30年来我国猪病发展变化与根治展望-猪传染病诊断技术进展

30年来我国猪病发展变化与根治展望何启盖教授，陈焕春院士华中农业大学动物医学院武汉，430070取得的成绩 感谢几代兽医科学家的努力，提高了我国动物疾病控制水平 疫苗：我国生物制品数量达到200多种，其中某些弱毒疫苗达到了世界先进水平。猪伪狂犬基因缺失疫苗，猪大肠杆菌病的基因工程疫苗已开始推广应用。 一批简便适用的诊断试剂研制成功 促进了养猪业的健康发展主要内容 1、近年来我国猪病发展变化多病原混合感染病原毒力增强疾病种类增加：老病没有消灭，新病增加 2、根治展望消费者因素；养猪企业自身需求；兽医生物制品研发技术的进步；国际交流；法律法规保障一、猪病发展变化1、单纯感染向多病原混合感染发展 细菌之间：波氏杆菌－产毒性巴氏杆菌 病毒之间：猪瘟－伪狂犬病毒混合感染 细菌－病毒：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒+副猪嗜血杆菌/胸膜肺炎放线杆菌/链球菌猪呼吸道综合症(PRDC),猪高热综合症？？？可能存在的原因A.免疫抑制疾病：伪狂犬病/蓝耳病/圆环病毒....破坏淋巴细胞,降低免疫力，使继发感染容易发生B.病原之间相互作用PRRSV+细菌毒素C.使用霉变饲料（2）病原毒力发生变异或增强 圆环病毒:PCV2b的毒力大于PCV2a原因：在PCV2a基因组的1042核甘酸发生胸苷激酶(Thymidine,T)的缺失即为PCV2b。 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒Nsp2基因的部分缺失ORF5基因糖基化位点的增加KegongTian1*，June，200730个氨基酸缺失（3）疾病种类增加 老病得到有效控制猪瘟猪丹毒，黄白痢（大肠杆菌）猪肺疫，仔猪副伤寒伪狂犬病 新病增加传染性胸膜肺炎副猪嗜血杆菌病蓝耳病，圆环病毒…..A.种猪流动频繁B.诊断技术更新水平提高明确疾病的种类二、猪病根治展望(1)公众因素:消费者食品安全的需求对猪病控制提出了更高的;药物残留人兽共患病病原:链球菌2型;乙型脑炎 (2)企业内部因素:经济效益的驱动，使猪病控制成为企业自身的追求；(3)高效疫苗的研发和使用 常规疫苗的改进猪瘟疫苗:细胞疫苗和脾淋苗,提高免疫剂量.口蹄疫双价苗:传染性胃肠炎-流行性腹泻双价苗 多血清型病原所致疾病传染性胸膜肺炎三价疫苗(血清型1,2,7)副猪嗜血杆菌双价疫苗(血清4和5型)猪链球菌灭活疫苗基因(缺失)工程疫苗 伪狂犬病基因缺失疫苗以该疫苗株为活载体构建的多价基因工程疫苗伪狂犬病+乙型脑炎细小病毒口蹄疫(VP1)蓝耳病细菌基因工程疫苗 胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗以此疫苗株为载体的呼吸道疾病多价基因工程疫苗 沙门氏菌为载体的预防腹泻疾病的多价疫苗(4)诊断技术进展 明确所发生的疾病种类：传染性因素：细菌、病毒、支原体、其它微生物；非传染性因素单纯感染/混合感染是否为人兽共患病 利于制定及时合理的控制方案诊断方法包含: 流行病学方法 病理组织观察 血清学检测 病原学检测 分子生物学检测抗体检测方法－血清学凝集性反应沉淀性反应标记抗体技术有补体参与的反应中和反应检测的目的 免疫状况评估：定性或定量测定免疫抗体水平 诊断疾病：区分疫苗免疫动物和自然感染动物；常用的诊断方法 快速诊断：适用于个体诊断平板凝集试验：乳胶凝集试验：免疫胶体金技术 大量样品筛选：酶联免疫吸附试验（ELISA）平板凝集试验 培养的菌体灭活后直接与血清混合，观察是否出现凝集颗粒，判定阴阳性。乳胶颗粒（不同直径大小）www.hull.ac.uk/scg/binks/Desforges%20project.htmwww.microgenics.com/Default.aspx?tabid=65乳胶凝集试验 病毒或蛋白致敏乳胶颗粒，制备成诊断抗原 现场圈舍旁边检测抗体，主要是检测IgM，使用于感染早期诊断伪狂犬病细小病毒乙型脑炎www.rpi.edu/.../COURSES/NANO/renzo/nano2.htmlwww.medicine.uiowa.edu/.../modules.asp?testID=11技术特点 3-5分钟出现结果 实验条件简单，操作容易，样品处理量大。 适合于动物伪狂犬病毒感染的早期检测乳胶凝集的阴性和阳性反应阳性结果阴性结果颗粒聚于液体边缘,透明呈原有的均匀乳状胶体金检测技术酶联免疫吸附试验 将病毒、纯化的蛋白质等抗原包被在酶联板上，通过间接法、竞争法等程序检测抗体。                                                                                  