275-第十四章 基因工程技术原理与应用

275-第十四章 基因工程技术原理与应用 第十四章 基因工程技术原理与应用 [试题荟萃] 一、填空题 1(BarnH ?是识别6个核苷酸的酶，其切割产物的平均长度的理论值是______。 2(通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的大小不同的片段，可以构建显示该区域各限制酶切位点位置的______。 3(EcoK是?类限制性内切酶，分子组成是αβγ。α亚基的作用是22 ______;β亚基的作用是______;γ亚基的作用是______。 4(个体之间DNA限制性片段长度的差异称为______。 (限制性内切核酸酶的命名原则是:第一个字母来自______;第二、三两5 个字母来自______;第四个字母则表示______。 6(在限制性内切核酸酶切反应管中添加各种成分后，需要离心数秒钟，其目的是______和______。 7(为了进行部分酶切可以采用下列措施:______、______和______等。 8(限制性内切核酸酶的识别序列分别由4、6、8对碱基组成，它们在DNA序列上的切割频率的理论值分别是______、______和______。 9(限制性内切核酸酶通常保存在______浓度的甘油溶液中。 10(测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有______酶的活性，而没有______活性。 11(切口平移(nick translation)法标记DNA的基本原理在于______的______和______的作用。 12(欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变为平末端的双链形式，通常采用的方法是______和______。 13(反转录酶具有催化DNA合成的作用，同时还具有______的作用，可以将DNA-RNA杂合双链中的______消化掉。 14(基因工程中所用的载体主要有三类:______、______和______。 15(一个最简单的质粒载体必须包括以下几个部分:______、______和______。 16(如果两个质粒不能稳定共存于同一个寄主细胞中，则属于______群，这是因为他们的______所致。 17(质粒的拷贝数是指细胞中______。 18(ColEl质粒复制的起始需要三种酶:______、______和______。 19(那些没有可以检测表型的质粒称为______。 20(噬菌体可以被改造作为基因工程载体，主要是由于______和______。 21(λ噬菌体载体主要有两种类型，插入型和置换型。就酶切位点来说，插入型为______个;置换型为______个。 22(M13噬菌体DNA的复制分为三个阶段:______、______和______。 23(噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的(其中来自质粒的结构主要是______和______;来自噬菌体的主要结构是______。 24(λ噬菌体由于包装的限制，插入外源DNA片段后，总长度应在噬菌体基因组的______范围内。 25(引物在基因工程中至少有4方面的用途:______、______、和______。 26(利用Taq DNA聚合酶进行PCR反应所得产物不是平末端，而是在______端带有一个突出的______;据此人们设计了PCR产物的______克隆法。 27(简并引物PCR主要是依据蛋白质的氨基酸序列设计______引物来扩增相应的基因。 28(现有的克隆基因的策略大体上可以分为三类:______、______和______。 29(DNA重组连接的方法大致有4种:______、______、______和______。 30(SD序列是mRNA分子中与______结合的序列，位于______密码子的上游;在基因组中的对应位置是______位点与______位点之间。 (携带有外源基因并能持久传递给子代的植物称为______植物;这些外31 源基因就叫做______。 32(重组子的筛选有两层含义，一是______;二是______。 33(限制性内切核酸酶切割DNA后产生5'端突出的黏性末端，可以用______进行3'端标记;如果限制性内切核酸酶切割DNA后产生3'端突出的黏性末端，可以用______进行5'端标记。 34(为了获得单链标记的DNA探针可以采用以下三种方法:______、______和______。 35(根据Northern杂交的结果可以说明______;根据Southern杂交的结果可以说明______;根据western杂交的结果可以说明______;根据原位杂交的结果可以说明______。 36(Northern杂交和Southern杂交的根本区别在于______和______。 37(欲将某一具有单链突出末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常采用的方法有______和______。 38(由于不同构型的DNA插入EB的量的不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中迁移率也不同，scDNA的泳动速度______;oc DNA的泳动速度______;1DNA居中。 39(在基因工程中，导入外源基因的主要方法有______、______、______和______等。 40(在基因组计划中用来构建人基因组DNA文库的载体通常有4种，分别是______、______、______和______。 41(反向PCR的方法通常用来______;重组PCR的方法通常用来______;原位PCR的方法通常用来______。 42(核酸凝胶电泳中常用的染料是______。 43(为对某一生物的基因进行全面的研究，只需建立______个基因组文库，同时必须建立______个cDNA文库。 44(双脱氧链终止法测定DNA碱基序列需要的试剂为______、______、______和______等。 2+2+45(Taq DNA聚合酶需要适当浓度的Mg才能发挥作用。Mg浓度升高对2+Taq DNA聚合酶的效应是______;Mg浓度降低，对Taq DNA聚合酶的效应是______。 46(普通质粒载体、入噬菌体载体、黏粒载体和噬菌粒的容量由大到小依次为______、______、______和______。 47(目前栽培面积较大的5种农作物是______、______、______、______和______。