中草药叶上花黄酮提取方法研究（可编辑）

中草药叶上花黄酮提取方法研究（可编辑） 中草药叶上花黄酮提取方法研究 第年卷第 月期 . . . . . : . /. . ?. . . 科学研究中草药叶上花黄酮提取方法研究 杨发忠 ,杨德强 ,杨 斌 ,李向红.西南林业大学理学院,云南昆明 ; .云南师范大学信息学院,云南昆明.西南林业大学云南省森林灾害预警与控制重点实验室,云南昆明 摘 要: 采用定性检测、光谱分析等方法对叶上花总黄酮的种类与提取方法进行了研究。结果 显示叶上花所含黄酮种类较多、含量较高;各因素对总黄酮提取率影响程度大小顺序为温度 乙醇体 积分数 固液比 时间。最佳提取条件为温度 ?、乙醇体积分数 %、固液比 : /、提 取时问 ,在此提取条件下,总黄酮含量为 . %。 关键词: 叶上花;总黄酮;提取方法 中图分类号:文献标识码: 文章编号:? 叶上花 ..实验部分 . . 也称喜马拉雅青荚叶,山茱萸科 . 中药材 青荚叶属 植物 ,灌木或 叶上花干燥全草于 年 月采自云南省 小乔木。是《新华本草纲目》收录的天然药用植 楚雄市树苴镇,洗净、风干、粉碎、过 . 粒 物?,在云南中草药 、丽江中草药 、中药大辞 径 目 筛后备用。 典 、全国中草药汇编 等文献中均有收录。全 . 仪器与试剂 株人药,能驱风除湿、活血化瘀 ?’ ,用于治疗跌打 型分光光度计 尤尼柯 上海仪器 损伤、风湿性关节炎等。作为骨科良药,资源丰 有限公司 ; 电子天平 北京赛多利斯天平 富、民间用药历史悠久。但尽管如此,对叶上花的 有限公司 ; 一型旋转蒸发仪 上海亚荣生 研究却仍然十分缺乏,仅限于资源分布、生药鉴定 化仪器厂 。 等,国内外对其实生苗训化、质量控制、药理活性、 芦丁标准品:成都欧康植化科技有限 化学成分等多方面的研究尚属空白包括对同属 公司。三氯化铁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、镁 其它植物的化学成分研究也十分缺乏 ,极大限 粉、盐酸、无水乙醇等均为分析纯。 制了叶上花中药材的推广使用。另据文献报道, 高等植物中黄酮类化合物有多种药理作用,是一 . 试验方法 类十分重要的天然有机化合物,其中很多接骨效 . . 总黄酮定性检测果很好的药用植物,其活性成分就是黄酮类化合 ?与碱反应试验:取叶上花总黄酮提取液 物 。本文对叶上花总黄酮提取方法进行研,加入% 滴;?盐酸一镁粉反 究,以期为叶上花黄酮药理活性、化学成分的研究 应:在提取液中加入少许镁粉,振摇后加浓 奠定基础、为叶上花中药现代化的研究打下基础。 盐酸 ~ 滴,加热;?三氯化铁试验:取提 收稿: 接受: 基金项目:云南省科技项;云南省教育厅基金 ;西南林业大学大学生科技创新项目 。 作者简介:杨发忠 一 ,男,云南楚雄人,讲师,硕士,主要从事化学生态学和天然产物化学方面的研究。 通讯联系人:杨斌 一 ,男,教授,博士,主要从事森林保护和化学生态学方面的研究。? 云南化工 年第 期%、 %、 %、 %、 %、 %的乙醇一水溶液, 取液,滴加%的三氯化铁溶液;?三氯化铝 在 %条件下提取,其他条件与测试温度的条件一 试验:取提取液滴于滤纸上,喷% ,乙醇 致,计算不同乙醇体积分数时叶上花总黄酮百分含 溶液;? 反应:取提取液加入 一萘酚乙醇溶 液,缓慢加入硫酸;? 铅盐沉淀试验:取提取液 量,用于考查对得率的影响。,滴加乙酸铅试剂。 ?最佳提取时间考查 按乙醇体积分数为 %、固液比为 : 、提取 . . 