龙眼核中抗氧化活性物质的研究（可编辑）

龙眼核中抗氧化活性物质的研究（可编辑） 广西大学 硕士学位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 姓名:李英军 申请学位级别:硕士 专业:制糖工程 指导教师:文良娟 20090701龙眼核中抗氧化活性物质的研究 摘要 龙眼为我国著名的亚热带水果,主要分布在福建、广西、广东及台 湾等省。随着龙眼酒、龙眼罐头、桂圆干等深加工产品的出现,产生了大 量的加工废弃物龙眼核。而龙眼核的重量占龙眼果实重量的%,由于 没有进行综合利用,每年废弃的重量达几十万吨。鉴于广西的资源特点 和目前的龙眼核利用率不高现状,本文对龙眼核的成分进行了测定,对 龙眼核抗氧化物质提取工艺和抗氧化物质的分离纯化进行研究,为龙眼 核的开发利用提供理论基础。主要研究结果如下: 、对三个品种石硖、大乌圆、储良龙眼核的成分进行了测定, 得出淀粉含量占干重以下相同的.%.%,总糖含量.% .%,还原糖含量.%~.%,蛋白质含量.%.%,水分 含量.%.%,总酚含量.%.%,总黄酮含量.%~.%。 结果表明龙眼核含有丰富的淀粉、总糖、总酚、还原糖、蛋白质 等,总 黄酮含量也较高。 、对石硖龙眼核抗氧化物质的提取工艺进行优化,通过正交实验 得 出最佳的提取工艺:料液比为:,乙醇浓度/为%,?的 水浴回流提取小时,分两次提取,提取物清除?和羟基自由基效 果最好。 、通过清除?自由基、羟基自由基、亚硝酸根三个不同的体系 研究了龙眼提取液的抗氧化性能,并与维生素进行了比较。得出 对 ?的半数清除浓度为:石硖. /,大乌圆. /, /;对?的为:石硖. 储良./,维生素.. /,储良./,维生素 /; /,大乌圆. 对的为:石硖. /,大乌圆. /,储良 ./,维生素的为./。结果表明,石硖、大乌圆、 储良龙眼核提取液对?和?都有较强清除能力,而对亚硝酸根清 除作用不是很理想。 、通过对龙眼核的%乙醇提取物进行定性分析,并在 进行扫描,初步推断含有酚类和黄酮类物质。 、通过大孔树脂.和聚酰胺树脂对石硖龙眼核的提取样进行分 离,利用水和不同浓度的乙醇进行洗脱并利用对羟基自由基和自 由基清除率评价洗脱样的抗氧化能力。结果表明大孔树脂分离得 到的五 个洗脱样中,%乙醇沈脱样清除?和羟基自由基效果最好。聚酰 胺树脂分离得到五个沈脱样品中,%乙醇沈脱样清除?和羟基自 由基效果最好。 、对用聚酰胺树脂分离得到的%乙醇洗脱样进行定性分析, 并在进行扫描,结果表明样品含有酚类和黄酮类物质。 对纯化得到的样品进行红外光谱检测分析,得出可能含有苯 环,., .,羰基,伯醇基。 关键词:龙眼核 多酚黄酮类分离 抗氧化 .. ,, . ,, , % . .., , . : 、,, . , , .% ,,, .%,.%~.%,.%.%,.%~.%,.%~.% . , %.%. ,, ,.. 、.?. %:,/ 、 ‘,’, .。 . ./, ./, ./, /. 。 ./, ../, ./, /. ./, ./, . . /. /. , . . 、 , %.、% 一 . ‘. ,%. ,% .、 % .. , ,一, , . ; ; : ;; 广西大学学位论文原创性声明和学位论文使用授权说明 学位论文原创性声明 本人声明:所呈交的学位论文是在导师指导下完成的,研究工作 所取得的成果和相 关知识产权属广西大学所有。除已注明部分外,论文中不包含其 他人已经发表过的研究 成果,也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的 研究工作提供过重要帮 助的个人和集体,均已在论文中明确说明并致谢。 年乡月,/日 论文储签名:力建寻 学位论文使用授权说明 本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即: 本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容; 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本; 学校有权保存学位论文的印刷本和电子版,并提供目录检索与阅览服务; 学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文; 在不以赢利为目的的前提下,学校可以公布论文的部分或全部内容。 请选择发布时间: 口即时发布 口解密后发布 保密论文需注明,并在解密后遵守此规定必袭早翩徘乡象铂岬年溉/日广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 第一章绪论 .概述 龙眼 .为无患子科,龙眼属,是我国著名的 亚热带水果【?。龙眼原产于我国南部和越南北部的南亚热带地区,已有多年栽 培历史,是四大岭南佳果之一。龙眼畅销海内外,在国际市场上享有很高的声誉,在 我国其栽培面积和产量均居世界首位,福建、广西、广东以及台湾等省是主产区。 自古以来,龙眼就被视为滋补佳品,其营养价值非一般水果可比,总糖含量最高, 富含维生素、视黄醇、尼克酸等,还含有人体所需的营养物质如租蛋白、维生素以及 无机盐等。 