其中以______为最大。 48(外源基因导入植物细胞的方法为______、______和______。 49(外源基因导人动物受精卵的方法有______、______、______、______和______。 50(大肠杆菌中选择性标记一般为______;酵母菌中选择性标记一般为______。 51(核型多角体病毒有两种表现型______和______;分别感染______和______。 二、判断题 (限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和1 对自身DNA的限制而实现的。( ) 2(限制性内切核酸酶在DNA中的识别/切割位点的二级、三级结构也影响酶切效率。( ) (能够产生限制酶从而防御病毒的侵染的细菌，其本身的基因组DNA中没3 有该酶的识别序列。( ) 4(限制性酶切图谱和限制性片段长度多态性图谱的区别在于前者是物理图谱，而后者是连锁图谱。( ) 5(某一限制酶在一环状DNA上有3个切点，用此酶切割该环状DNA，可以得到3个片段。( ) 6(基因工程中所使用的内切酶不仅具有内切核酸酶活性，也具有甲基化的活性。( ) 7(用同一种限制性内切核酸酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP将他们脱磷酸。( ) 8(Gap和Nick的含义是不同的，前者是指DNA的单链中有较小的缺失，后者仅是断开了一个磷酸二酯键。( ) 9(线状质粒与环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。( ) 10(有a、b、c三个质粒，a和b能够共存于一个细胞中，a和c也可以共存于一个细胞中，所以b和c也一定能够共存于一个细胞中。( ) 11(如果两个质粒可以稳定共存于一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。( ) 12(能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。( ) 13(置换型载体是指同一种限制性内切核酸酶在入DNA中具有两个切点，外源DNA通过取代这两个点间的片段被克隆。( ) 14(噬菌体载体集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA，又能合成双链DNA。( ) 15(λ噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。( ) 16(所谓引物就是与DNA互补的一小段RNA分子。( ) 17(简并引物是根据已知DNA序列设计的引物群。( ) 18(通过原位杂交得到的阳性克隆就是重组子，但不能判断插入的外源基因是否表达了。( ) 19(核酸杂交的原理是根据DNA分子间的互补。( ) 20(突出的3'端或凹端的3'端都可以用Klenow酶进行末端标记。( ) 21(用氯霉素处理细菌可以使内含的严紧型质粒大量扩增，从而极大地提高其产量。( ) 22(为了在大肠杆菌中高效表达外源蛋白质，常需要考虑的因素有启动子的强弱、SD序列、蛋白的存在方式以及Poly(A)加尾信号等。( ) 23(反转录酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶。( ) 24(反转录酶催化的信息流是蛋白质?RNA?DNA。( ) 25(在克隆载体pUC系列中，lacZ'基因提供了一个外源基因的选择标记，蓝色的转化菌落通常表明克隆是失败的。( ) 26(只有用同一种限制性内切核酸酶切割获得的DNA片段末端才能够用DNA连接酶连接起来。( ) 三、选择题 (第1个作为重组DNA载体的质粒是( )。 1 A(pBR3222 B(ColE1 C(pSC101 D(pUC18 2(RFLP产生自( )。 A(使用不同的限制性内切核酸酶 B(每种类型的染色体有两条 C(染色体中碱基的随机变化 D(Southern印迹 E(不同探针的使用 3(?型限制性内切核酸酶( )。 A(具内切酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 B(仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性有另一种酶提供 C(限制性识别非甲基化的核苷酸序列 D(有外切核酸酶和甲基化酶活性 4(?型限制性内切核酸酶( )。 A(由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点 B(甲基化和限制活性相互排斥:MS亚基促使甲基化，R亚基促使限制 C(由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制 D(在错配修复中起关键作用，因为酶结合到DNA上是以结构扭曲为基础，而不是序列错误识别 5(分析限制性内切核酸酶切割DNA所得到的片段长度有助于物理作图，这是因为( )。 A(即使只有一种限制酶，因为DNA是线性的，所以也可以迅速准确确定限制片段序列 B(内切酶在等距离位点切割DNA，同时对于每个生物体的长度是特异的 C(DNA的线性意味着单限制酶切片段的长度之和等于DNA的总长 D(内切酶的消化活性是物种特异的 E(这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息 6(通过限制酶切片段分析，可以对等位基因进行精确的分析比较，其原因是( )。 A(限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个 B(它利用限制性位点作为遗传标记 C(一个特定细胞中等位基因的核苷酸序列不会是相同的 D(限制性内切核酸酶的酶切位点被限制在编码区域内 7(限制性片段长度多态性是( )。 A(用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术 B(二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别 C(物种中的两个个体限制性图谱的差别 D(两个物种中个体间的限制性图谱的差别 E(两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别 8(为了正确地构建一个真核基因组的物理图谱( )。 