病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响
杨龙圣1 薛家宾2 王芳2 徐为中2 胡元亮1
(1 南京农业大学动物医学院,江苏 南京 210095;2 江苏省农科院兽医研究所,江苏 南京 210014)
摘要:选择35、40、45三种日龄新西兰家兔各30只,每个日龄兔随机均分为5组,对照组注射生理盐水,4个试验组分别注射4种剂量(1ml、2ml、3ml、4ml)的兔病毒性出血症疫苗,分别于免疫前及免疫后1~7周内采血测定血清抗体效价的动态变化。结果
明,各日龄兔的2ml、3 ml、4 ml剂量组的抗体上升速度和有效抗体维持时间均显著大于同日龄的1 ml剂量组;35日龄兔的2 ml、3 ml、4 ml剂量组的抗体峰值显著高于1 ml剂量组。提示35日龄兔注射剂量2 ml为最佳免疫程序。
关键词:兔病毒性出血症(RHD);免疫剂量;抗体效价
兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)又称兔瘟,是由兔出血症病毒(RHD virus,RHDV)引起的一种急性和高度接触性家兔传染病,常出现爆发性流行,发病率和死亡率极高,给养兔业造成极大的经济损失[1~3]。早期观察发现,青年、成年兔对RHD易感,2月龄以下幼兔一般不感染[1,4,5]。但是,近年来幼兔感染RHD逐渐增多[6,7]。RHD目前尚无有效的治疗药物,主要通过疫苗免疫进行防制。现行规程规定的常规免疫剂量为1ml,然而由于幼兔免疫系统发育不成熟和母源抗体的影响,仅按常规免疫程序免疫难以取得理想的效果[8]。因此,探索合理的免疫程序具有重要的临床意义。我们已经测定了RHDV抗体效价与保护率之间的关系,证明半数保护效价为2 log 2,有效保护效价为3 log 2,同时观察了免疫日龄对抗体效价的影响。本试验拟进一步观察免疫剂量对抗体效价的影响,以期为制定合理的免疫程序提供理论依据。
1
与
1.1 材料
新西兰兔、兔病毒性出血症组织灭活疫苗(批号20041201)、兔出血症病毒(RHDV,皖阜株)、RHDV阳性血清和RHDV阴性血清,均由江苏省农业科学院兽医研究所提供;人“O”型红细胞,由南京军区总医院提供。
TGL-16G台式高速离心机,由上海医用分析仪器厂生产;WMK-2型37℃恒温箱为南京试验仪器厂产品;100μl移液枪为eppendorf公司产品;50孔U型血凝板为北京市斯科易得试验器材有限公司产品。
1.2 动物分组与处理
分别取35、40、45日龄幼兔各30只,每个日龄兔随机均分为5组,对照组(0ml)和4个剂量(1ml、2ml、3ml、4ml)组。0ml组不免疫,注射生理盐水1ml/只;1ml、2ml、3ml、4ml组分别颈部皮下注射4种剂量的兔瘟疫苗,分别于免疫前和免疫后7周内每周耳静脉或心脏采血,分离上清,56℃水浴灭活30min,测定抗体效价。
1.3 抗体效价的测定
用微量血凝抑制试验(HI)方法 [9]。取50 μl待检血清用等量生理盐水进行倍比稀释6个梯度,分别在每孔加入等量的4单位血凝病毒,37℃感作30min,加入等量的1%人O型红细胞,4℃感作30min,观察结果。同时设阳性血清和阴性血清作为对照。结果以平均数±
差表示,用SPSS软件进行统计分析。
2 结果
2.1 35日龄兔不同剂量组抗体效价的变化
表1显示,免疫前各剂量组抗体效价无显著差异,处于半数保护效价2 log2。免疫后各剂量组的抗体效价,1ml组第1周上升至峰值3.25,有效保护效价(3 log2)维持2周;剂量2ml、3ml、4ml组一直高于剂量1ml组,免疫后2周开始与1ml组差异均达到显著水平(P<0.05),免疫后4周达到峰值,分别为5.67、5.50、5.83 log2,免疫后7周时仍高于有效保护效价。对照组抗体效价在免疫后七周内一直低于有效保护抗体效价,且持续下降,免疫后6周下降到0(表1)。
表1 35日龄兔不同剂量组的抗体效价 (log2)
Table 1 The antibody titer of every dose group in 35 day-old rabbits
剂量Dose(ml)
免疫前
Before injection
免疫后After injection(周weeks)
1
2
3
4
5
6
7
1
2.50±0.41a
3.25±0.50a
3.00±0.82b
2.38±0.48b
2.00±0.00c
1.00±0.00c
0.75±0.50c
0.00±0.00c
2
2.00±1.00 a
4.00±0.00a
4.66±0.58a
5.50±0.71a
5.67±0.58a
5.00±0.71b
4.50±0.73ab
4.50±0.53a
3
2.00±1.00 a
4.00±1.00a
4.33±0.58a
5.33±0.58a
5.50±0.00b
5.25±0.35ab
4.25±0.23b
4.00±0.34b
4
2.33±0.58 a
4.00±1.00a
4.33±0.58a
5.33±0.58a
5.83±0.29a
5.50±0.00a
4.75±0.56a
4.33±0.26ab
0(CK)
2.50±0.41 a
1.25±0.95b
1.00±0.82c
0.75±0.96c
0.25±0.50d
0.25±0.50d
0.00±0.00d
0.00±0.00c
同列数据标有不同字母者差异显著(P<0.05)。
Data within a column with different superscripts differentiated significantly (P<0.05).