龙眼肉可以治疗虚劳赢弱,失眠健忘,惊悸怔忡以及脾虚泄泻,产后水肿等症状 【】’因此,龙眼的营养价值及食疗价值很高。龙眼核系龙眼的种仁,其质量占龙眼果 实质量的%,由于没有进行充分利用,每年废弃的质量达几十万吨,造成了极大的 浪费。龙眼核性味涩、平、气微,味淡而微苦,具有止血、定痛、理气化湿、开胃健 脾、补虚益智等功效,可以用来治疗创伤出血、疝气、疥癣、湿疮等。龙眼核含生物 碱及脂肪油等,除去黑色种皮,研末或炒黑研末外敷,可治疗创伤性出血;用茶油调 敷可以治疗火伤‘。《本草纲目拾遗》载:“张觐斋云,桂圆核仁, 凡人家有小子女者, 不可不备,遇面上或磕伤及金刃伤,以此敷之,定疼止血生肌,愈后无瘢;若伤鬓发 际,愈后更能生发,不比他药,愈后不长发也”。龙眼壳味甘、性温、无毒,可 以治心虚头晕、散邪祛风、聪耳明目等症,研细可以治疗治烫火伤。 .龙眼的研究进展 ..龙眼的研究现状 龙眼肉的形态学特征【 ?肉眼观察 ~.、 ~.、宽 龙眼肉假种皮为不规则块片,常粘结成团,长 厚约. 。黄棕色至棕色,半透明。外表面近果皮的一面皱缩不平;内表面粘附 种子的一面光亮,有细纵皱纹。质地柔润,有粘性。广西大掌硕士掌位论. 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 ?显微结构 龙眼肉假种皮表面显微结构特征:外表皮细胞形状不一,垂周壁有时可见细 小念珠状增厚;内表皮细胞垂周壁含珠状增厚较明显,平周壁有 时有大的圆纹孔;内 外表皮细胞可见少数杆状、棒状、针状、菱形或不规则形状的草酸钙结晶,长“~ ,直径一。有的细胞中含淡黄色团块及脂肪油滴。 基本组分 成熟的龙眼肉营养丰富,其重要营养成分如表.和表.。 表.龙眼果肉营养化学成分分析表 表.龙眼果肉矿物元素分析表 另外,有对龙眼果肉中龙眼多糖的结构、理化性质、生物活性进行研究,得出龙 眼粗多糖干品为棕褐色无定形固体,极易吸潮,经分离纯化得到白色粉末,不溶于乙 醇、丙酮、正丁醇等有机溶剂,易溶于热水。龙眼多糖的骨架结构,即龙眼多糖 是由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等单糖组成的杂多糖,其组成比例为::,通 ‘龙眼核中抗氧化活性物质的研究 广西大掌硕士学位论文 过体外抗氧化实验对超氧自由基有清除作用,但清除作用不大;对羟基自由基当 多糖浓度大于‖时清除能力与浓度有一定的量效关系。 核苷类物质 肖维强建立了利用高效液相色谱分离检测了龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含 量,该方法简便、成本低、杂质干扰少,并且稳定性和重现性好。 龙眼生理活性的研究 随着科学技术的发展,经过现代药理研究表明,龙眼肉具有以下生理活性功能: ?抗氧化:吴华慧【】等发现龙眼多糖具有清除氧自由基的能力。李雪华【等研究 表明龙眼多糖对活性氧自由基具有较强的清除能力。王玲等【】研究得出龙眼多糖对超 氧阴离子自由基和羟自由基均有不同程度的清除作用。 ?抗衰老:王惠琴【 】等用小鼠肝匀浆进行的体外及体内实验,证明龙眼肉提取液 具有提高细胞功能及抗自由基的功效。在中国第二届抗衰老科学研究会上指出“龙眼 是抗衰老天然食品”。 ?抗癌:有研究曾对多种天然食物、药物进行抗癌试验,结果表明龙眼肉的 水浸液对子宫颈癌细胞.抑制率达%以上,比对照组抗癌化疗药物博莱霉 素高%,与抗癌药物长春新碱相当【。有研究给尚能存活半年的癌症患者口服龙眼 粗提浸膏,结果得出其改善癌症症状达%,癌增殖被抑制%,能明显延长寿命【】。 ?影响内分泌机能,增强机体免疫力:广东省农科院果树研究所从龙眼中初步分 离得到四组成分,并针对免疫调节、抗衰老、促进智力发育等方面进行活性研究,预 期有治疗“老年痴呆症”的作用。许兰芝等【给大鼠皮下注射龙眼肉的乙醇提取物, 发现龙眼肉乙醇提取物明显影响大鼠垂体一性腺轴的内分泌机能,这可能与其抑制催 乳素的分泌,增强机体免疫力有关。农兴旭等【】发现龙眼肉的乙醇提取物明显增强小 鼠的碳廓清率,对小鼠受高温、低温、缺氧等刺激下有明显的保护作用。 ?抗焦虑作用:奥山惠美给小鼠皮下注射龙眼的甲醇提取液主要成分为腺 苷,以抗焦虑活性为指标,通过小鼠冲突缓解试验发现,当给予小鼠厂腺苷时, 饮水次数明显增强:给予小鼠/腺苷时,可抑制自发运动。 ?抑菌作用:据文献报道,龙眼肉水浸剂在试管内对奥杜盎氏小芽胞癣菌致病性 。 皮肤真菌有抑制作用,煎剂纸片实验对痢疾杆菌有抑制作用【 ?助消化、降脂护心作用:龙眼肉入胃后与胃酸化合,成为消化蛋白与淀粉的酶, 有助消化【。并且龙眼肉还具有降血脂,增加冠状动脉血流量【等功效。广西大掌硕士学位论文 龙目良核中抗氧化活性物质的研究 ..龙眼壳的研究 ...萜类 徐坚等【从龙眼壳石油醚浸提物中分离出龙眼三萜和龙眼三萜,并通过紫 外光谱、红外光谱,核磁共振和质谱确定了其空间结构。 ...总黄酮 黄锁义等四用超声波方法提取龙眼壳中的黄酮类物质,得出回收率.%。郑 公铭等利用不同的有机溶剂正己烷、乙酸乙酯、甲醇提取龙眼壳中的有效成分,并 进行脂质过氧化实验,初步推断了其中的有效成分为黄酮苷,二氢黄酮苷,酚酸。 ...黄色素 龙眼果皮含有黄色素【,对黄色素的稳定性分析,表明在酸性、?以下、食品 添加剂食盐、苯甲酸钠、蔗糖、柠檬酸和抗氧化剂、的加入条件下 黄色素稳定,但在碱性、?以上及食品添加剂亚硝酸钠和抗氧化剂、 、加入下不稳定。以龙眼果皮为原料,开发出比红曲色素制备成黄 色素更廉价的天然色素非常必要。 ...多酚氧化酶和过氧化物酶 龙眼在贮藏过程中常发生各种生理失调、组织褐变。目前对龙眼壳的研究主要针 对褐变机理及其对龙眼贮藏的影响。 龙眼果皮发生褐变必须同时具备种物质即多元酚、以及。莫长耕等‘】 研究得出成熟龙眼中果皮酶活性比未成熟龙眼中果皮酶的活性高,龙眼果皮褐变时 活性显著上升,由此可见是导致龙眼果皮褐变的主要原因。吴振先等【研 究认为,龙眼壳褐变反应的主要底物是游离多酚类物质,花色素在褐变反应中的底物 作用不明显,龙眼采后衰老褐变过程中,果皮的总酚含量明显下降,但类黄酮含量下 降较少。许秀淡【的研究也进一步证明这一点。蔡其洪阳研究龙眼果皮中多酚氧化 酶活性在不同条件下的变化规律,得出龙眼果实在贮藏初期及低 温、低值 和柠檬酸存在的条件下,龙眼壳中的活性较低或者受到抑制,有利于果实的保 鲜。 龙眼果实保鲜方法主要有民间传统保鲜法、仲丁胺防腐保鲜、保鲜法等,其 中以二氧化硫处理保鲜法效果较佳,泰国首先借鉴了葡萄保鲜法进行龙眼果实保 鲜,并使该项技术在商业生产中广泛使用。等【、周云【、何志刚【等使用二 氧化硫对龙眼保鲜进行研究,具有果实外观好,贮藏期较长的优点,但二氧化硫残留 广西大掌硕士学位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 对人体有一定危害,因此方法还需进一步改进;而其它的贮藏保鲜方法很难长期贮藏, 并且对龙眼果实褐变的控制效果也不理想。 ..龙眼核的研究 ...龙眼核的形态学特征 龙眼核系龙眼的种仁,呈类球形,直径..,表皮红褐色,有光泽。~端 有长椭圆形灰白色种脐质坚硬。剖开后有两片子叶,灰褐色,质亦坚实。气微,味淡 而微苦。 ...基本成分 肖更生九等对龙眼核的营养成分进行分析见表.,结果表明龙眼核含丰富的淀 粉、还原糖、蛋白质等营养成分,并且含有多种矿物质元素,如钾、钙、镁、磷等元 素,得出龙眼核中淀粉含量较高。 龙眼核淀粉研究,目前主要是李秀娟【】,得出龙眼核淀粉的形貌与马铃薯和玉米 淀粉有很大差别,龙眼核淀粉颗粒表面较光滑,部分有类似鲜果壳表面的裂纹,颗粒 多半呈椭圆形,粒径.“~.,平均粒径为..,具有典型的偏十字光,无明 显的层状结构。淀粉糊化的起始温度和终止温度分别为.?和。?;龙眼核淀粉 的结晶结构属于型,直链和支链淀粉含量分别为.%和.%,介于玉米淀粉和 马铃薯淀粉之间:龙眼核淀粉的溶解度与玉米淀粉相近,膨胀度不同于玉米淀粉,在 ?之间低于玉米淀粉,以后溶解度和膨胀度迅速增加并大于玉米淀粉。 有研究从龙眼核中分离鉴定出三种不饱和氨基酸,分别是.氨基.. 甲基.己炔 酸、荽基.羟甲苦一己炔酸及.氨基.羟基.庚炔酸】。对龙眼核的研究中, 发现龙眼核中含有至少种以上的氨基酸,以谷氨酸、天氨酸、精氨酸、苏氨酸等 为主,其含有种人体必需氨基酸。氨基酸含量合计为./干。广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 ...脂肪酸 龙眼核脂类含有丰富的脂肪油,油中含大量连接有长短不同碳链的环丙烷类脂肪 酸、二氢苹婆酸和顺式,一亚甲基十六烷酸【】,其中二氢苹婆酸的含量约 .%上【】,与其它植物核油相比,龙眼核中的环内烷类脂肪酸含量相当高。 ..酚类物质 有研究通过..联用方法研究龙眼核,在其中分离得到了十三个酚类 物质,分别是没食子酸、鞣花酸、没食子酰.葡萄糖苷、没食子酰.二葡萄糖苷、二没 食子酰.二葡萄糖苷、五一七没食子酰一二葡萄糖苷、鞣花酸.戊糖轭合物、没食子酰.六 羟基二酚酰.毗喃型葡萄糖苷、五没食子酰.六羟基二基.吡喃型 葡萄糖苷、原花青 素型二聚体、原花青和槲皮素...鼠李糖苷,此研究表明龙眼核中还存在一系 列含量丰富的酚类化合物,有待更深入研究【。有研究从龙眼中分离出诃里拉京,还 比较了龙眼壳、龙眼肉和龙眼核中没食子酸、鞣花酸及诃里拉京的含量】。 ...棕色素 朱纯等【】研究得出龙眼核棕色素水溶性好,对光、热、氧化剂的耐受性强, 当为~时,色素稳定性好,对还原剂的耐受性差,维生素对色素有 增色作用,而蔗糖、食盐、柠檬酸等食品添加剂的加入对该色素无不良影响。从开发 出食用安全、原料经济、并且具有一定保健作用的天然色素角度出发,还需对该色素 作用进一步研究,将为开发出水溶性好、稳定性强的龙眼核棕色素提供科学依据。 ...其他 广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 龙眼核含肥皂草素、皂苷等‘引。龙眼叶还含有槲皮素,栎素、鞣质等。 .龙眼核酚类物质与氧自由基 ..氧自由基的产生及其对人体的损伤 自由基是指能独立存在的外轨道上含有个或个以上的未配对电子的原子、分 子、离子或者基团,是机体正常代谢的中间产物。人体内的自由基以氧自由基为主, 占%以上【。人体内的氧自由基包括超氧阴离子自由基。.、氢自由基.