A(必须分离单条染色体 B(必须从单倍体细胞中分离DNA，这样避免由于二倍体细胞中同源染色体 的存在而产生的干扰 C(必须进行单个染色体分析 D(必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶 (必须首先分离核DNA和细胞器DNA，然后分别对它们作图 E 9(在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好?( ) A(反应时间 B(酶量 C(反应体积 D(酶反应的温度 10(限制性内切核酸酶可以特异性的识别( ) A(双链DNA的特定碱基对 B(双链DNA的特定碱基序列 C(特定的三联体密码 D(以上都正确 11(下列酶中，催化反应不需要ATP的是( )。 A(EcoK B(EcoB C(T4 DNA连接 D(BamH ? 12(限制性内切核酸酶的星号活性是指( )。 A(在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性 B(活性大大提高 C(切割速度大大加快 D(识别序列与原来的完全不同 13(下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( ) A(甘油含量过量 B(反应体系中含有有机溶剂 2+C(含有非Mg的二价阳离子 D(酶切反应时酶浓度过低 14(DNA被某限制性内切核酸酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下 列原因中哪一项不太可能?( ) A(酶失活 B(底物DNA不纯，污染有蛋白质 C(酶切条件不合适 D(由外切核酸酶污染 15(T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种酶( )。 A(催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源 B(既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接 C(是一种单肽酶，分子质量为74kDa D(既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接 16(基因工程中，可以用碱性磷酸酶( )。 A(防止DNA的自身环化 B(降解1)NA样品中混杂的RNA C(制备突出的3'端 D(上述方法都正确 17(Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )活性。 A(5'?3'合成酶 B(3'?5'外切酶 C(5'?3'外切酶 D(转移酶 18(下面关于松弛型质粒性质的描述中，不正确的是( )。 A(质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约 B(可以用氯霉素作用进行扩增 C(通常带有抗药性标记 D(同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型复制子 19(基因工程研究中所用的质粒大多是经过改造的，真正的天然质粒载体 很少。在下列载体中被视为基因工程载体的天然质粒是( )。 A(pBR322 B(pSC101 C(pBS D(pUC18 20(下列载体中对外源DNA片段的容量最大的是( )。 A(质粒 B(黏粒 C(酵母人工染色体(YAC) D(λ噬菌体 21(同一种质粒DNA可以以三种不同的形式存在，它们的迁移速率是( )。 A(oc DNA,sc DNA,1DNA B(sc DNA,1DNA,oc DNA C(1DNA,oc DNA,sc DNA D(sc DNA,oc DNA,1DNA (关于质粒的相容性，下面哪种说法不正确?( ) 22 A(不同不相容群的质粒能够共存于同一细胞中 B(质粒可以分为若干个不相容群，但不能分为若干相容群 C(如果a、b两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同 D(属于同一个不相容群的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和相对分 子质量也相同 23(关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( ) A(在不同的宿主中具有不同的复制机制 B(在不同的宿主中使用不同的复制起点 C(在不同的宿主中使用不同的复制酶 D(在不同的宿主中具有不同的复制速率 24(能够用来克隆30kb以上大小外源DNA片段的质粒载体是( )。 A(charomid B(plasmid C(cosmid D(phagemid 25(Ti质粒( )。 A(存在于所有农杆菌细胞中 B(作为双链DNA被转移 C(在植物中导致肿瘤 D(在植物细胞中作为染色体外质粒 26(建cDNA文库时，首先需分离细胞的( )。 A(染色体DNA B(线粒体DNA C(总mRNA D(tRNA E(rRNA 27(下面关于细菌人工染色体的特征描述，除了( )外都正确。 A(通过电激法将其转化大肠杆菌比CaCl的转化率提高了10,100倍 2 B(细菌人工染色体在细菌中以超螺旋环状存在，使分离操作相对容易 C(细菌人工染色体在大肠杆菌中保持高拷贝数 D(克隆到细菌人工染色体上的外源片段可以直接进行序列测定以获得末端 序列 28(M13K07是一种辅助噬菌体，可以用来帮助噬菌粒制备单链DNA，这是 由于( )。 A(M13K07能够进行滚环复制，得到大量单链噬菌体DNA B(M13K07能够提供成熟包装蛋白质 C(M13K07提供成熟包装所需的信号 D(M13K07提供噬菌粒进行单链复制所需的所有蛋白质 29(黏粒是一种人工构建的载体，( )。 A(具有cos位点，因此可以进行体外包装 B(具有质粒DNA的复制特性，必须利用CaClz制备的感受态细胞转化入大 肠杆菌 C(进入受体细胞后，可引起裂解反应 D(进入受体细胞后，可引起溶原化反应 30(重叠群是一群克隆，在这个克隆群体中各克隆( )。 A(相互间重叠 B(都是来自不同生物间的克隆 C(插入片段位于不同染色体的不同区段D(位于同一染色体的不同区段 31(关于多克隆位点的描述不正确的是( )。 A(仅位于质粒载体中 B(具有多种酶的识别序列 C(不同酶的识别序列可以有重叠D(一般是人工合成后添加到载体中的 (关于DNA接头在基因工程中的作用，下面的说法中哪一项不正确?( ) 32 A(给外源DNA添加适当的酶切位点 B(人工构建载体 C(调整外源基因的可读框 D(增加调控元件 33(cDNA文库包括该种生物的( )。 A(某些蛋白质的结构基因 B(所有蛋白质的结构基因 C(所有的结构基因 D(内含子和调控区 34(用下列方法进行重组体的筛选，表明出现了外源基因的产物的方法是 ( )。 