4.活性污泥中微生物的显微镜观察及微型动物的计数

实验（五）活性污泥微生物的显微镜观察及微型动物的计数 活性污泥和生物膜是生物处理废水的主体。污泥中微生物的生长、繁殖、代谢活动以及微生物之间的演替情况往往直接反映了处理情况。因此，在操作管理中除了利用物理、化学的手段来测定活性污泥的性质以外，还可借助于显微镜观察微生物的状态来判断废水处理的运行状况，以便及早发现异常情况，及时采取适当对策，保证稳定运行，提高处理效果。为了监测微型动物的演替变化状况还需定时进行计数。 【实验目的】 1、借助于显微镜观察活性污泥中微生物的状态； 2、掌握微型动物的计数。 【实验材料】 1、活性污泥（或生物膜）样品； 2、显微镜观察活性污泥中的微生物及微型动物进行计数。 【实验步骤】 1、 活性污泥标本片的制备 （1）取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片中央（如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀后的活性污泥一小滴放在载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀释后进行观察）； （2）盖上盖玻片，即制成活性污泥压片标本。在加盖玻片时，要先是盖玻片的一边接触水滴，然后轻轻放下，否则会形成气泡，影响观察； （3）在制作生物膜标本时，可用镊子从填料上刮去一小块生物膜，偶那个蒸馏水稀释，制成菌液。其他步骤与火星污泥标本的制备相同。（略） 2、显微镜观察 （1）低倍镜观察  要注意观察污泥絮粒的大小，污泥结构的松散程度，菌胶团和丝状菌的比例及其生长状况，并加以记录和作必要的描述。观察微型动物的种类、活动状况，对主要种类进行计数； 污泥絮粒大小对污泥初始沉降速率影响较大，絮粒大的污泥沉降快，污泥絮粒大小按平均直径可分为三类：大粒污泥，絮粒平均直径>500μm；中粒污泥，絮粒平均直径在150-500μm之间；细粒污泥，絮粒平均直径<150μm。 污泥絮粒性状是指污泥絮粒的形状、结构、密度及污泥中丝状菌的数量。镜检时可把近似圆形的絮粒称为圆形絮粒；与圆形截然不同的称为不规则形状絮粒。絮粒中网状空隙与絮粒外面悬液相连的称为开放结构；无开放空隙的称为封闭结构。絮粒中菌胶团细菌排列密集，絮粒边缘与外部悬液界限清晰的称为紧密的絮粒；絮粒边缘界线比清晰的称为疏松的絮粒。实践证明，圆形、封闭、紧密的絮粒相互间易于凝聚，浓缩、沉降性能良好；反之则沉降性能差。 活性污泥中丝状菌数量是影响污泥沉降性能最重要的因素，当污泥中丝状菌占优势时，可从絮粒中向外伸展，阻碍了絮粒间的浓缩，使污泥SV值和SVI值升高，造成活性污泥膨胀。根据活性污泥中丝状菌与菌胶团细菌的比例，可将丝状菌分为五等：0级，污泥中几乎无丝状菌存在；±级，污泥中存在少量丝状菌；+级，存在中等数量的丝状菌，总量少于菌胶团细菌；++级，存在大量丝状菌，总量与菌胶团细菌大致相等；+++级，污泥絮粒以丝状菌为骨架，数量超过菌胶团而占优势。 （2）高倍镜观察    可进一步看清楚微型动物特征。观察时注意微型动物的外形和内部结构，如钟虫体内是否存在食物胞、纤毛环的摆动情况等。观察菌胶团时，应注意胶质的厚薄和色泽、新生菌胶团的比例。观察丝状菌时，注意丝状菌生长、细胞的排列、形态和运动特征，以判断丝状菌的种类，并进行记录。 （3）油镜观察  鉴别丝状菌的种类时，需要使用油镜。这时可将活性污泥样品现制成涂片再进行染色，应注意观察是否存在假分支和衣鞘，菌体在衣鞘内的空缺情况，菌体内有无储藏物质的积累和储藏物质的种类等，还可借助鉴别染色技术观察丝状菌对该染色的反应。（略） 3、微型动物的计数 （1）取活性污泥法曝气池混合液盛与烧杯内，用玻璃棒轻轻搅匀，如混合液较浓，可稀释成1：1的液体后观察； （2）取洗净的滴管1支（滴管每滴水的体积应预先测定，一般可选一滴水的体积为1/20ml的滴管），吸取搅匀的混合液，加一滴到计数板的中央方格内（见图4-13）。然后加上一块洁净的大号盖玻片使其四周刚好搁在计数板四周凸起的边框上； （3）用低倍镜进行计数。注意所滴加的液体不一定布满整个100格小方格。计数时，只要把充有污泥混合液的小方格挨着次序依次即可。观察时，同时注意各种微型动物的活动能力、状态等。若是群体，则需将群体上的个别分别计数。 （4）计算。设在一滴水中测得钟虫50只，样品按1：1稀释，则每毫升混合液中含钟虫数应为：50只× 20× 2 =2000只。 向下观看 平行观看 【结果与分析】 1、 将观察结果填入表4-5，在符合处打“√”表示。 表4-5  活性污泥镜检记录    观察人：      日期： 絮体大小 大，中，小，平均 μm 絮体形状 圆形；不规则形 絮体结构 开放；封闭 絮体紧密度 紧密；疏松 丝状菌数量 0；±；+ ；++ ；+++ 游离细菌 几乎不见；少；多 微型动物 优势种（数量及状态）   其他种（种类、数量及状态）         2、试比较生活污水中活性污泥与工业废水处理系统中活性污泥性状以及微型动物的种类、数量等有何差异？ 3、怎样通过了解微型动物种类或数量变化来反映废水处理情况？