、 羟基自由基、过氧化氢、烷氧自由基?、单线态氧等。 氧自由基的来源主要有两个方面,一是由紫外线和宇宙射线的照射,环境污染, 以及农药等外界因素引发的自由基,这些称为“外源性自由基”。二是在新陈代谢过 程中,由人体内生化反应所产生的自由基称为“内源性自由基”。 机体组织中皆有自由基代谢的发生,但并未对肌体造成严重的损害,其原因是体 内存在着清除氧自由基的酶类和非酶类物质。主要包括超氧化物歧化酶、过氧 化氢酶和谷胱甘肽过氧化物歧化酶.以及维生素、辅酶、胡 萝卜素等非酶类物质,它们通过各自的途径维持机体内自由基产生和消除的动态平 衡。自由基的产生与清除动态平衡一旦被破坏,就会危害机体,产生疾病。氧自由基 几乎和人类的大部分常见疾病都有关系,如心血管疾病、癌症、艾滋病,人类的神经 系统疾病早年性痴呆症、震颤麻痹症、癫痫等,循环系统疾病动脉粥样硬化,血栓 等,以及肝炎、糖尿病、眼病等疾病以及高血压的发生、发展及并发症的形成过程?。 另外,氧自由基还与肺病‘、胃肠疾病、高血压、糖尿病等疾病有密切关系。 ..氧自由基清除剂 自由基清除剂指能清除自由基或能阻断自由基参与氧化反应的物质。自由基清除 剂可分为酶类清除剂和非酶类清除剂两大类。酶类清除剂~般为抗氧化酶,主要有超 氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化 酶.。非酶类自由基清除剂指一些天然抗氧化剂,如维生素、维生素、 茶多酚、黄酮类化合物等及一些人工合成抗氧化剂。 过去,一些人工合成的抗氧化剂如丁羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、 ,,.三羟基苯基丁酮、没食子酸丙酯等,被频繁用于食品,但 有研究表明,它们具有一定毒性和致癌作用。所以人们对人工合成抗氧化剂的使用产 广西大掌硕士掌位论文 .:中抗氧化活性物质的研究 生了怀疑和排斥一理,使得人工合成的抗氧化剂的使用受到了限制。 目前,天然抗氧化剂具有安全高、抗氧化能力强、无副作用、防腐保鲜等优点, 受到广泛的欢迎。近年来,研究人员已从各种天然材料如某些草本植物、香辛料、茶 叶、果蔬、油料种子、酶等物质中提取了多种天然抗氧化剂。 ..龙眼核酚类物质的抗氧化作用 水果味美多汁、营养丰富,深受大众喜爱。流行病学研究发现,水果的摄入量与 心脑血管疾病以及一些肿瘤如胃癌的发生率呈现负相关畔】。有研究表明,水果对 体内的活性氧及亚硝酸盐类具有一定的清除作用,对人类的防衰保健具有重要意义。 研究柑桔类水果时发现,这类水果能有效预防自内障的发生,由于自由 基的氧化损伤与上述疾病的发生有着密切关系,所以水果中、、类胡萝卜素等 对于预防上述疾病的发生有着重要的意义。但是对、、.胡萝卜素等抗氧化物 质进行补充干预实验,并没有取得令人满意的结果,可以推断水 果中还存在着 其它更重要的抗氧化物质。经过进一步研究发现水果的抗氧化活性不仅仅来自于我们 熟知的、等抗氧化物质,而主要是果实中其它一些微量的、抗氧化能力比、 强许多的次生代谢物质在起作用。水果除了直接清除自由基外,对体内一些抗氧 化酶的活性也有一定的影响引。 酚类物质是植物体内一类重要的次生代谢物质,在植物体内种类繁多。果实中的 酚类物质主要有简单酚酸类、苯丙烷类,类黄酮类和多聚酚类。简单酚酸类物质主要 有对羟基苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸等;苯丙烷类主要有肉桂酸、咖啡酸、对香豆 酸、阿魏酸、绿原酸等;类黄酮类又分为黄酮类白杨黄素、洋芹素等、黄酮醇类 山奈素、槲皮素、杨梅黄素等、黄烷醇类儿茶素、表儿茶素等、黄烷酮类黄 杉素等和花青素类矢车菊色素、二甲花翠素等。多聚酚类主要包括单宁和木质 素,单宁分为由单糖与没食子酸及其衍生物形成的可水解单宁和由黄烷一醇类单体 缩合而成缩合单宁。缩合单宁又叫原花色素。 近年来对多种酚类物质在人体内生物活性的研究表明,它们具有抗氧化、清除自 由基、抑制肿瘤、抗诱变、降低毛细血管通透性、改善人体微循环等多种药理作用, 且具有高效、低毒、高生物利用率的特点【踟,如原花青素体内抗氧化能力是 的倍,倍。为此,富含酚类物质的植物资源益受到广泛关注【】。在西方国 家增加饮食中富含酚类物质的果蔬比例成为预防疾病和公众保健的重要途径之一【,广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氢化活性物质的研究 另一方面酚类物质开始应用于食品、保健品、医药及化妆品领域。欧、美、日等国以 葡萄籽、银杏等富含酚类物质的植物资源为原料,己研发出多种相关药品、保健品和 化妆品【。目前,我国学者也开始关注葡萄、茶叶中的多酚类物质【,市场上出现 了以绿茶、葡萄等为原料基于酚类物质生物活性的化妆品。 .报道, 龙眼核中含有丰富的多酚类物质据.和 其抗氧化活性仅次于芒果核,且龙眼核抗氧化活性与其多酚含量 呈正相关性。含龙眼 在内的大部分水果中,超过%的抗氧化活性和多酚含量来源于该水果的种子。 等吲的研究表明,龙眼核中含有丰富的抗氧化活性成分,具有很强的 抗氧化活性,其&值仅次于葡萄籽。