A(Southern印迹 B(Northern印迹 C(Western印迹 D(菌落原位杂交 35(报道基因( )。 A(必须是原核生物的基因 B(以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动区 C(产物容易检测 D(能用于确定启动子何时何处有活性 36(在蓝白斑筛选法中，IPTG的作用是( )。 A(诱导宿主合成β-半乳糖苷酶的羧基端 B(诱导宿主合成β-半乳糖苷酶的氨基端 C(作为酶反应的底物 D(作为显色反应的指示剂 37(用菌落原位杂交法筛选重组子时，( )。 A(需要外源基因的转录产生mRNA，才能进行。 B(需要外源基因的翻译产生蛋白质，才能进行。 C(所用探针必须与克隆的基因有同源性 D(上述说法都正确 38(切口平移是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。 A(DNA聚合酶?，RNA B(DNA聚合酶?，DNA C(DNA聚合酶?，RNA D(DNA聚合酶?，DNA 39(用于Northern杂交的探针可以是放射性标记的( )。 A(DNA B(dNTP C(抗体 D(抗原 40(随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( ) A(双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 B(不需用DNA酶?预处理 C(反应时可用Klenow酶 D(反应时可用DNA聚合酶? 41(在切口平移标记DNA探针时只能使用( )。 A(Klenow酶 B(DNA聚合酶? C(DNA聚合酶? D(DNA聚合酶? 42(要对一双链的DNA分子进行3'端标记可用( )。 A(Klenow酶 B(DNA聚合酶? C(T4 DNA聚合酶 D(T7 DNA聚合酶 43(在细菌转化实验中，如将DNA酶加入培养基，将使转化( )。 A(不能实现 B(加速 C(不受影响 D(失去规律 44(以质粒为载体将重组DNA导入受体细胞的过程称为( )。 (转化 B(转导 C(接合 D(转染 A 45(选用融合蛋白的表达策略的主要优点是( )。 A(容易检测表达蛋白 B(构建表达载体方便 C(表达产物较稳定 D(易获得有天然活力的蛋白质 46(目前在转基因小鼠中常用的基因敲除技术是根据( )的原理而设计的。 A(反义核苷酸的抑制作用 B(转座成分的致突变作用 C(离体定向诱变作用 D(同源重组 47(外源基因在大肠杆菌中高效表达受很多因素影响，其中SD序列的作用 是( )。 A(提供一个mRNA转录终止子 B(提供一个mRNA起始点 C(提供一个核糖体结合位点 D(提供一个翻译的终点 48(从大肠杆菌的两个菌株中提纯的一种质粒，一个可以被某种限制性内 切核酸酶切开而另一个不可以，是因为( )。 A(该质粒在一个菌株中有切割 B(该质粒在一个菌株中是线性的 C(该质粒在一个菌株中被甲基化了D(不能被酶切的质粒是线性的 49(当大量的RNA与有限的DNA杂交时( )。 A(所有的DNA都杂交上了 B(50%的DNA杂交上了 C(50%的RNA杂交上了 D(没有RNA杂交上，而所有的DNA全部复性成为双链DNA 50(下列哪个酶要求有引物才能发挥作用( )。 A(限制性内切核酸酶 B(DNA连接酶 C(末端转移酶 D(反转录酶 51(下列哪种酶不能用于聚合酶链反应(PCR)?( ) A(Taq DNA合成酶 B(T7 DNA合成酶 C(引物酶 D(Klenow片段 52(胰岛素通常以融合蛋白的方式在大肠杆菌中表达，利用融合处有一个 甲硫氨酸残基，可以用何种方法将胰岛素从融合蛋白上切下来。( ) A(氢氟酸裂解 B(羟氨裂解 C(蛋白水解酶 D(溴化氰裂解 53(有关理想质粒载体的特点，正确的是( )。 A(为线性单链DNA B(含有多种限制酶的单一切点 C(含有同一限制酶的多个切点 D(其复制受宿主控制 E(不含耐药基因 54(PCR变性温度一般为( )。 A(94? B(85? C(72? D(62? E(55? 55(在基因工程技术中，不常用到的酶是( )。 A(限制性内切核酸酶 B(DNA聚合酶 C(DNA连接酶 D(反转录酶 E(DNA解链酶 56(cDNA是指( )。 A(在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B(在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA C(在体外经转录合成的与DNA互补的RNA D(在体内经转录合成的与DNA互补的RNA 57(基因组代表一个细胞或生物体的( )。 A(部分遗传信息 B(整套遗传信息 C(可转录基因 (非转录基因 E(可表达基因 D 58(在基因工程中通常所使用的质粒存在于( )。 A(细菌染色体 B(酵母染色体 C(细菌染色体外 D(酵母染色体外 E(以上都不是 59(就分子结构而论，质粒是( )。 A(环状双链DNA分子 B(环状单链DNA分子 C(环状单链RNA分子 D(线状双链DNA分子 E(线状单链DNA分子 60(在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是( )。 A(化学合成法 B(基因组文库法 C(cDNA文库法 D(聚合酶链反应 E(差异显示法 61(催化聚合酶链反应的酶是( )。 A(DNA连接酶 B(反转录酶 C(末端转移酶 D(碱性磷酸酶 E(Taq DNA聚合酶 62(将PstI限制酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连 接属( )。 A(同聚物加尾连接 B(人工接头连接 C(平端连接 D(黏性末端连接 E(非黏性末端连接 63(限制性内切核酸酶切割DNA后产生( )。 A(3'磷酸基末端和5'羟基末端 B(5'磷酸基末端和3'羟基末端 C(3'磷酸基末端和5'磷酸基末端 D(5'羟基末端和3'羟基末端 E(3'羟基末端、5'羟基末端和磷酸 64(基因工程技术中实现目的基因与载体DNA连接的酶是( )。 A(DNA聚合酶 B(RNA聚合酶 C(DNA连接酶 D(RNA连接酶 E(限制性内切核酸酶 65(以质粒为载体将外源基因导入受体菌的过程称( )。 A(转化 B(转染 C(感染 D(转导 66(最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是( )。 