T细胞活化技术

T淋巴细胞是在胸腺中分化成熟的淋巴细胞，故称胸腺依赖性淋巴细胞（Thymus-dependent lymphocyte），简称T细胞。T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。T细胞膜表面分子与T细胞的功能相关，也是T细胞的表面标志，可以用以分离、鉴定不同亚群的T细胞。 T细胞表面受体 T细胞产生的免疫应答是细胞免疫，细胞免疫的效应形式主要有两种：与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；另一种是释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强。 T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。 T细胞活化的标志应该是得到两个活化信号 T细胞活化相关信号分子 活化信号1是T细胞受体TCR与相应的抗原肽-MHC分子结合 这里要注意，CD4+细胞是与抗原肽-MHC II类分子结合  CD8+细胞与抗原肽-MHC I类分子结合 CD4/CD8是TCR的辅助受体，也存在于T细胞表面  结合后TCR-CD3复合体有了信号传导的能力  CD3复合体的肽链胞浆区内含有ITAM（免疫受体酪氨酸活化基序），ITAM可以把活化的信号传导至细胞内部，至此得到活化信号1。 只有活化信号1还不可以使T细胞活化，这时需要活化信号2。 在T细胞活化中发挥关键作用 活化信号2就是由细胞表面的黏附分子来完成的 对于T细胞来说，CD28是产生活化信号的共刺激分子，它与与此T细胞接触的APC(抗原呈递细胞）表面的B7分子结合后，即可产正活化信号  此为第二活化信号  需要说明的是，如果CD152与B7结合，产生的却是抑制信号，因为CD152胞内区含有ITIM（受体酪氨酸抑制基序）。 初始T细胞分化 T细胞的活化 细胞基因在T细胞的作用 “T细胞活化技术”是将患者血液抽出体外，在实验室中进行扩增和激活，T细胞数量成千上万的增加，活性增强，杀灭肝癌细胞的能力得到大幅度提升。在快速提升T细胞功能的同时，该技术可以同时裂解和损毁抽出体外血液中的肿瘤细胞膜表面抗原蛋白，而这些变性坏死的肝癌成分成为新的抗原，进一步激发机体的特异性产生针对肝癌细胞的特异性抗体。当这些含有超大数量、超高活性T细胞和肝癌细胞成分抗原回输患者体内，进一步激活全身的体液免疫和细胞免疫系统，T细胞更大范围的激活和扩增，B细胞也被激活并持续产生针对肝癌细胞的抗体。这些细胞和抗体，持续性追踪和杀伤肝癌细胞，直至清除干净。坏死的肝癌细胞成分逐渐被吞噬细胞清除干净。肝脏功能逐渐恢复正常。 T细胞活化技术 方法 将肝癌 细胞与健康人外周血单个核细胞（PBMC）和协同刺激分子抗 CD3、CD28 单抗共培养（初次刺激组），或与经肝癌细胞刺激的 PBMC 共培养（再次刺激组），共培养时间分别为 24、48、72 h。另设靶细胞对照组和 PBMC 对照组。各组实验均设 6 孔。以流式细胞仪 PBMC 经肝癌细胞刺激后 CD45RO+ T 细胞比例变化；MTT 法检测活化 T 细胞对肝癌细胞的杀伤率；双抗体夹心 ELISA 法检测活化 T 细胞 IFN-γ 和 IL-4 分泌水平；流式细胞仪分析 T 细胞表面 Fas 配体表达和 T 细胞受体（TCR）Vβ 亚家族表达水平，并比较初次刺激组与再次刺激组 T 细胞免疫效应的差异。 结果 健康人 PBMC 在肿瘤抗原和协同刺激分子作用下，CD45RO+ T 细胞比例逐渐上升，共培养 72 h 时为（16.1 ± 0.9）%，明显高于 PBMC 对照组[（2.4 ± 0.3）%，P < 0.05]。活化 T 细胞对肝癌细胞的杀伤率随共培养时间的延长而增大[ 24 h 为（28.4 ± 6.7）%、48 h 为（60.4 ± 6.2）%、72 h 为（78.0 ± 9.3）%]；IFN-γ 分泌水平升高，共培养 48 h 时为（932 ± 117）ng/L，明显高于 PBMC 对照组[（157 ±
30）ng/L，P < 0.05]；T 细胞表面 FasL 表达增加至（8.1 ± 1.8）%，明显高于 PBMC 对照组[（0.5 ± 0.2）%，P < 0.01]；肿瘤抗原刺激后，TCR Vβ 的表达水平与 PBMC 对照组相比有所增加。再次刺激组 CD45RO+ T 细胞比例、对肝癌细胞的杀伤率、IFN-γ 分泌水平及 FasL 表达水平均明显高于初次刺激组。 结论 成功建立了体外肿瘤抗原活化 T 细胞模型。活化 T 细胞具有明显的免疫效应，并向 Th1 和 Tc1 方向分化；再次接触相同抗原时，其免疫效应更为迅速、强烈，表现出一定的记忆特性。 文章出自：