紫外可见分光光度法测定维生素B2 - 副本实 验 名 称:紫外可见分光光度法测定维生素B2
实 验 目 的:1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘
2、根据E1%1CM444nm文献值323求取样品中VB2的含量(不需要同学们做)
3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量
4、比较两种方法的误差来源
实 验 原 理:维生素B2,通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一 般取444nm的波峰为定量吸收峰,除了用一般的工作曲线法外,还可按C17H20N4O6 的吸收系数(E1%1...
实 验 名 称:紫外可见分光光度法测定维生素B2
实 验 目 的:1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘
2、根据E1%1CM444nm文献值323求取样品中VB2的含量(不需要同学们做)
3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量
4、比较两种方法的误差来源
实 验 原 理:维生素B2,通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一 般取444nm的波峰为定量吸收峰,除了用一般的工作曲线法外,还可按C17H20N4O6 的吸收系数(E1%1CM444nm)为323计算,求取样品中维生素B2的含量。
实 验 器 材:Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸(AR)、氢氧化钠1mol/L(AR)、维生素B2标 准试剂(0.075mg/ml)、药片(含维生素B2片)。
实 验 步 骤:
1、 待测液的配置:取待测片剂2片,精密称定、研细,精密称取适量(约相当于维生素B210 mg),置于1000 mL容量瓶中,加冰醋酸5mL与水100mL,置水浴(100 ℃)加热1小时,时时摇振,使维生素B2溶解,加水稀释,冷却后加氢氧化钠液(1 mol/L)30 mL。用水稀释至刻度,摇匀,过滤;弃去初滤液,取续滤液作为待测液。
2、 标准溶液的配置:准确称取75mg核黄素(维生素B2),置于1000 mL容量瓶中,加少量水使维生素B2溶解,最后加水定容至刻度得到维生素B2标准试剂(0.075 mg/mL)。
3、 用移液管分别吸取2mL、4mL、5mL、6mL、8mL维生素B2标准试剂(0.075 mg/mL) 于5个25 mL容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。用紫外分光光度计分别测量5个容量瓶中的VB2稀释液,得到5个吸收度数值A444nm。
4、以VB2稀释液浓度为横坐标,A444nm数值为纵坐标,建立VB2浓度与吸收度的标准曲线,然后在444nm波长处测出待测液的吸收度数值,在标准曲线上找到相应的浓度数值即可。
实 验 结 果:1、维生素B2的紫外可见光谱扫描图
2、维生素B2标准工作曲线图
标准液体积(ml)
0
2
4
5
6
8
待测液
标准液浓度(μg/ml)
0
6
12
15
18
24
A444nm
0
0.189
0.373
0.487
0.561
0.755
0.322
根据工作曲线,计算得:待测液浓度为10.222μg/ml
思考题:1、本方法要求在避光下进行,试述理由。
答:本方法测定的是物质在特定波长下光的吸收,避免VB2遇光分解干扰数据测定。
2、当吸收值为何值时,浓度测量的相对误差最小。
答:当吸光值为0.2——0.8之间,相对误差最小。
3、如何选择参比溶液?基本原则是什么?
答:当试剂与显色液为无色,选择水,当试剂有色,显色液无色,选择不如显色液的被测液,当显色剂有色时,可选择不加试样溶液的试剂。原则是消除本身物质以外的影响因素。
4、比较两种定量方法,探求误差原因。
答:标准曲线:每次的色谱条件难以完全相同,有误差。
文献曲线:因操作、环境、仪器、人员与文献值不同,引起误差。
5、本实验中一般选取445nm左右的波峰为维生素B2的定量吸收峰,为什么?
答:可减少其他物质的干扰,且波峰较宽有利于检测。
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