A(营养互补筛选 B(抗药性筛选 C(免疫化学筛选 D(PCR筛选 E(分子杂交筛选 67(α互补筛选法属于( )。 A(抗药性标志筛选 B(酶联免疫筛选 C(标志补救筛选 D(原位杂交筛选 E(免疫化学筛选 68(下列常用于原核表达体系的是( )。 A(酵母细胞 B(昆虫细胞 C(哺乳类细胞 D(真菌 E(大肠杆菌 69(在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时，需采用( )。 A(反转录酶 B(多聚核苷酸激酶 C(引物酶 D(RNA聚合酶 E(末端转移酶 70(基因工程技术常用的限制性内切核酸酶为( )。 A(?类酶 B(?类酶 C(?类酶 D(?类酶 E(?类酶 71(在基因工程中通常所使用的质粒是( )。 A(细菌的染色体DNA B(细菌染色体外的DNA C(病毒染色体DNA D(病毒染色体外的DNA E(噬菌体DNA (构建基因组DNA文库时，首先需要分离细胞的( )。 72 A(染色体DNA B(线粒体DNA C(总mRNA D(tRNA E(rRNA 四、简答题 (当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若进行双酶切，应采取何1 种措施?为什么? 2(什么是限制性内切核酸酶的星号活力?它受哪些因素的影响? 3(按照适当的顺序，列出将一种mRNA经反转录克隆到表达载体所用到的酶。 4(什么是测序酶(sequenase)? 5(什么是Klenow酶?具有哪些活性?简要说明其在基因工程中的用途。 6(如何利用T4 DNA聚合酶进行双链DNA的3'端标记? 7(YAC载体上具有什么样的功能性DNA序列? 8(作为一个理想的质粒载体必须具备什么样的特征? 9(什么是质粒的不亲和性?其分子机制如何? 10(简述质粒载体的发展改造过程。 11(什么是蓝白斑筛选?为什么蓝白斑筛选也会有假阳性? 12(什么是辅助噬菌体?它和相应的噬菌粒是如何协同工作的? 13(什么是接头连接法?人工接头在基因工程中有何用途? 14(cDNA文库和基因组文库有何区别? 15(什么是黏粒?为什么它可以克隆大片段外源DNA? 16(如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因? rrr17(某一质粒载体具有Tet和Kan的选择性标记，在Kan基因内部有一BarnH ?切点。现用Barn H ?切割该载体进行基因克隆，问:(1)转化后涂皿时应加何种抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性表型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组子? 18(简单比较Sotlthern印迹、Northern印迹、Western印迹和点印迹的区别和用途。 19(一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因。利用卡那霉素抗性基因内部的EcoR ?酶切位点进行人类生长激素基因的克隆。二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株。如何鉴别出哪些细菌获得了质粒?哪些细菌含有的质粒上携带有人类生长激素基因? 20(某一显花植物的隐性矮秆突变体是由于基因缺失造成的。试设计一可操作的实验克隆它的野生型基因。 21(一双链DNA分子如下图所示，在体内它编码5个氨基酸残基的多肽: 5'TAC ATG ATC ATT TCA CGG AAT TTC TAG CAT GTA3' 3'ATG TAC TAG TAA AGT GCC TTA AAG ATC GTA CAT5' (1)哪条链是转录的模板链?(2)写出由该序列转录出的mRNA序列(终止密码为UGA、UAA、UAG) 22(简要说明PCR技术的工作原理并举几例说明该技术在分子生物学不同研究内容中的应用。 23(普通PCR与随机引物PCR(RAPD)有何区别? (举两种植物基因转移的方法?简述其原理。 24 25(水稻是禾本科植物中基因组最小的物种，目前已完成基因组草图，而禾本科其他作物都未有完整基因组测序资料。现在水稻中克隆了一个矮秆基因，如何由此出发，克隆大麦中的矮秆基因?构建大麦的基因组DNA文库;把水稻的矮秆基因标记后作为探针筛选该文库。 26(简述用基因工程方法培育抗虫棉花新品种的步骤。 27(基因工程的发展主要得益于哪些重大的发现和发明? 28(现有两个可以在大肠杆菌中复制的质粒A和B。A质粒有氨苄青霉素抗性基因，在该基因的上游有(BarnH ?、HindIII、Pst?限制酶位点;下游有EcoR ?、Kpn ?限制酶位点。B质粒有卡那霉素抗性基因，还有Cla ?、EcoR ?、Hind?、Kpn ?酶切位点供克隆DNA片段之用。简述如何将氨苄青霉素抗性基因克隆到质粒B中。 29(简述双脱氧链终止法测定DNA碱基序列的原理。根据下列图谱给出被测定链的基因序列和方向。 30(已知某疾病是由于不表达的A基因过量表达引起的。现欲克隆该基因，请你设计一个可操作的实验程序。‘ 31(什么是密码子偏爱?它是如何影响外源基因表达水平的? 32(利用Ti质粒把卡那霉素抗性基因(kanamycin resistanee gene)转化入烟草细胞并获得两株具有抗性的植株。植株1与野生型杂交获得的子代植株中50%具有抗性，50%敏感;植株2与野生型杂交则获得了75%的抗性植株和25%的敏感植株。你如何解释这样的结果? 33(假设你已经把玉米中一个与光合成有关的蛋白质基因克隆到了质粒载体中。希望知道该基因是否在根和其他非光合组织中起作用，请提出你的实验方案。 34(在酵母中，你已经测定了一段野生型DNA的序列，其中很显然含有一个基因，但其功能未知。为了对其进一步研究，就有必要获得其突变后的表型。你如何利用已经克隆的野生型基因做到这一点? 35(如何利用脉冲场凝胶电泳技术对已经克隆的基因进行染色体定位? 36(细菌的glucuronidase可以把无色化合物X-Glu转变为蓝色物质。如果给它添加一个植物启动子，它也可以在植物细胞中起作用。你如何利用该基因作为报道基因来研究你刚刚克隆的一个植物基因在正常情况下在哪些组织中起作用? 37(把卡那霉素抗性基因插入Ti质粒的rr-DNA区，转化植物Arabidopsis thaliana。获得了两个卡那霉素抗性基因品系A和B。品系A自交3/4子代为卡那霉素抗性，1/4敏感;品系B自交15/16子代为卡那霉素抗性，1/16敏感。请对两种不同的比例作出合理解释。 r38(一环形的细菌质粒pBP1具有一四环素抗性基因(tet)，该基因中存在HindIII酶切位点。