天麻素速溶片的溶出度测定

天麻素速溶片的溶出度测定 沈映冰1，陈 杰2，朱彩燕1，曾令杰3 (1. 中山大学附属第六医院，广东 广州 510655;2. 中山大学附属第一医院，广东 广州 510080;3. 广东药 学院中药学院，广东 广州 510006) 摘 要 目的:建立天麻素速溶片溶出度的测定。方法:采用浆法，转速为 50 r /min，介质体积是 900 mL测 定溶出曲线，以 C18为色谱柱，流动相为乙腈-0. 05 %磷酸水溶液(20∶ 80) ，检测波长为 220 nm，流速为 1. 0 mL /min， 柱温为 25 ℃，进样量是 100 μL。结果:天麻素在 11 ～ 132 μg /mL(r = 0. 9997)浓度范围内与峰面积有良好的线性 关系，采用 pH 6. 8 磷酸盐溶液为天麻素速溶片溶出度测定介质。结论:该方法简便、准确、专属性强，可用于该制 剂的质量控制。 关键词 天麻素速溶片;高效液相色谱法;溶出度测定 中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0654-02 收稿日期:2011-12-19 天麻素是兰科多年生寄生植物天麻 Gastrodia e- late Blume中的主要有效成分，天麻素具有多方面的 药理作用，可恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平 衡失调，具有镇痛、安眠、抗癫痫等中枢抑制作用，能 增加脑血流量，改善椎基底动脉、小脑前下动脉、小 脑后下动脉、迷路神经动脉及内耳供血不足，保护神 经细胞，促进心肌细胞能量代谢〔1〕。临床上广泛用 于眩晕(美尼尔氏病、药性眩晕、外伤性眩晕、突发 性耳聋、前庭神经元炎、椎基底动脉供血不足等)、 头痛(血管性头痛、偏头痛等)、神衰、神衰综合征及 脑外伤性综合征等，效果良好;神经痛如三叉神经 痛、坐骨神经痛等均是难治疾病，天麻素对其也有较 好的疗效〔2〕。天麻素使用安全，不良反应低，在体 内不易蓄积，服用后不会影响第二天的工作及生活， 为一种治疗失眠、头疼等疾病的有效药物。本研究 将天麻素研制成速溶片，加快其溶出度，以期提高其 生物利用度与临床效果。 1 仪器与试药 Waters 型高效液相色谱仪(美国 waters 公司) ; ZRS-8 型智能溶出测定仪(天津大学无线电厂)。 天麻素对照品(中国药品生物制品检定所，含 量测定用，批号:110807-200205) ;天麻素片(规格: 100 mg /片，广东药学院提供，批号:20110304)。 2 方法与结果 2. 1 色谱条件及系统适应性试验〔2〕 色谱柱: Waters C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈- 0. 05% 磷酸水溶液 = 20∶ 80;流速:1. 0 mL /min;检 测波长:220 nm;柱温:25 ℃;进样量:100 μL。在此 条件下，供试品中天麻素峰能达到基线分离，理论板 数按天麻素峰计应不低于 2 000。 2. 2 线性关系考察 精密称取天麻素对照品 11. 11 mg置 10 mL 量瓶中，加入 pH 6. 8 磷酸盐溶 液稀释并定容至刻度，得浓度为 0. 1111 mg /mL 的 对照品贮备液。精密移取 0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1. 0、 1. 2 mL对照品贮备液置 10 mL量瓶中，加入 pH 6. 8 磷酸盐溶液稀释并定容至刻度，精密移取 100 μL注 入液相色谱仪，测定天麻素的峰面积，以峰面积为横 坐标，浓度为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y =0. 034x + 1. 01 (r = 0. 9997)。表明天麻素在 11 ～ 132 μg /mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2. 3 供试品溶液的制备 采用中国药典 2010 年 版二部附录溶出度测定法第一法即浆法，设转速为 50 r /min，溶出介质分别为水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH 4. 0 醋酸盐溶液、pH 6. 8 磷酸盐溶液，在 5、10、15、 20、30、45、60 min 分别取样 10 mL 并同时补充等量 介质，采用 0. 45 μm 滤膜滤过，作为供试品溶液;精 密移取 0. 8 mL天麻素对照品贮备液置 10 mL 量瓶 中，加入溶出介质稀释并定容至刻度，作为对照品溶 液。精密移取供试品溶液、对照品溶液各 100 μL注 入液相色谱仪，测定天麻素的峰面积，以外标法计算 每个时间点天麻素的溶出量。 2. 4 专属性试验 称取处方中除主药外的辅料， 分别加入溶出介质水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH 4. 0 醋 酸盐溶液、pH 6. 8 磷酸盐溶液溶解稀释成一定浓 度，滤过，取续滤液，精密移取续滤液 100 μL注入液 相色谱仪，结果显示，辅料在天麻素保留时间处并未 出峰，表明辅料、空白溶剂均对天麻素溶出度测定无 干扰，此法专属性强。 2. 5 滤膜吸附试验 分别取天麻素在水、pH1. 2 盐酸溶液、pH4. 0 醋酸盐溶液、pH6. 