇匀，配得一系列质量浓度的混合对照品溶液，按１．２．１项下的色谱条件进样，测定枸橼酸和苹果酸的峰面积。１．２．６　精密度试验　分别精密移取一定体积的１．２．２项下的混合对照品母液，用超纯水稀释至低、中、高３种浓度：枸橼酸的浓度分别为５００、８００、１　０００μｇ／ｍＬ，苹果酸的终浓度分别为２５０、４００、５００μｇ／ｍＬ。３种浓度的混合对照品溶液按１．２．１项下的色谱条件，连续重复进样５针，记录峰面积。１．２．７　稳定性试验　取１．２．６项下的低、中、高３种混合对照品溶液，分别于０、２、４、６、８、１２、１６、１８、２４ｈ按１．２．１项下的色谱条件进样，记录峰面积。１．２．８　回收率和加样回收率试验　按１．２．６项下方法配制低、中、高３种混合对照品溶液，每个浓度平行配制５份，按１．２．１项下的色谱条件进样，记录峰面积，依据标准曲线计算回收率。精密移取５ｍＬ已知浓度的供试品溶液于１０ｍＬ容量瓶中，平行制备５份，分别精密加入１ｍＬ不同浓度的混合对照品母液，超纯水定容，摇匀后，按１．２．１项下的色谱条件进样，记录峰面积，依据标准曲线计算加样回收率。１．２．９　重现性试验　同一批供试品称取５份，按１．２．２项下的供试品溶液的配制方法同法操作，所得样品溶液按１．２．１项下的色谱条件进行进样分析，记录峰面积，依据标准曲线计算枸橼酸和苹果酸的含量。１．２．１０　样品含量测定　平行称取６份供试品，按１．２．２项下的供试品溶液的配制方法同法操作，所得供试品溶液按１．２．１项下的色谱条件进行进样分析，记录峰面积，依据标准曲线计算枸橼酸和苹果酸的含量。２　结果２．１　专属性试验专属性试验结果可见图１～图５。从图中可以看出，空白溶液在该色谱条件下并不会干扰枸橼酸和苹果酸的吸收，而且枸橼酸和苹果酸的出峰时间分别约为３．５４ｍｉｎ和２．７３ｍｉｎ，分离度良好。图１　空白溶液高效液相色谱图Ｆｉｇ．１　ＨＰＬＣ　ｏｆ　ｂｌａｎｋ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ图２　苹果酸对照品溶液高效液相色谱图Ｆｉｇ．２　ＨＰＬＣ　ｏｆ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ６７动物医学进展　２０１７年　第３８卷　第４期（总第２８６期）图３　枸橼酸对照品溶液高效液相色谱图Ｆｉｇ．３　ＨＰＬＣ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ图４　枸橼酸对照品和苹果酸对照品混合溶液高效液相色谱图Ｆｉｇ．４　ＨＰＬＣ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ图５　供试品溶液高效液相色谱图Ｆｉｇ．５　ＨＰＬＣ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ２．２　最低检测限和定量限试验结果表明，枸橼酸的最低检测限（ＬＯＤ）可达０．３μｇ／ｍＬ，定量限（ＬＯＱ）则为０．５μｇ／ｍＬ；而苹果酸的ＬＯＤ可达０．４μｇ／ｍＬ，ＬＯＱ则为０．５μｇ／ｍＬ。２．３　苹果酸和枸橼酸线性考察利用１．２．１项下的高效液相色谱方法测得枸橼酸和苹果酸的峰面积后，分别以质量浓度Ｃ为纵坐标，峰面积Ａ为横坐标，进行线性回归。结果表明，枸橼酸在１００μｇ／ｍＬ～１　０００μｇ／ｍＬ范围内线性关系良好，回归方程为Ｃ＝０．０００　７７Ａ－８．５５２　９（Ｒ２＝０．９９９　８）；苹果酸在５０μｇ／ｍＬ～５００μｇ／ｍＬ范围内线性关系良好，回归方程为Ｃ＝０．００１　０４Ａ－１２．７８８（Ｒ２＝０．９９９　７）。２．４　精密度试验试验结果表明，枸橼酸和苹果酸在低浓度时峰面积ＲＳＤ分别为０．６２％和０．１２％；在中浓度时峰面积ＲＳＤ分别为０．３６％和０．４２％；在高浓度时峰面积ＲＳＤ分别为０．１２％和０．１３％，表明本方法精密度良好。２．５　稳定性试验试验结果表明，枸橼酸和苹果酸在低浓度时峰面积ＲＳＤ分别为０．７６％和０．６４％；在中浓度时峰面积ＲＳＤ分别为０．２４％和０．４３％；在高浓度时峰７７梁劲康等：高效液相色谱法同时测定枸橼酸苹果酸粉消毒剂中枸橼酸和苹果酸的含量面积ＲＳＤ分别为０．２３％和０．４６％，表明枸橼酸和苹果酸在２４ｈ内稳定性良好。２．６　回收率和加样回收率试验试验结果表明，枸橼酸低、中、高３种浓度的回收率分别是１００．４８％±０．１４％、１０１．４６％±０．１４％和１００．２９％±０．３２％，ＲＳＤ分别为０．１１％、０．１１％和０．２６％；苹果酸低、中、高３种浓度的回收率分别是９９．５２％±０．１２％、１００．９４％±０．１９％和９９．５２％±０．１２％，ＲＳＤ分别为０．１０％、０．１５％和０．１０％，均符合方法学要求。加样回收率的试验结果见表１。结果显示，枸橼酸和苹果酸在３种水平浓度下的加样回收率均在９８％～１０１％之间，ＲＳＤ均小于０．５％，说明该方法准确度良好。表１　加样回收率结果Ｔａｂｌｅ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ化合物Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ样品浓度／（μｇ·ｍＬ－１）Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ对照品浓度／（μｇ·ｍＬ－１）Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ平均终浓度／（μｇ·ｍＬ－１）Ａｖｅｒａｇｅ　ｆｉｎａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ加样回收率／％Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅＲＳＤ／％４０１．