检测波长选择 温度为 ?的条件进行提取,但提取时间分别为 参考曾里等? 所用的、、 、、 ,测定不同时 法测定总黄酮含量,稍作改动。 间下的总黄酮得率,以考查提取时间的影响。 精密称取芦丁标准品 ,加‘ %乙醇 溶解,定容至 ,摇匀,得 / 芦丁标 . . 正交实验优化提取条件 准溶液。 在单因素实验基础上,按照正交 进 一 并用‘%的乙醇水对叶上花干燥粉末进行 步对各因素之间的交互关系进行正交实验研 提取,石油醚多次萃取至石油醚层无色,收集下层叶 究。结果如表 所示。 上花总黄酮的乙醇.水提取物,定容至合适的体积。 表 实验因素水平表 将芦丁标准溶液和叶上花总黄酮提取液各取 .,各加% 溶液 ,摇匀,放置后, 各加%溶液 ,摇匀,放置后,再分别加入%溶液,用 去离子水定容至 .,摇匀,放置 ~后, 采用试剂参比,使用 型分光光度计在 ~ 范围内全程扫描,以获得二者的扫 描图 结果与讨论 谱和最大吸收波长。 . 黄酮类化合物定性检测结果 . . 标准工作曲线绘制 利用黄酮类化合物在不同试验中产生的特殊 分别准确吸取芦丁标准溶液 . 、 . 、 颜色反应,可以对黄酮类化合物进行定性分析。 . 、 . 、 . 、 . ,同法显色,在最大吸收 如表 所示,叶上花植物中黄酮种类丰富,含有黄 波长处绘制芦丁标准工作曲线。数据处理使用 酮、黄酮醇、黄酮苷、 , .二羟基黄酮醇、二氢黄 . 下同 。 酮、二氢黄酮醇等多种类型的黄酮或类黄酮化合 . . 单因素实验考查 物。已有资料表明 ,黄酮类化合物的种类不同、 ?温度对叶上花总黄酮得率的影响 结构不同,其药理活性、抗氧化活性等多种生物活 准确称取 . 叶上花干燥粉末,按固液 性也将会明显不同,叶上花黄酮可能同时具有接 比 :/加入‘ %的乙醇一水溶剂,在 骨、抗炎多方面的药理活性,与临床应用研究结论 温度分别为 、 、 、 、 ?条件下回流提取 一 致 ’ ,具有明显的研究价值。 . ,过滤后定容至 .,取按本实验 表 黄酮类化合物的定性检测 . . 进行测定,计算不同温度下叶上花总黄酮在 原干燥粉末中的质量分数,用于考查温度对得率 检测项目 检测结果 结论 的影响。 与碱反应 溶液变黄 可能含有二氢黄酮等 ?最佳固液比的选择 可能存在黄酮、黄酮醇、二氢黄 盐酸一镁粉反应 溶液出现浅红色 按固液比分别为 : 、 : 、 : 、 : 、 酮、二氢黄酮醇等黄酮类化合物 : 、 : 加入‘%的乙醇溶液,在 ? 三氯化铁试验 溶液出现蓝绿色 可能含有酚羟基类物质 可能存在 , 一二羟基黄酮醇类 条件下提取,其他条件与测试温度的条件一致,测 三氯化铝试验 出现黄色 化合物 定不同固液比时的黄酮含量,以确定最佳固液比。 反应 溶液出现紫红色 可 能存在黄酮苷类化合物 ?乙醇体积分数的影响 可能含有黄酮醇等黄酮类化合物 铅盐沉淀试验 溶液出现红色 按固液比 : /加入‘ %、 %、年第 期 杨发忠等:中草药叶上花黄酮提取方法研究 . 吸收光谱和标准工作曲线绘制 但温度过高含量反而有所下降,可能是高温 \籁求栅 匿善《【 芦丁和叶上花总黄酮的吸收光谱见图 。 下部分黄酮分解所致。故最佳提取温度为 ?。 . . 固液比对总黄酮得率的影响 当固液比为 :/时,总黄酮得率最 高,此时已将大多数黄酮提取出来。考虑成本等 因素,最佳固液比为 : / 图 。 波长/图 芦丁和叶上花总黄酮的吸收光谱 .二者的吸收光谱均在 处有最大吸收。此 最大吸收峰是由黄酮化合物中 环桂皮酰基? \糕 删蟮隘般蹈 系统引起的 带 吸收 。