TransZol法rna提取试剂盒说明

TransZol法RNA提取步骤 准备试剂:氯仿、无水乙醇。 1.菌体处理 (1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中,用纯水冲洗菌体,12000rpm离心2min,仔细去除培养基上清。 (2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。 (3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。 (4)室温静置5min。 2. 每使用1ml TransZol TM Up,加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚),剧烈震荡30s,室温孵育3min。 3. 10000×g 4℃离心15min。此时溶液分成三层,无色的水相(上层)、中间层,粉红色有机相(下层)。RNA分布在水相中,水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%(为了避免吸到中间层导致DNA污染,可以适当留下一部分水相)。 4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中,加入等体积的无水乙醇(此时可能会出现沉淀),轻轻颠倒混匀。 5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液(如果体积大于离心柱容量,可以分几次完成)。 6. 加入500ul CB9,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 7. 重复步骤6一次。 8. 加入500ul WB9(使用前请先检查是否加入无水乙醇),12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 9. 重复步骤8一次。 10.12,000×g 室温离心2min,彻底去除残留的乙醇,在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。 11.将离心柱放入RNase-free Tube(试剂盒已配)中,加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央,室温静置1min。 12. 12,000×g 室温离心1min,洗脱RNA。 (可选步骤:为获得更多的RNA,建议重复步骤11和12进行二次洗脱)。 13.将RNA置于-80℃保存。