2.2 40日龄兔不同剂量组抗体效价的变化
免疫前各剂量组抗体效价无显著差异,均低于半数保护效价。免疫后,4个剂量组的抗体效价均在第1周时达到或高于有效保护效价,第2周达到峰值,尔后开始下降;剂量1ml组有效保护效价维持至免疫后5周,免疫后4周后显著低于其余3个剂量组(P<0.05);免疫后7周时剂量2ml、3ml、4ml组的抗体效价仍高于有效保护效价。对照组的抗体效价在免疫后的7周内一直低于半数保护抗体效价,免疫后5周开始下降到0(表2)。
表2 40日龄兔不同剂量组的抗体效价 (log2)
Table 2 The antibody titer of every dose group in 40 day-old rabbits
剂量Dose(ml)
免疫前
Before injection
免疫后After injection(周weeks)
1
2
3
4
5
6
7
1
1.25±0.96a
3.00±0.82a
5.75±1.71a
5.00±1.83a
3.75±0.96b
3.00±0.82b
2.13±0.50b
1.83±0.58b
2
1.33±0.58a
4.33±1.15a
5.83±0.29a
5.17±0.29a
5.33±0.58a
5.33±0.58a
5.00±0.00a
4.50±0.00a
3
1.27±0.58a
4.00±1.00a
5.50±0.50a
5.17±0.29a
5.00±1.00a
5.00±0.58a
5.00±0.29a
4.50±0.00a
4
1.33±0.58a
4.33±0.58a
5.83±0.29a
5.17±0.35a
5.33±0.58a
5.00±0.00a
5.00±0.35a
4.50±0.29a
0(CK)
1.25±0.58a
1.00±0.82b
0.75±0.96b
0.25±0.50b
0.20±0.50c
0.00±0.00c
0.00±0.00c
0.00±0.00c
同列数据标有不同字母者差异显著(P<0.05)。
Data within a column with different superscripts differentiated significantly (P<0.05).
2.3 45日龄兔不同剂量组抗体效价的变化
表3显示,免疫前各剂量组的抗体效价无显著差异,均低于半数保护效价。免疫后各组的抗体效价,4个剂量组抗体效价均在第1周时达到或高于有效保护效价,第2~4周达到峰值,尔后开始下降;剂量1ml组有效保护效价维持至免疫后5周,免疫后5周开始显著低于其余3个剂量组(P<0.05);剂量2ml、3ml、4ml组免疫后7周的抗体效价仍高于有效保护效价。对照组的抗体效价在免疫后7周内一直低于半数保护抗体效价,免疫后4周开始下降到0(表3)。
表3 45日龄兔不同剂量组的抗体效价 (log2)
Table 3 The antibody titer of every dose group in 45 day-old rabbits
剂量Dose(ml)
免疫前
Before injection
免疫后After injection(周weeks)
1
2
3
4
5
6
7
1
2.00±0.82a
3.25±1.26a
5.25±0.96a
5.50±1.29a
3.75±0.96b
3.25±1.26b
2.38±1.79b
2.00±1.41b
2
1.00±0.00ab
4.00±1.00a
5.17±0.58a
5.13±0.29b
5.50±0.76ab
5.10±0.45a
5.10±0.00a
4.75±0.59a
3
1.00±1.00ab
4.47±0.50a
5.25±1.06a
5.50±0.00a
5.75±0.35a
5.25±1.06a
5.00±0.50a
4.50±0.56a
4
0.85±0.58b
4.33±0.58a
5.50±0.00a
5.50±0.00a
5.25±0.35ab
5.25±0.35a
5.00±0.50a
4.50±0.36a
0(CK)
1.00±0.57ab
0.80±0.96b
0.35±0.50b
0.25±0.50c
0.00±0.00c
0.00±0.00c
0.00±0.00c
0.00±0.00c
3 讨论
有关幼兔病毒性出血症疫苗免疫剂量的研究,目前尚未见报道。多
者把研究重点放在免疫日龄上,但是如果按常规剂量注射疫苗时,能够很好产生抗体的日龄可能早已是易感日龄,这就使得幼兔很容易感染病毒性出血症[6,7,10]。本研究选择3个日龄兔、4个剂量组进行试验,结果表明,抗体的产生与免疫剂量和日龄之间确实存在一定的关系。在3种日龄兔中,剂量1ml在各时间点的抗体效价、抗体峰值和有效抗体维持时间均显著小于剂量2ml、3ml、4ml,因此不能作为最佳剂量;而后3个剂量组之间多数没有显著差异,鉴于剂量2ml在3个剂量中最小,无论从降低免疫成本还是从方便临床操作考虑,剂量2可作为首选剂量。