8 磷酸盐溶液溶 ·456· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月 解的对照品溶液，天麻素速溶片在水、pH1. 2 盐酸溶 液、pH4. 0 醋酸盐溶液、pH6. 8 磷酸盐溶液的溶出 液，取尼龙 6(孔径 0. 45 μm)作为过滤头，分别对天 麻素对照品溶液、天麻素速溶片溶出液作高速离心 (4 000 r /min，10 min) ，过滤弃去 2、4 mL 后取滤出 液，精密移取 100 μL 注入液相色谱仪，测定天麻素 的峰面积，观察同一浓度值峰面积的变化情况。 结果显示，在 4 个介质中天麻素的溶出液、对 照液，当过滤弃去 2 mL 时，峰面积与高速离心相比 偏差均小于 2%。表明与高速离心相比，此过滤头 对天麻素对照品溶液、天麻素速溶片溶出液过滤弃 去 2 mL后，没形成对主药的吸附影响。 2. 6 稳定性试验 分别取天麻素对照品溶液、天 麻素速溶片在各个介质中相当于完全溶出时 50%、 100%溶出量的溶出液，分别在 0、1、2、4、8、12、24 h 测定天麻素的峰面积，观察峰面积的变化情况。结 果显示，在 24 h内天麻素的峰面积与 0 h比较，其变 化均小于 2%，表明样品溶液在 24 h内为稳定。 2. 7 重复性试验 分别配制天麻素速溶片各个介 质中相当于累计溶出 50%、100%的溶出液，每个浓 度配制 6 份，测定其天麻素的溶出量。结果显示，2 个浓度中天麻素的溶出量相对标准偏差均小于 2%，表明此法测定天麻素溶出度重复性高。 2. 8 中间精密度试验 与重复性试验的仪器、时 间、操作人员不同，分别配制天麻素速溶片各个介质 中相当于累计溶出 50%、100%的溶出液，每个浓度 配制 6 份，测定天麻素的溶出量。结果显示，2 个浓 度中天麻素的溶出量相对标准偏差均小于 2%，每个 浓度与重复性比较，12个结果的相对标准偏差均小于 2%，表明此法测定天麻素溶出度的中间精密度良好。 2. 9 加样回收率试验 分别配制天麻素口腔崩解 片各个介质中相当于累计溶出 40%、80%、120% 的 溶出液，每个浓度配制 3 份，测定天麻素的溶出量， 计算其回收率，结果显示，天麻素在 4 个介质中 3 个浓度的回收率均在 95% ～ 105% 间，相对标准偏 差均小于 2 . 5%。 2. 10 耐用性测定 取天麻素溶出液，分别在改变 柱温、流速、流动相组成以及 pH 条件下，精密移取 100 μL注入液相色谱仪，测定各主峰面积，考察主 峰间的分离情况与拖尾因子。结果显示，在上述各 条件下，天麻素与相邻色谱峰均能达到良好的分离， 分离度均大于 2，拖尾因子均小于 2，符合测定的要 求，表明此法耐用性好。 2. 11 溶出曲线测定 分别取天麻素速溶片 6 片 (批号 20110304) ，按“2. 3”项下溶出条件，测定其 溶出曲线，结果显示，天麻素速溶片在 4 个介质中 5 min即达溶出平台。考虑到天麻素主要在小肠吸收， 为模拟其在体内的吸收情况，暂定天麻素速溶片的溶 出度测定可采用 pH 6. 8 磷酸盐溶液为溶出介质。 2. 12 溶出均一性试验 分别取天麻素速溶片 3 批，每批 6 片(批号 20110301、20110302、20110303) ， 按“2. 1”项下色谱条件，测定 pH6. 8 磷酸盐溶液中溶 出曲线，结果显示，天麻素速溶片在 pH6. 8 磷酸盐溶 液中溶出行为相似。 2. 13 溶出度指标制定 由“2. 11”项的试验结果 可知，天麻素速溶片在 pH6. 8 磷酸盐溶液中溶出 5 min 已达溶出平台，基本已全部溶出。为控制本品 质量，适当延迟溶出度取样时间及限度，初步确定为 15 min时溶出不低于 75%。 3 讨论 溶出度试验是为了模拟制剂口服后在体内的释 放情况。溶出试验应该尽量在生理条件下进行，以 用于解释制剂在体内的行为。 溶出度试验不仅具有为建立体内相关性而设立 的理念，且还已成为证明药物在体内释放的一种简 单、廉价而不失严谨的实验室检测方法。所以，测定 药物在多 pH 介质中溶出曲线，可指示出来源不同 的同一制剂的品质差异，从而为临床上疗效的差异 提供佐证。 紫外扫描图谱显示，天麻素在 220 nm 波长处 有最大紫外吸收，在该波长下处方量的空白辅料不 干扰测定，故采用分光光度法在 220 nm 作为天麻 素的溶出量测定波长，方法学考察符合要求。天麻 素在水、胃液、肠液中溶解度都很大，均符合漏槽条 件。且稳定性实验表明天麻素水溶液的稳定性可以 满足操作时间的要求。在方法学考察的基础上，确 定了天麻素制剂的释放度测定方法，为今后的处方 筛选和制剂评价奠定了基础。 本文采用水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH 4. 0 醋酸盐溶 液、pH 6. 8 磷酸盐溶液为溶出介质，在 5、10、15、20、 30、45、60 min 测定其累计溶出率，得出天麻素速溶片 的溶出曲线。结果显示，天麻素速溶片在 4 个介质中 的溶出率在 5 min 时已达溶出平衡，为控制本品质量 以及考虑到工业生产的偏差，适当延迟溶出度取样时 间及限度，初步确定为 15 min 时溶出不低于 75%。 参 考 文 献 ［1］岑信钊 . 天麻的化学成分与药理作用研究进展［J］. 中 药材，2005，28(10) :958-962. ［2］程刚，郝秀华，刘国良，等 . 天麻素在大鼠体内的药动学 研究［J］. 中国药学杂志，2003，38(2) :127-129. ·556·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月