叶上花总黄酮在固液比/ / 以下有强吸收 带 吸收 ,带 吸收较弱,带 吸收较强,可知主要含有黄酮和黄酮醇类。从波谱 图 固液比对提取量的影响扫描图谱中可以确认叶上花提取物中含有黄酮类化 合物,且种类与 . 中预实验结果相似。据图 选定 叶上花黄酮的测定波长为 ,获得标准曲线回 . . 乙醇体积分数对总黄酮得率的影响 归方程为 . . ,其中 为吸光 随乙醇体积分数增加,叶上花总黄酮得率逐 度, 为叶上花总黄酮质量浓度 /,线性相关 渐增加 图 ,当乙醇体积分数增加至 %时,得 系数.,在 . ~ . / 之间线性 率达最高。但在 %左右还有一个较低的峰,这 关系良好,方法稳定可靠,可作为叶上花总黄酮得率 可能是不同极性的溶剂所能提取的黄酮种类有所 的测定方法。 不同所致。 . 单因素测定结果 . . 温度对叶上花总黄酮得率的影响 随温度上升,总黄酮得率提高,在左右达 赢 到最大,如图 所示。 鑫. 鉴 韫 乙醇体积分数/% 图 乙醇体积分数对提取量的影响 温度/?. . 时间对总黄酮得率的影响 图 温度对提取量的影响 从图 看出, 后得率变化缓慢。云南化工 年第 期时达最大,最佳提取时间为 。 结论 叶上花黄酮最佳提取条件为温度、乙醇 体积分数 %、固液比 : 、提取时间 , 芝在此提取条件下,提取量高达 .%。叶上花中 黄酮种类较多、含量丰富,是一种值得进一步深入 嘲 研究的民间药物。研究结果也为青荚叶属植物化 学成分的研究提供理论依据。 篓 参考文献:吴征镒,周太炎,肖培根.新华本草纲要:第三册 .上海:科学技术出版社, , ? . 时间/ 云南省卫生局革命委员会.云南中草药.昆 明:云南人民出版社, : . 图 时间对提取量的影响云南省丽江地区革命委员会生产指挥组卫生组.丽江中草药.出版地不祥, , ? . . 正交试验结果江苏新医学院.中药大辞典:上册.上海:上海 从表 中 、 、 、 分析得到,温度、固液 人民出版社, ,.《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编. 比、乙醇体积分数、提取时间 因素对黄酮提取量 北京:人民卫生出版社, , . 影响的主次顺序及最佳提取条件为: , ,即董发明.七叶红花药酒治疗 例骨折的临床分析 温度 ,乙醇体积分数 %,固液比 : ,提.中国民族民间医药杂志, ,, ? . 取时间 。罗珊珊,狄群英.骨风宁胶囊治疗类风湿性关节炎 . 正交实验结果验证 例 .中国民族民间医药杂志, ,:. . 正交实验中优选出的最佳提取条件未包括在 , , , ,.? 正交设计表的 次实验中,故进行验证。结果表 明叶上花总黄酮得率平均为 .% : ,. ,, : ? 为 . % ,在本实验中最大,且说明此法具有良 . 好的稳定性。,,,. . 表 正交试验结果 . , , :. 陈厚琴,李东海,代红娟,等.叶下花研究进展 . 云南化工,, : . 李勇,季晖,李萍,等.淫羊霍总黄酮对体外培养成 骨细胞的影响 .中国药科大学学报, , : ,.胡忠,吴奕瑞,黎宝荣,等.老鼠筋类黄酮的提取及 生理活性研究.汕头大学学报:自然科学版, , : . 曾里,夏之宁.超声波和微波对中药提取的促进 和影响 .化学研究与应用, ,: . 海力茜 ?陶尔大洪,巴吐尔 ?买买提明,帕丽达, 等.维药鹰嘴豆中总黄酮的超声提取工艺研究.时珍国医国药, ,: ? . 邓 斌,蒋刚彪,黄红英,等.分光光度法测定夏枯 草中总黄酮的含量.时珍国医国药,, : . 下转第 页