高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究

高效液相色谱法测定雷公藤片含量的研究 高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究 高效液相色谱法测定雷公藤片含量的方法研究 【摘要】 目的提高雷公藤片的质量，摸索高效液相色谱(HPLC)法测定雷公藤片含量的方法。 方法采用高效液相色谱法，C18柱，流动相为甲醇-水(40?60)，检测波长218 nm。结果雷公藤甲素线性范围为0.047 6,0.476 0 μg，r=0.9991，平均回收率为101.2%， RSD为2.1%(n=6)。结论 雷公藤片含量测定限度暂定为:每片含雷公藤以雷公藤甲素(C37H22O14)计，不得少于0.01 mg/片。 【关键词】 雷公藤片 雷公藤甲素 高效液相色谱 雷公藤片为卫矛科木质藤本植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f，药材经醋酸乙酯提取后制成的片剂，原卫生部药品标准采用薄层扫描法,1,测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量，因雷公藤药材中成分较为复杂，采用薄层法难以得到较好的分离效果，且其展开显色后极不稳定，显色剂褪色较快，难以得到较好的测定结果。为了有效地控制其质量，国家药品标准行动组下达了提高雷公藤片质量标准的任务。通过实验研究，本文建立了HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量，经研究其中雷公藤甲素在所选用条件下分离较好，检测灵敏度高，测定专属性强，可以作为本品的含量测定控制方法。 1 仪器与试药 HP-1100型高效液相色谱仪(Ajilent公司，美国);大连依利特Hypersil C18液相色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);雷公藤甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号0857-9601);甲醇为色谱纯，水为重蒸水;其他试剂为纯;雷公藤片由湖北三九黄石药业有限公司提供。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为大连依利特Hypersil C18液相色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm);甲醇-水(40?60)为流动相;检测波长218 nm;流速1 ml/min;柱温:35?;理论板数按雷公藤甲素峰计不低于3 000。 2.2 供试液制备方法和洗脱液用量的选择 2.2.1 供试液制备方法的选择 雷公藤制剂中成分较为复杂，不经提取精制难以得到较好的分离效果，参照常雪灵等,2,的文献报道，进行了提取精制方法的考察。精密称取样品粉末约1 g，加醋酸乙酯20 ml，超声使溶解，加5%HCl 溶液15 ml洗涤两次，弃去酸液，醋酸乙酯液加10%NaOH溶液20 ml，水浴加热15 min，分取碱液，并用10%NaOH溶液20 ml萃取两次，合并碱液，加稀HCl调pH至4，以醋酸乙酯20 ml萃取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10 ml作为供试品溶液。 精密称取样品粉末约1 g，加氯仿10 ml，超声10 min，加中性氧化铝1 g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱(内径 mm，100,200目，10 g)，以醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液150 ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10 ml作为供试品溶液。 精密称取样品粉末约1 g，加氯仿10 ml，超声10 min，加中性氧化铝1g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱(内径 mm，100,200目，10 g)，以10%醋酸乙酯石油醚(60,90?)50 ml 洗脱，再以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液100 ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10 ml作为供试品溶液。 取上述3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表1。表1 3种提取分离方法测定结果(略) 结果表明:采用上中性氧化铝柱提取分离效果较萃取法好，方法3中用10%醋酸乙酯石油醚(60,90?)50 ml 洗脱主要是除去杂质，但经比较此法对分离影响不大，而以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脱对测定结果无多大影响，但洗下较多杂质，基线波动较大，杂质峰较多，对分离造成一定影响，故采用方法2作为含量测定方法。 2.2.2 溶剂用量的选择精密称取样品粉末约1 g，共3份，分别加氯仿10 ml，超声10 min，加中性氧化铝1 g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱(内径 mm，100,200目，10 g)，以醋酸乙酯溶液洗脱，分别收集洗脱液100 ，150 ，200 ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至10 ml作为供试品溶液。 将3种溶液按拟定的色谱条件分别进样。结果见表2。表2 3种溶剂用量测定结果(略)