果蝇的基因组DNA经HindIII消化后用pBP1构建基因文库。菌落原位杂交显示克隆15含有目的基因。利用HindIII和EcoRV对该克隆进行限制性内切酶分析，对照为空的pBP1质粒。下图为电泳图谱，单位为kb。问: (1)画出具有或不具有插入片段的pBP1质粒的限制性酶切图谱，并指出的rrtet位置;(2)以tetl基因为探针进行杂交，预期哪几条为阳性条带?(3)以目的基因为探针进行杂交，预期哪几条为阳性条带? 39(限制性内切酶EcoR ?的识别序列是GTTAAC;限制性内切核酸酶HaeIII的识别序列是GGCC。每种酶切割双链DNA所得片段的平均长度是多少? 40(人们从红色面包霉(Neurospora)中克隆了β-images/tubulin基因。下图为一大肠杆菌质粒载体pBR的图谱。请你详尽列出从真菌Podospora中克隆同样基因的实验步骤。 41(基因D编码一个对肌肉发育十分重要的酶。以下为对两个小孩的研究结果。 : 小孩1 小孩2: (1)图示两个小孩发育过程中基因的表达。 (2)你如何解释小孩2酶活低的原因。 (3)你如何解释两个小孩Southern杂交结果的差异? 42(某一家系具有一常染色体显性遗传病，该疾病通常在40岁以后发病。从每一个家庭成员提取DNA样品，用限制性内切核酸酶TaqI消化并进行电泳分 离。用已克隆到质粒中的人的DNA片段为探针，放射性标记后进行Southern杂交。结果如下: (1)全面分析DNA变异、探针DNA及致病基因之间的关系。 (2)你如何解释最后一个男孩的结果? (3)你如何利用该结果对该家庭成员进行遗传咨询服务? 43(什么是遗传密码子偏好?它是如何影响外源基因在宿主细胞中的表达量的? 44(借助于基因工程技术可以改造生物的某些性状，但在生产实践中，获取高产、抗逆以及优良品质集于一身的超级转基因农作物却非常困难。谈谈你对这一问题的看法。 45(某种细菌可以利用乙酰辅酶A作为底物在一种酶的作用下合成一种十分重要的聚合物。拟通过高等植物基因工程大量生产这种聚合物。现已经克隆了编码催化该聚合物生成酶的基因，并使该基因处在一个组成型强启动子的控制下，转化并整合到高等植物的基因组中。对转基因植物的分析发现所需的聚合物含量非常低，而且还影响到转基因植株的正常生长发育。请分析产生这一结果的可能原因，并设计实验加以改进。 46(形态标记(morphological marker)和分子标记(molecular marker)都可用于基因定位，简要说明利用这两种标记进行基因定位的基本步骤。 47(利用双脱氧链终止法测定仪DNA片段的碱基序列获得如下图谱。(1)写出由引物合成的DNA核苷酸链的碱基序列，标出5'和3'端;(2)写出作为模板的DNA链的碱基序列，标出5'和3'端。 48(在真核生物的基因工程中，有时会出现这样的情况:通过Southern分析证明了携带外源基因的载体已整合到转化受体的基因组中，但是在转基因受体的当代或后代个体中未能检测出该外源基因的表型。请问有哪些原因会导致这种负的结果?如何分析才能判断该基因不产生表型的原因? 49(某个转基因载体结构，卡那霉素抗性选择标记基因旁边紧密连锁着目的基因(抗冻基因)。用该结构转化烟草叶片，筛选抗卡那霉素的叶片细胞再生植株，即为T代转基因植株。T代转基因植株开花结果，即得T代种子。问:001(1)如果外源基因是单位点插入到烟草某个染色体上，T代种子中抗卡那霉素和1 不抗卡那霉素的分离比为多少?抗卡那霉素抗冻，抗卡那霉素不抗冻，不抗卡那霉素抗冻，不抗卡那霉素不抗冻各占多少?将若干个抗卡那霉素的种子所萌发的小苗培养至开花结果，分别收集T代种子T代种子分成2种情况，有些是整包22 种子都抗卡那霉素的，有些是出现分离比的，请问前者情况占百分之多少的概率?(如果某表型不可能出现，就写占0%) (2)如果T代种子中观察到抗卡那霉素和不抗卡那霉素的分离比为15:1，1 请问植物染色体上有几个位置插入了外源基因? (3)如果在同一染色体上两个重组值为20%的位置各插入外源基因，请问T1代种子中抗卡那和不抗卡那霉素的种子各占多少? (4)若T植株在开花时与野生型杂交，F中抗卡那霉素和不抗卡那霉素的分01 离比是多少? 50(α-干扰素的编码基因没有内含子。为了确定一种免疫缺陷的原因，收集了一些患者和正常人的血样研究其α-干扰素基因的表达状况。下图为关于该基因 的Southern、Northern和western印迹的结果。其中个体1和2具有正常免疫能力，个体3、4和5为免疫缺陷。问: (1)哪一个个体为α-干扰素基因的纯合子? (2)你认为个体3、4和5为免疫缺陷的原因何在?试说出其突变类型。 第十四章 基因工程技术原理与应用 一、填空题 1(40 2(限制酶切图谱 3(限制 修饰 识别 4(限制性片段长度多态性 5(属名 种名 菌株名 6(混匀 防止部分酶切 7(降低酶量 缩短反应时间 增大反应体积 48(4 884 4 9(50% 10(5'?3'合成 3'?5'外切 11(DNA酶? 内切酶活性 DNA聚合酶?的5'?3'合成酶活性 12(DNA聚合酶? 5'?3'外切酶5'?3'合成酶 13(RNA酶H RNA (质粒 病毒 人工染色体 14 15(复制起点 选择标记 克隆位点 16(同一不亲和群 复制机制相同 (质粒的拷贝数与基因组数的比值 17 18(DNA聚合酶 RNA聚合酶 RNA酶H 19(隐蔽性质粒 20(在大肠杆菌细胞中繁殖复制 背景知识清楚 21(一个 两个 22(SS?R RF?RF RF?SS 23(复制起点 选择标记 IG区 24(75%,105% 25(合成cDNA 合成探针 PCR引物 DNA序列测定 26(3' A T载体 27(简并 28(定位克隆 功能克隆 表型克隆 29(黏末端 平末端 同聚物加尾 接头连接法 30(核糖体 起始 转录起始 翻译起始 31(转基因 转基因 32(区分重组子和非重组子 区分带有重组子和非重组子的大肠杆菌 33(Klenow酶 T4 DNA聚合酶 34(M13载体 反转录 不对称PCR 35(基因是否转录和mRNA的大小DNA是否存在和酶切片段的大小 相应抗 原的存在 互补序列的位置 36(样品的区别 电泳方式的区别 37(S1核酸酶切割 DNA聚合酶补平 38(快 慢 39(转化 噬菌体侵染 显微注射 基因枪 40(质粒 λ噬菌体 YAC BAC 41(扩增已知片段两侧的序列 连接两个DNA片段 获得靶序列的位置信息 42(EB 43(一个 多个 44(dNTP ddNTP 引物 DNA聚合酶 45(活性升高特异性降低 活性降低特异性升高 46(黏粒载体 λ噬菌体载体 噬菌粒 普通质粒载体 47(大豆 玉米 棉花 油菜 马铃薯 大豆 48(Ti质粒 Ri质粒 基因枪 49(显微注射 病毒侵染 细胞移植 细胞核移植 精子介导 50(抗生素抗性基因 营养缺陷型 51(包埋型 出芽型病毒 不同个体 同一个体的不同细胞 二、判断题 1(× 2(? 