３　５００　２５１．２　１００．１８±０．２２　０．１７枸橼酸Ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　４０１．３　８００　２８３．４　１００．９５±０．２０　０．１６４０１．３　１０００　２９７．２　９８．８３±０．０９　０．１０１０３．１　２５０　７６．０　９９．３９±０．２９　０．２３苹果酸Ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　１０３．１　４００　９０．１　９８．５０±０．３３　０．２７１０３．１　５００　９９．３　９７．８５±０．１９　０．１５２．７　重现性试验试验结果表明，枸橼酸和苹果酸含量ＲＳＤ分别为０．７７％和０．１４％，均符合方法学要求。２．８　样品含量测定结果枸橼酸苹果酸粉样品的含量测定结果见表２。结果表明，６份样品中枸橼酸和苹果酸的含量均在标示量的９０．０％～１１０．０％范围内，因此，６份样品中枸橼酸和苹果酸的含量均符合要求。表２　速可净样品测定结果Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｓｎｕｃｏｐ　ｓａｍｐｌｅ份次№枸橼酸浓度／（μｇ·ｍＬ－１）Ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ枸橼酸百分比／％Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ枸橼酸标示量百分比／％Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆｌａｂｅｌｅｄ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ苹果酸浓度／（μｇ·ｍＬ－１）Ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ苹果酸百分比／％Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅ苹果酸标示量百分比／％Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆｌａｂｅｌｅｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ１　３９４．２７　３９．１６　９７．９　９２．９６　９．２３　９２．３２　４４３．９４　４３．２２　１０８．１　１０８．８９　１０．６０　１０６．０３　４４３．９８　４３．２２　１０８．１　１０７．８１　１０．５０　１０５．０４　４１４．９０　４０．８９　１０２．２　１０３．８０　１０．２３　１０２．３５　３９４．００　３９．１０　９７．８　９３．９３　９．３３　９３．３６　４１５．４６　４０．９５　１０２．４　１０３．４４　１０．２０　１０２．０３　讨论枸橼酸和苹果酸是消毒剂枸橼酸苹果酸粉（商品名：速可净）中的主要有效成分，也是枸橼酸苹果酸粉质量标准控制的关键。枸橼酸苹果酸粉的原质量标准也是采用高效液相色谱法对枸橼酸和苹果酸的含量进行检测。与本文方法不同，原质量标准中选用了聚苯乙烯二乙烯苯树脂为填充剂的色谱柱。考虑到该色谱柱的成本价格较高以及其使用普遍性，本课题组设想利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱代替聚苯乙烯二乙烯苯树脂为填充剂的色谱柱，是否也能达到理想的分离效果？本研究结果表明，Ｃ１８色谱柱不仅能够有效将枸橼酸和苹果酸分离，也能够使枸橼酸和苹果酸的主峰和其他杂质峰分离。目前，已有文献报道利用梯度淋洗离子色谱法同时测定烟草中的枸橼酸和苹果酸，但该方法需要梯度淋洗的过程，操作步骤相对繁琐［５］。而在利用高效液相色谱法同时检测多种有机酸的文献报道中，也多采用梯度洗脱的方式来将各种有机酸分离开来，但梯度洗脱的过程容易导致基线不稳，可能影８７动物医学进展　２０１７年　第３８卷　第４期（总第２８６期）响色谱峰的峰面积［６］。本文在参考相关文献［３－４］的基础上，建立了可同时测定枸橼酸和苹果酸的含量的等度洗脱的高效液相色谱方法。但是，由于检测波长（λ＝２１０ｎｍ）接近于紫外末端吸收，因此２．２５ｍｉｎ和４．２５ｍｉｎ处出现了两个溶剂峰。为了使枸橼酸和苹果酸的色谱峰能够与溶剂峰充分分离，本文选择了乙腈－１０ｍＬ／Ｌ磷酸溶液（２．５∶９７．５，Ｖ／Ｖ）为流动相。一定比例的乙腈能够降低有机酸色谱峰的拖尾现象，而且也能够有效提高分离效果［７］。由于枸橼酸属于戊三酸，而苹果酸属于丁二酸，枸橼酸与Ｃ１８色谱柱的亲和能力稍优于苹果酸，因此苹果酸更易于被洗脱出来。本文建立的高效液相色谱法能够使枸橼酸和苹果酸充分分离，而且该方法简便有效，线性关系良好、重现性好，精确度和灵敏度高，可作为消毒剂枸橼酸苹果酸粉中枸橼酸和苹果酸的定量分析方法。参考文献：［１］　魏全意，董　强．速可净（ＳＮＵＣＯＰ）与猪场消毒［Ｊ］．养殖与饲料，２００７（１０）：３５－３７．