王志远等研究得出了龙眼核中多酚提取的 最佳工艺条件:丙酮浓度%、料液比:、浸提温度,提取率达..干 重;并利用清除自由基和 评价了 多酚的抗氧化能力,结果得出龙眼核多酚具有较强的抗氧化能力,并且抗氧化能力与 多酚含量成一定得量效关系。黄儒强【等利用大孔吸附树脂分离了龙眼核中的抗氧化 活性物质,结果表明,大孔树脂型号对龙眼核中抗氧化活性物质的吸附性能 较好,分离的优化条件为:流速?、值.,洗脱剂为%乙醇溶液,洗脱 样的抗氧化活性较高为?~。另外,利用分析了龙眼核%醇提取物 的乙酸乙酯萃取物中的挥发性组分,一共分离鉴定出了个组分。黎海妮等【删采用 超声波浸提法提取龙眼核中黄酮类物质,并对黄酮类物质进行定性和定量实验,实验 表明龙眼核中含有较为丰富的黄酮。 .植物多酚的研究 ..植物多酚的提取方法 植物多酚又名植物单宁,是一类广泛存在于植物体内的植物次生代谢物质,具有 多元酚结构。主要存在于植物皮、根、叶、果中,在植物中的含量仅次于纤维素、半 纤维素和木质素。植物多酚种类繁多,均以混合形式存在,在植物体内通常与蛋白质、 多糖以氢键和疏水键形式形成稳定的分予复合物,对分子量大、羟基酸多的植物多酚 尤为突出。目前,常根据不同植物的结构及分子量,利用溶剂法、络合沉淀法等进行 分离。 溶剂浸提法 溶剂浸提法是传统的植物多酚提取法,过程比较简单。常用水、甲醇水溶液、乙 广西大掌硕士学位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 醇水溶液、丙酮水溶液、乙酸乙酯等溶剂提取,利用相似相溶原理将植物多酚提取出 来。 盐析法 在水溶液中加入无机盐饱和时,可降低某些物质溶解度,使其沉 淀析出。纯化植 物酚的工艺为:植物多酚粗提液一盐析一过滤滤液乙酸乙酯萃取回收一浓缩 ?干燥一成品。 超声波浸提法 天然植物有效成分大多存在于细胞壁中,细胞壁是植物细胞有效成分提取的主要 障碍。超声波技术是利用超声波具有的机械效应、空化效应及热效应,加强了胞内物 质的释放、扩散和溶解,加速了有效成分的浸出。传统工艺的浸提时间较长,在温度 较高的情况下植物多酚还容易发生氧化,造成品质降低。超声波浸提所需时问短,避 免了长时间处于高温下的氧化,从而使得率和产品质量都得以提高。 微波浸提法 微波提取技术是利用微波能来提高提取率的一种新的技术。微波提取过程中,微 波辐射导致植物细胞内的极性物质吸收微波能,产生大量热量,使细胞内温度迅速上 升,液态水汽化所产生的压力在细胞膜和细胞壁上形成微小空洞,使胞外溶剂容易进 入细胞内,溶解并释放出胞内物质。利用微波辅助浸提,节约能源,减少了多酚在高 温下的氧化时间,提高了产品的品质和得率。与传统的索氏提取和临界二氧化碳萃取 相比,具有提取时间短,提取率高,成本低,投资少等优点。可以说,微波提取在植 物多酚的提取工艺中具有广阔的应用前景。 生物酶解提取法 生物酶解提取技术是根据酶反应具有高度专一性的特点,选择相应的酶,水解或 降解细胞壁组成成分:纤维素、半纤维素和果胶,从而破坏细胞壁结构,使细胞内的 成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中,达到提取目的。 树脂吸附分离法 利用树脂能对植物多酚发生吸附和解吸作用的特性来实现多酚与其它浸提物组 分之间的分离。根据树脂类型的不同可分为吸附柱分离法、离子交换柱分离法和凝胶 柱分离法。这三种方法原理相同,只是操作方法上存在差异。 超临界流体萃取法 该方法以超临界流体,作为萃取剂,利用其兼有液体和气体 广西大掌硕士掌位‘娩文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 双重性质的特点,通过控制温度和压力进行选择性萃取分离的新技术。目前常用的萃 取剂为二氧化碳。由于二氧化碳无毒,对产品没有毒,特别适合于医药、食品添加剂 等产品的提取。其优点是超临界流体萃取过程中植物多酚不被氧化,所得产品纯度很 高,粗品只要经过简单精制即可得到%以上的植物多酚,这是其它工艺不能达到的 ..植物多酚含量的测定 植物多酚的测定可分为植物多酚总量和植物多酚各种组分的分别测定。其中总量 的测定方法主要有:高锰酸钾氧化法、分光光度法等。各种组分分别测定的方法有: 薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法、质谱联用等。 . 高锰酸钾氧化法 此法是~种传统的测定方法,很具有代表性。缺点是选择性不高,但方法简便易 行,所以被广泛使用。 分光光度法 利用植物多酚的显色反应,操作简便,应用广泛。有酒石酸亚铁比色法、 .试剂法和.剂法等方法。.剂在很大范围内能 与多酚类化合物反应,选择没食子酸作为标样从而获得多酚的含量,此方法结果准确 可靠,简便易行。 薄层扫描法 薄层扫描法是世纪年代后期发展起来的一种常用的色谱分析方法。该法操 作简便、快速、不需要贵重的仪器设备、杂质对色谱系统的干扰小、分析成本较低,是 测定酚酸化合物常用的方法。但是该方法分离效果差,故不适用于复杂体系。 高效液相色谱法 高效液相色谱法简称又称高压或高速相色谱法,于世纪年代后,在 液相色谱一柱色谱的基础上加以改进而发展起来的新型高效分离分析技术。