3(× 4(? 5(? 6(× 7(× 8(? 9(? 10(× 11(× 12(? 13(? 14(? 15(? 16(× (× 18(? 19(? 20(× 17 21(? 22(× 23(? 24(× 25(? 26(× 三、选择题 (C 2(C 3(B 4(C 1 5(C 6(B 7(C 8(E 9(B 10(B 11(D 12(A 13(D 14(A 15(B 16(A 17(C 18(C 19(B 20(D 21(B 22(D 23(B 24(C 25(C 26(C 27(C 28(D 29(A 30(A 31(A 32(D 33(A 34(C 35(D 36(A 37(C 38(B 39(A 40(D 41(B 42(C 43(A 44(A 45(C 46(D 47(C 48(C 49(B 50(D 51(C 52(D 53(B 54(A 55(E 56(A 57(B 58(C 59(A 60(E 61(E 62(D 63(B 64(C 65(A 66(B 67(C 68(E 69(E 70(B 71(B 72(A 四、简答题 1(用通用缓冲液;先用低盐酶，后用高盐;先低温后高温。 2(酶切条件的改变会对限制性内切核酸酶的专一性造成影响，识别序列和 切割都有一些变化，改变后的活性就是星号活力。诱发因素包括:甘油浓度大2+于5%;限制酶过量;低离子强度;高pH;有机溶剂的存在;非Mg的二价阳离 子存在等。 3(反转录酶、DNA聚合酶、SI核酸酶、限制性内切核酸酶、连接酶。 4(采用缺失的方法，使野生型的酶失去3'?5'外切酶活性，保留聚合酶 活性，聚合能力提高了数倍。属于序列测定专用酶。 5(用枯草杆菌蛋白水解酶处理DNA聚合酶?，得到一个大的片段，具有 3'?5'外切酶活性和5'?3'聚合酶活性，失去了5'?3'外切酶活性的酶。主要 用途包括:补平DNA的突出单链末端;标记3'突出端;随机引物法标记DNA探针等。 6(首先利用该酶的3'?5'外切酶活性在无dNTP的条件下切割双链DNA，产生突出的5'端，然后加入放射性标记的dNTP，利用5'?3'聚合酶活性进行DNA合成，得到两端3'端都被标记的双链DNA。 7(复制起点、着丝粒和端粒。具有克隆数百kb碱基对DNA的能力。因此，利用它作载体构建基因文库可以显著减少克隆的数目，降低在因文库筛选的难度，同时也加快了染色体步移的速度。 8(复制起点、选择性标记、克隆位点。 9(两种质粒不能稳定共存于同一个细胞中的现象。同一不亲和群中的质粒具有相同的复制机制，相互间产生干扰。同时，细胞分裂时细胞质的不均等分配也是其原因之一。 (改造质粒的复制特性和可选择性，把选择性标记引入到松弛型质粒10 中;调整质粒的结构，提高载体的效率，把载体的长度降低到最小，添加多克隆位点;在质粒中引入多种用途的辅助序列。 11(质粒上含有lacZ'基因，此基因为lacZ的5'端，编码氨基端;宿主菌中含有lacZ基因的3'端，编码羧基端;二者同时存在时发生分子内互补，成为具有活性的LacZ蛋白;当培养基中含有IPTG和X-gal时可以形成蓝色化合物。 12(在主要基因间隔区含有突变，使得自身DNA复制效率低下的一类噬菌体突变体。但它们可以为寄主中噬菌粒的复制与包装提供蛋白酶与外壳蛋白，同时噬菌粒中所具有的复制子完全正常，可以利用这些蛋白质迅速复制自身。 13(人工合成的一段含有限制性内切核酸酶识别位点的一小段DNA。连接到载体或外源DNA片段上，从而方便地制造出新的酶切位点，便于二者的连接。主要用途是介导载体和插入片段的高效结合。 14(前者不含内含子，后者有。前者仅是部分结构基因的克隆，后者包含了基因组的全部信息。 15(具有cos位点的质粒载体就是黏粒。由于它具有该位点可以被λ噬菌体的包装蛋白包装，从而具有克隆大片段外源DNA的能力。 16(简并引物PCR、合成寡核苷酸探针筛选基因组文库或cDNA文库、构建cDNA表达文库利用相应的抗体筛选。 17(加抗生素Tet;抗Tet，对Kan敏感;把涂皿形成的菌落影印到新的含Kan的平皿中，凡是不能生长的克隆就是阳性克隆。 18(Southern杂交用于检测待测DNA样品中是否含有与探针同源的DNA片段和大小。 Northern杂交用于检测待测RNA样品中是否含有与探针同源的RNA片段和大小。 点印迹只能检测DNA和RNA样品中是否含有与探针同源的片段而不能得知其大小;但操作简便。 Western杂交利用抗体抗原反应检测某一蛋白质的存在与否。 19(对氨苄青霉素有抗性的细菌;对氨苄青霉素有抗性、对卡那霉素无抗性的细菌。 20(把正常植株的基因组DNA与隐性矮秆植株的基因组DNA进行差减杂交。 21((1)上链是模板链;(2)转录出的mRNA序列是: 5'AUGCUAGAAAUUCCGUGGA 3' 22((1)基本原理:在高温下使DNA变性成为单链;在较低的温度下引物与单链DNA在互补位置结合，形成复合物。把温度调节到DNA聚合酶的最适温度，以dNTP为原料，以单链DNA为模板从引物的3'端开始合成一条新的DNA双链。重复这一过程就可以使靶DNA特异扩增。 (2)应用:用于制备目的PCR、用于检测目的PCR、用于引入突变的PCR、用于扩增未知区域的PCR等。 23(?引物不同。普通PCR为双引物，且较长20bp左右;RAPD用单引物且较短，10bp左右;?复性温度不同。普通PCR较高，45?以上;RAPD较低， ?扩增产物不同。普通PCR产物序列已知，且单一;RAPD产物未知40?以下; 且多样。 24((1)Ti质粒介导的基因转移:农杆菌都携带有一种称为Ti的质粒(tumol-inducing plasmid)，该质粒上有一段DNA，称为T-DNA(transfer-DNA)，它能转移并整合进植物基因组中。将目的DNA片段插入T-DNA区，然后通过土壤农杆菌和Ti质粒将它送入受体植物，插入植物细胞基因组内。 (2)基因枪技术:借助于高速运动的金属微粒将附着于其表面的DNA导入受体细胞中的技术。 25(构建大麦的基因组DNA文库;把水稻的矮秆基因标记后作为探针筛选该文库。 26(获得目的基因——抗虫基因;把抗虫基因与一定的载体(如Ti质粒)连接形成重组体DNA;转化棉花的细胞;培养出愈伤组织和试管苗;筛选出具有抗性的试管苗;把试管苗种植并与普通棉花杂交筛选并培育为品系。 