［２］　曾昭智，张锦红．三种消毒剂对屏障环境设施消毒效果观察［Ｊ］．黑龙江畜牧兽医，２０１３（１４）：１０８－１０９．［３］　吕兆林，林　西，邓文红，等．ＨＰＬＣ法测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量［Ｊ］．精细与专用化学品，２０１２，２０（１）：９－１３．［４］　唐慧慧，蔡清宇，毛　翼．ＨＰＬＣ法测定净乌梅及乌梅炭中柠檬酸和苹果酸的含量［Ｊ］．中药材，２００７，３０（１）：５２－５４．［５］　吴玉萍，宋春满，雷丽萍，等．梯度淋洗离子色谱法测定烟草中的苹果酸、柠檬酸和阴离子［Ｊ］．分析试验室，２００６，２５（７）：３１－３４．［６］　张　韵，傅　颖，吴霞红．五味子药材中苹果酸、柠檬酸的测定方法研究［Ｊ］．中成药，２０１２，３４（４）：７６７－７６９．［７］　刘森泉，阮　红，徐玲芬，等．反相高效液相色谱法测定发酵液中β－聚苹果酸含量［Ｊ］．食品与发酵工业，２０１０，３６（６）：１４２－１４５．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｃｉｔｒｉｃ　Ａｃｉｄ　ａｎｄＭａｌｉｃ　Ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｃｉｔｒｉｃ　Ａｃｉｄ　ａｎｄ　Ｍａｌｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｐｏｗｄｅｒ　ｂｙ　ＨＰＬＣＬＩＡＮＧ　Ｊｉｎ－ｋａｎｇ，ＦＡＮＧ　Ｂｉｎｇ－ｈｕ，ＬＩ　Ｎａｉ－ｔｉａｎ，ＷＵ　Ｚｈｉ－ｌｉｎｇ，ＷＵ　Ｇｕａｎｇ－ｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｇｕｉ－ｊｕｎ（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｗｅｎｓｈｉ　Ｄａｈｕａｎｏｎｇ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｙｕｎｆｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，５２７４００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｗｄｅｒ，ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｏｎ　ａｎ　ａｇｉｌｅｎｔ　ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－１０ｍＬ／Ｌ　Ｈ３ＰＯ４ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２．５∶９７．５，Ｖ／Ｖ）．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２１０ｎｍ，ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ　ｗａｓ　２０μＬ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｐｅａｋｓ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ．Ｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｗａｓ　ｏｖｅｒ　０．９９９ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ１００－１　０００μｇ／ｍＬ　ｆｏｒ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　５０－５００μｇ／ｍＬ　ｆｏｒ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｌｉ－ｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　１．０％，ｓｈｏｗｉｎｇ　ａ　ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎｔｈｅ　ｓｐｉｋｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｌｅｖｅｌｓ，ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　９８％－１０１％ａｎｄ　ａｌｌ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　０．５％，ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｙ　ａｃｃｕｒａｔｅ．Ｔｈｉｓ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｗｄｅｒ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ；ｍａｌｉｃ　ａｃｉｄ；Ｓｎｕｃｏｐ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ９７梁劲康等：高效液相色谱法同时测定枸橼酸苹果酸粉消毒剂中枸橼酸和苹果酸的含量