目前, 的分析对象包括高沸点、不易挥发、受分解、分子量较大、不同极性的有机化 合物、生物活性物质、有机和无机离子化合物等。对于酚酸类化合物含量较低的复杂 体系,采用高效液相色谱.电化学物检测联用技术可以取得较好的灵敏度和准确性, 如结合柱前衍生技术还可以将扩展到对非电活性物质领域的检测。 气相色谱法广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 气相色谱法是英国生物化学家等人在液液分配色谱的基础上,于年 创立的一种极为有效的分离方法,可以分离、分析复杂的多组分混合物。高效能的色 谱柱、高灵敏度的检测器以及计算机处理技术,使其在食品工业、生物技术、农副产 品等领域都得到了广泛的应用。由于酚酸的沸点高,采用法测定需要衍生化,程 序繁琐,因此相关报道较少。 质谱联用 质谱技术具有高灵敏度、高选择性以及可进行多种元素的同时测定和在线分析等 优点,是一种与分离技术联用的重要分析手段。目前,气相色谱.质谱.方法 也用来分衍生化的儿茶素类化合物,主要是研究和的分离。液相色谱与 质谱联用.使色谱对复杂基体化合物的高分辨能力与质谱独特的选择性、灵敏 度、分子量及结构信息相结合,具有广泛的应用领域,在植物多酚的研究方面也有报 道。】等提出../,通过两串联来鉴定植物多酚的结构, 与氢核磁共振谱相比较,得到满意的结果。 .本课题研究的意义 龙眼原产于我国南部和越南北部的南亚热带区域,是重要的南亚热带常绿长寿果 树,为四大岭南佳果之一。我国龙眼栽培面积和产量均居世界首位,主要分布在我国 福建、广东、广西及台湾等省为主要产区,种植面积超过万公顷,龙艮肉年产量 在万吨以上,年产值近亿元,属我国南方地区主要的经济作物。目前,我国 龙眼仍以鲜果销售为主,但由于保鲜等技术跟不上,造成产品滞销甚至浪费;加工产 品形式主要有龙眼干、桂圆和龙眼浸膏等,产品附加值低,国际竞争力不高】。而龙 眼核的重量占龙眼果实鲜重的%,由于没有进行综合利用,每年废弃的龙眼核重量 达几十万吨,造成环境污染和资源的极度浪费。 龙眼核的研究主要是基本成分,龙眼多糖提取,龙眼棕色素性质,总黄酮的提取 等方面的研究,龙眼核中的抗氧化物质的分离和纯化研究较少。因此,开发高附加值 的龙眼产品,扩大龙眼系列深加工产品,这对提高龙眼产业的经济效益、推动亚热带 水果的可持续发展具有重要意义。 本课题针对广西丰富的龙眼资源,以三个主要的品种为研究对象,对龙眼核中基 本成分和抗氧化物质进行研究,目的为龙眼核的深加工提供理论指导。龙眼核中抗氧化活性物质的研究 广西大掌硕士掌位论文 .本课题研究的内容 、三个品种龙眼核基本成分的分析:对龙眼核的蛋白质、还原糖、总糖、淀粉、 黄酮和总酚含量等进行测定。 、龙眼核中抗氧化活性物质的提取工艺的研究:采用正交实验,对龙眼核中抗 氧化活性物质的提取工艺进行优化。 、龙眼核中抗氧化活性成分的分离研究:通过.大孑树脂和聚酰胺树脂对 龙眼核提取物进行分离。利用清除自由基能力,包括清除羟基自由基?能力和清 除二苯基苦基苯肼自由基?能力,进行抗氧化能力评价。 、对分离的龙眼核抗氧化物初步鉴定其组分。龙眼核中抗氧化活性物质的研究 第二章龙眼核的基本成分的研究 肖更生和刘释文等对龙眼核的营养成分进行研究,表明龙眼核含有丰富的淀粉, 蛋白质,还原糖等,但不同的产地,不同的采摘时间,龙眼核的成分会存在差异,因 此本章对广西的主要的品种石硖、大乌圆、储良龙眼核基本成分、活性物质含量 进行研究,为龙眼核中的抗氧化物质研究提供参考依据。 .材料与方法 ..实验材料 市售的广西的龙眼品种:石硖、大乌圆、储良购于广西南宁市五罩亭蔬菜批发市 场。 ..实验试剂 芦丁中国药品生物制品鉴定所、无水乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠、硫酸、无 水乙醚、盐酸、乙酸铅、硫酸钠、硫酸亚铁、乙酸锌、磷酸二氢钾、硫酸钾、亚铁氰 化钾、酒石酸钾钠、乙酸钠、硼酸、高锰酸钾、硫酸铜、硝酸铝、碳酸钠、葡萄糖、 单宁酸均为分析纯。 甲基红溴甲酚绿混合指示剂:份甲基红乙醇溶液/与份溴甲酚绿 乙醇 溶液/临用时混合。 甲基红指示剂:的甲基红加无水乙醇稀释至。 福林.丹尼斯试剂:在磨口回流蒸馏器中加入钨酸钠、钼酸钠、 蒸馏水、%磷酸、%盐酸,冷凝回流,然后添硫酸锂和数 滴溴液,取下冷凝管,重新加热至沸,维持,驱去多余溴,冷却后补 足蒸馏水 至,用棕色试剂瓶装好,置于冰箱中长期冷藏备用,临用时稀释 倍。 ..实验仪器 常州国华电器有限公司 .型数显恒温水浴锅 梅特勒托利多仪器上海有限公司 型多电子天平. .型电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司 北京市医疗设备厂 安全分类类型电热恒温水浴锅 电子万用炉., 天津市泰斯特仪器有限公司 广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 .型电冰箱 广东科龙股份有限公司 紫外可见分光光度计 北京瑞利分析仪器公司 .型循环式水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 动植物粉碎机 广东省连南微型电机厂 .