27((1)技术上的三大突破:1970年Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌(hatmonphilus influenzae)中分离和纯化限制性内切核酸酶Hind?;基因工程载体的构建——质粒和噬菌体的有关研究;Mendel M.和HigaA(确立的基因转化技术。此外，在20世纪60至70年代确立了多种基本研究技术如琼脂糖电泳、核酸杂交等。 (2)理论上的三大发现:1944年，Avery发现DNA是遗传物质;1953年Watson和Crick提出DNA的双螺旋结构模型;60年代众多学者共同阐明中心法则。 28(用Hind?和EcoR?或Kpn?切割A质粒和B质粒，把切割片段重组连接后转化大肠杆菌，筛选出具有氨苄青霉素抗性和卡那霉素抗性的克隆。 29(正常的体外合成体系中，DNA聚合酶在引物的引导下，沿模板链的3'?5'方向移动，利用体系中的4种2'-脱氧核糖核苷酸(dNTP)聚合成一条与模板互补(沿5'?3'方向)的DNA新生链。如果在体系中加入2'，3'-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)，当它们掺入正在合成的新链DNA后，由于其在脱氧核糖3'位置上没有羟基，因而不能与后续dNTP的5'磷酸基团之间形成磷酸二酯键，合成中的新DNA链在这个位置上终止延伸。这样如果在DNA合成体系中，既有正常反应所需的4种dNTP，同时又加入了一定比例的ddNTP，那么新合成的DNA链在掺入这种dNTP的位置，即可能掺入同种ddNTP，导致新合成链在凡是应该掺入这种核苷酸的位置就有可能随机终止。由于存在这样一种ddNTP与同种dNrrP的竞争，合成产物即为一系列长度不同的多核苷酸片段。这些片段的5'端是固定的，而终止点随模板链碱基序列而改变。5'GCGAAGAGT 3' 30(提取正常组织和A基因过度表达的组织的mRNA进行差减杂交。 31(不同物种中对64种密码子的使用频率有较大的差异称为遗传密码子偏好;很少使用的密码子，在细胞中其相应的tRNA就很少;如果基因的编码序列中存在这些密码子，在翻译时就需要较长的时间等待相应tRNA的到来，使得翻译效率降低。 32(在植株1中，一个拷贝的抗性基因插入了一个位点并表达;植株2中，有两个拷贝的抗性基因插入到了两个位点并表达，在非同源染色体上。 33(?把已经克隆的基因经标记作为探针使用。从根或其他非光合组织中提取RNA进行Northem印迹。?设计特异引物，从根或其他非光合组织中提取RNA进行RT-PCR，或荧光定量PCR。 (利用基因敲除技术敲除野生型基因，然后观察其表型。为了做到这一34 点，把一个标记基因如绿色荧光蛋白基因插入到野生基因内部。转化酵母细胞，筛选表达该基因的菌落，观察其表型;或者应用定点诱变技术。 35(电泳后，利用放射性同位素或地高辛或生物素标记已克隆的基因作为探针进行Southern印迹。 36(把克隆的植物基因的编码序列更换为glucuronidase的序列，并重组到Ti质粒上，转化植物细胞，筛选出转基因植株。施加X-Glu，观察获得的转基因植株是否可以把它转化为蓝色。 37(品系A整合了—个拷贝的卡那霉素抗性基因;品系B整合了两个拷贝的卡那霉素抗性基因，且位于不同的染色体上。 38((1)酶切图如下: (2)所有5kb、4.5kb、3kb、2kb的片段均呈现出阳性。 (3)所有2.5kb、1.5kb、1kb以及EcoRV消化的克隆15产生的4.5 kb和3kb均呈现阳性。 6439(GTTAAC的出现频率是4，即4.096kb;GGCC的出现频率是4即0.256kb。 40(把Neurospora的β-tubulin基因标记作为探针。选者在质粒pBR中具有唯一切点的Hae?消化该质粒，制备Podospora的基因组或cDNA文库。筛rs选tetkan克隆找出含有该基因的克隆。 41((1) (2)基因的表达正常，但活性大大降低，说明可能发生了突变，从而影响酶活性。 基因D发生了一个点突变，碱基序列的改变产生了一个新的酶切位点，(3) 可以被Xho?识别和消化。使得个体2的Southern杂交结果出现两条带纹。 42((1)所有的家庭成员都具有5kb带;6个患者中的5个具有3和2kb的带，但非患者均不具有，因此这些片段与疾病基因顺式连锁。 (2)最后一个男孩可能是致病基因与RLFP座位间发生交换，导致一染色体具有D和5kb片段。 (3)由于3kb和2kb片段与致病基因连锁，这些片段的存在可以作为该疾病的标志，但产前诊断必须考虑交换的问题。 43(不同物种中对64种密码子的使用频率有较大的差异称为遗传密码子偏好;很少使用的密码子，在细胞中其相应的tRNA就很少;如果基因的编码序列中存在这些密码子，在翻译时就需要较长的时间等待相应tRNA的到来，使得翻译效率降低。 44(原因是多方面的:?目前尚难于对多个基因同时进行转移;?目前尚难于对基因在转基因植株中的位置进行控制;?与高产、抗逆及其他优良品质相关的基因还没有克隆;?基因组是经过漫长的进化形成的相互协调的整体(过多外源基因的插入无疑会干扰其协调性，从而影响其生存和品质。 45(?所用启动子为组成型强启动子，使得目的基因在所有组织和器官中表达，影响转基因植株的代谢和生长，从而影响该聚合物的合成。?乙酰辅酶A为生命活动中的重要物质，目的基因的表达产物与植株内的基因竞争该底物(影响转基因植株的代谢和生长，从而影响该聚合物的合成。?遗传密码子的偏爱。 46(?收集不同的患者家系(人类中)或进行一定的杂交(测交或自交，动植物中);?分析多个形态标记或分子标记与目的基因的遗传规律;?根据连锁情况，进行基因定位。 47((1)5'TTCGAAAGGTGACCCCTGGA 3' (2)3'AAGCTTTCCACTGGGGACCT 5' 48(?基因的整合位点位于异染色质中，不能转录;可以用Northern杂交证明;?基因的表达有时间和空间的特异性，检测时发育时期和组织器官选择不当，改变检测的时间和选择更多的组织器官;?由于稀有密码子等的存在使得mRNA不能有效翻译，可以通过Northern杂交证明;?基因转录了，但mRNA被降解，可以通过Northem杂交证明 49((1)3:1; 3:0:0:1;1/3 (2)2个位点插入了外源基因，且位于非同源染色体上 (3)80%;20% (4)1:3 50((1)1、3、4、5为纯合体。 个体3患病的原因可能为该基因的调控区或相应的调控转录因子发生突(2) 变，使得该基因不转录;个体4由于Northern杂交结果正常，但Western杂交偏小，应该是由于在编码区产生了无义突变，使得翻译提前终止，产生的蛋白质没有活性;个体5由于Northern杂交结果正常，但Western杂交偏大，应该是由于在终止密码处产生了突变发生了通读，使得翻译没有正常终止，产生的蛋白质没有活性。