用途 免疫(感染)抗体检测：伪狂犬病抗体检测（gB-ELISA,PrV-ELISA,中和试验,免疫荧光)猪呼吸与繁殖障碍综合症：ELISA和IFA 区分疫苗免疫与自然感染猪伪狂犬病gE-ELISA鉴别诊断盒传染性胸膜肺炎ApxIV-ELISA鉴别诊断口蹄疫3ABC-ELISA鉴别诊断试剂盒鉴别诊断的原理 伪狂犬病：gE基因缺失后，gE抗体不能在gE基因缺失疫苗免疫动物中检测，而野毒感染猪可产生此抗体； 传染性胸膜肺炎毒素IV仅在感染动物体内达，并诱导动物产生抗体，灭活苗不含有毒素IV,所以免疫动物不能产生针对毒素IV的抗体； 口蹄疫:口蹄疫病毒NS1为非结构蛋白，仅在病毒复制时产生；在灭活苗中不存在（或含量低），动物免疫后体内不产生抗NS1抗体，但活病毒感染动物可产生此类抗体。抗原捕获酶联免疫吸附试验－适用于大规模样本病毒抗原的检测www.gbichina.com/companynews.htm 近年来分子生物学与微电子学等多学科交叉融合而成的一项高新技术，用来快速、准确、高通量地检测目的基因;BetsyPierson发展高通量的检测技术基因芯片技术（DNAmicroarrays,DNAchips）杂交(病毒检测)结果HZ-VP1-2A-3DSX-VP1-2A-3DDQ-VP1-2A-3DLI-VP1-2A-3D 在PCR仪中热稳定的DNA聚合酶可使短链的双股靶DNA很快地复制成千上万倍，可以使DNA数量急剧增长而达到检测极限。 理论上，可在2小时内将一个DNA分子扩增到106-109倍，从而大大提高了对其进行研究的速度。聚合酶链反应（PCR）技术：检测猪呼吸道5种病原菌PCR方法 引物设计检测猪呼吸道5种病原菌PCR方法BbMhpAppPmHpsPRRSV-HCV-JEV多重PCR6、7、9号血清样品为PRSSV变异株单一感染；11，12号样品为常规毒株和变异毒株混合感染；1，2，4，5，8，10，13，14，15号样品为PRRSV常规毒株单一感染；3，16号样品为阴性部分ORF-7RT-PCR阳性样品中，变异毒株的检出情况多重PCR用途： 单独感染 多病原混合感染胸膜肺炎－副猪嗜血杆菌－巴氏杆菌－支原体混合感染伪狂犬病－细小病毒－圆环病毒感染猪瘟－蓝耳病－乙型脑炎病毒感染繁殖障碍的多重PCR 对流产死胎进行检测 对公猪精液进行实时监控(5)加强国际交流，结合我国实际情况，消化吸收国际先进经验 制订长期的防疫规划　　对一些危害严重的畜禽传染病制订长期的防疫规划，达到最后消灭的目标。如美国通过制订防疫规划，自1962年至1976年经过14年的努力，终于消灭猪瘟，就是一个成功的经验。我国的猪瘟伪狂犬病根除与净化已经启动（6）.法律法规保障 2007年8月30日第十届全国人民代表大会常务委员会第二十九次会议修订 新的《中华人民共和国动物防疫法》将于2008年1月1号实施，为动物疾病（包含猪病）的预防提供了法律保障全国人大法律委员会副主任委员王以铭作关于《中华人民共和国动物防疫法（修订草案）》审议结果的报告。中新社发廖文静摄修订的《动物防疫法》     第一章　总则     第二章　动物疫病的预防     第三章　动物疫情的报告、通报和公布     第四章　动物疫病的控制和扑灭     第五章　动物和动物产品的检疫     第六章　动物诊疗     第七章　监督管理     第八章　保障措施     第九章　法律责任     第十章　附则猪病类型  一类动物疫病     口蹄疫、猪水泡病、猪瘟、非洲猪瘟 二类动物疫病：猪乙型脑炎、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合症、猪丹毒、猪肺疫、猪链球菌病、猪传染性萎缩性鼻炎、猪支原体肺炎、旋毛虫病、猪囊尾蚴病 二类动物疫病：猪病：猪传染性胃肠炎、猪副伤寒、猪密螺旋体痢疾猪病控制净化的前景 前途是光明，道路是曲折的。 需要全社会的共同努力 感谢对兽医行业的支持鸣谢 国家“十一五”科技支撑计划-疫苗免疫与感染动物以及猪多病原混合感染鉴别诊断试剂盒研制 国家“十一五”科技支撑计划－猪瘟伪狂犬病根除计划集成与示范 教育部-新世纪优秀人才资助计划-副猪嗜血杆菌研究 教育部留学回国人员科研启动基金-胸膜肺炎-支原体双价基因工程疫苗研究 863课题-细菌基因工程疫苗研究（2006－2010） 湖北省十一五攻关-猪传染性胸膜肺炎综合防治 谢谢！