实验方法 ..原料的处理 将新鲜龙眼去皮去肉得龙眼核,在电热鼓风干燥箱丁燥后,用电 动植物 粉碎机粉碎,在干燥器中避光保存。 ..不同品种的龙眼核的蛋白质含量测定 龙眼核蛋白质含量的测定采用国家规定的方法,即/..食品 中 蛋白质的测定的第一法。 ...试样处理 称取龙眼核粉末.,移入干燥的定氮瓶中,加入.硫酸铜,硫 酸钾及硫酸,将消化管放入消化炉进行消化。待液体呈蓝绿色澄 清透明后,继 续加热.,取下放冷,小心加水,冷却后,移入的容量瓶中,加水定 容,备用。同时做试剂空白试验。 ...测定和结果计算 实验的测定以及结果计算与/.?食品中蛋白质的测定的第一法相 同。 ..不同品种的龙眼核还原糖含量测定 龙眼核中还原糖含量测定采用国家标准规定的方法,即/..食品中 还原糖的测定的第一法一直接滴定法。 ...试样处理 称取.龙眼核粉末于的容量瓶中,加入的水,在。水浴 并时时振摇,冷后定容,摇匀静置,取上清液于另一容量瓶中,慢慢 加入乙酸锌液及亚铁氰化钾液,定容混匀,沉淀,静置,过滤,弃 去初滤液,滤液备用。 ...测定和结果计算广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 实验的测定以及结果计算与/..食品中还原糖的测定的第一法一 直接滴定法相同。 ..不同品种的龙眼核总糖含量测定 龙眼核中总糖含量测定参考还原糖测定的国家标准,即/..食品中 还原糖的测定的第一法~直接滴定法。 ...试样处理 称.龙眼核粉末于容量瓶中,加水,在水浴锅中恒温水 浴,并时时振荡,冷却到室温后加水定容,取上清液于另一容量瓶 中,慢慢加入乙酸锌液及亚铁氰化钾液,定容混匀,静置,过滤弃 去初滤液。取的滤液于的容量瓶中,加入的盐酸,在 ?水浴锅中水浴,冷却到室温后,加入一滴甲基红指示剂,用氢氧 化钠溶液将 样液调至中性。加水定容至。 ...测定 将样液稀释倍,再按照/..中.、.和.操作。 ...结果计算×% 总糖量以转化糖计::互甄 聊×访×??× 式中: 一 碱性洒石酸铜溶液相当的转化糖质量,单位为: ?样品处理液总体积,单位为; 广测定时消耗样品水解液体积,单位为: 龙眼核粉末的质量,单位为。, ..不同品种龙眼核中淀粉含量测定 龙眼核中淀粉含量测定采用国家标准规定的方法,即/..食品中 淀 粉的测定的第二法一酸水解法。 ...试样处理 称取.样品于放有滤纸的漏斗中,用无水乙醚洗去试样中的脂肪, 弃去乙醚。 用%乙醇分数次洗涤残渣,除去可溶性糖类物质。滤干乙醇溶液,以 广西大学硕士掌位论文 龙目良核中抗氧化活性物质的研究 水洗涤漏斗中的残渣并转移至锥形瓶中,加入盐酸,接好冷凝 管于沸水浴中回流,回流完后用流动水冷却至室温,加入滴甲基红指示剂,以 氢氧化钠溶液调至黄色,再以赫酸校正至水解液刚变红为宜,用精密试 纸测试,使样液约为。加入乙酸锌液,混匀,放置,再加硫 酸钠以除去过多的铅,摇匀后将全部样液和残渣完全转入的容量瓶中,加水 定容,过滤弃去初滤液,滤液备用。 ...测定 测定时按照..中.、.和.操作。 ...结果计算 龙眼核中淀粉含量按下式进行计算。 :丝二丛兰:× . ×/× 式中: 一龙眼核中淀粉含量,单位为‖; 一测定用试样中水解液还原糖质量,单位为; 广试剂空白样中还原糖质量,单位为: 龙眼核粉末的质量,单位为; 一测定用试样水解液体积,单位为; 旺试样液总体积,单位为: .一还原糖以葡萄糖计折算成淀粉的换算系数。 ..不同品种龙眼核中灰分含量测定 三个品种龙眼核中灰分含量,参照国标/..。称取.龙眼核粉末 样品,放入坩埚中,先以小火加热使龙眼核粉末充分炭化至无烟, 然后置马弗炉中, 在。士?灼烧。冷至?以下后取出放入干燥器中冷却,在确保没 有炭粒后,准确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过.为恒 量。计算公式 为: :丝二丝× . 一,卵 式中: .一龙眼核粉末中灰分的含量,单位为‖;广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗车:活性物质的研究 一坩埚和灰分的质量,单位为; 一坩埚的质量,单位为; 厂坩埚和龙眼核粉末的质量,单位为。 ..不同品种龙眼核中水分含量测定 三个品种的龙眼核中水分含量的测定,参照国标..第一法,直接 干燥法。取洁净玻璃制的扁形称量瓶,置于?~?干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边, 加热.~.,取出盖好,置干燥器内冷却.,称量,并重复干燥至恒量。称取 .龙眼核粉末,放入此称量瓶中,试样厚度约为。加盖,精密称量后,置 ?~?干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,干燥~后,盖好取出,放入干燥器内冷 却.后称量。然后再放入?~?干燥箱干燥左右,取出,放在干燥器内 冷却.后再称量。至前后两次质量差不超过,即为恒量。龙眼核中水分的含 量按下式计算。 :??% . ‘ 朋一 式中: 一龙眼核粉末中水分的含量,%; 一称量瓶和龙眼核粉末的质量,单位为; 一称量瓶和龙眼核粉末干燥后的质量,单位为; 一称量瓶的质量,单位为。 ..龙眼核提取物中总黄酮和总酚含量的测定 ...龙眼核提取物的制备 准确称取三个品种的龙眼核粉末.,按:比例加入%的乙醇,于? ,过滤,滤渣在?水浴中再提取 ,合并两次滤液,滤液真空 水浴回流提取 浓缩后,用%的乙醇定容到 容量瓶中,得样品液备用。 ,. , ...标准曲线的绘制‘删:准确吸取芦丁标准液. ‖. . ,. ,. ,. ,. 于 容量瓶中,分别加入%亚 ,摇匀, 硝酸钠溶液. ,充分摇匀,静置,再加入%硝酸铝溶液. 静置 ,再加入%氢氧化钠溶液 ,最后用%乙醇定容到 ,摇匀, 静置 ,以零管为空白,于 处测吸光度,以芦丁浓度横坐标,吸光 度为 广西大掌硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 纵坐标绘制标准曲线,见图。所得回归方程:..,.。 . . . . . . / 图总黄酮的标准曲线 . 测定样品的黄酮含量:将一定量的样品液稀释倍后,准确吸取样 品液. , 置 容量瓶,按标准曲线的制备方法测定吸光度。根据回归方程,计算样品中 总黄酮的含量。 ...测定龙眼核提取物中多酚的含量 利用福林一丹尼斯法?比色法测定多酚含量,原理碱性溶液中酚类化 合物可将钨钼酸还原 ,生成蓝色化合物,颜色深浅与酚含量呈正相关, 在处有最大吸收。 标准曲线【】:准确称取单宁酸标准样.,用蒸馏水溶解,然后定容至 ,得浓度为./单宁酸溶液。再分别吸取,.,.,, ,,,上述单宁酸标准溶液,放入盛有水的容量瓶中, 加入福林.丹尼斯试剂.及饱和碳酸钠.,然后加水至刻度,充分混匀, 静置,然后以空白作参比,在波长处测定吸光度。以溶液中单宁 酸的毫克数为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,见图.,得到其标准回归方 程。总酚的标准曲线:...,.。线性回归范围:在~. 范围内,单宁酸含量与吸光度有很好的线性关系。 广西大掌硕士学位’沦文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 . . . 善. . . . . . . . . 图多酚的标准曲线 . 样液中多酚的含量测定:吸取龙眼核提取液,按标准曲线的制备 方法测定 吸光度。根据回归方程,计算样品中多酚含量。 ..统计分析 样品做三次平行试验,结果表示为平均值?标准偏差。 .结果和讨论 三个品种的龙眼核成分测定结果见表一。 表.龙眼核的成分分析干重淀粉 灰分 水分 总酚 总黄酮 品种 蛋白质 还原糖 总糖 / / ‖ 曲 / ‖ / ‖ .. .. .. .. .. .. .. 石硖.士. ?一包 .. .:. .. . . .:. .士. .. 八一.士. 圆 .. .士. .. .. .. .. 储良.士. .士.龙眼核中抗氧化活性匀质的研究 广西大掌硕士学位论文 由表.可以看出,龙眼核含有丰富的淀粉、总糖、还原糖,蛋白质含量也较高。 与刘释文脚等的测定结果存在一定差异,可能由于不同品种和不同产地造成的。三个 品种的龙眼核,除了灰分的含量,石硖龙眼核的蛋白质,还原糖,总糖,水分,淀粉 含量均高于大乌圆和储良,分别为蛋白质. ,还原糖./ / ,总糖 ./ ,水分./ ,淀粉./ 。除了灰分和淀粉,大乌圆的蛋白 质,还原糖,总糖和水分含量均高于储良。灰分含量储良最高为.‖ ,其次 是石硖,大乌圆含量最低。三个品种龙眼核总黄酮含量存在一定 差异,其中石硖总黄 酮含量最高,每 龙眼核含有. 总黄酮,大乌圆次之,储良总黄酮含量 最低。三个品种中总黄酮的含量均高于刘释文研究的福眼龙眼核的含量./。 三个品种的龙眼核总酚含量差异不显著。另外,据李升锋等【】的报道,龙眼核含有多 种矿物元素,主要为钾、钙、镁、磷等,同时还含有、等维生素以及多种人体 必须氨基酸,是开发保健食品的良好营养源。 .本章小结 、本章对广西的主要的品种石硖、大乌圆、储良龙眼核成分进行分析,研 究表明三种龙眼核含有丰富的淀粉、总糖、总酚、还原糖、蛋白质等,总黄酮含量也 较高。三个品种的龙眼核中淀粉含量最高,占干重的.%.%,总糖含量 .%~.%,还原糖的含量.%~.%,蛋白质含量.%.%,水分含 量.%.%,总酚含量.%.%,总黄酮含量.%~.%。可能由于 不同的产地,不同的采摘时间,使得本章研究龙眼核的基本成分与刘释文石『究的福建 “福眼”品种存在差异,同时龙眼核中还含有多种矿物元素、维 生素以及人体必须氨 基酸等营养素,是一种具有较大开发潜力的资源。 广西大掌硕士学位论文 龙眼核中抗氯化活性物质的研究 第三章龙眼核抗氧化活性物质提取实验 龙眼核中含有丰富的多酚类物质,据. 和 .疵【】报道, 其抗氧化活性仅次于芒果核,且龙眼核抗氧化活性与其多酚含量呈正相关性。本章以 总黄酮和总酚含量最高的石硖龙眼核为研究对象,对石硖龙眼核中抗氧化物质的提取 工艺进行优化,为龙眼核中抗氧化物质的提取提供理论基础。 .材料与方法 ..试验材料 ...原料 石硖龙眼,购于广西南宁市五罩亭蔬菜批发市场。 ...化学试剂 无水乙醇、正己烷、乙醚、乙酸乙脂,?阿法埃莎天津化学有限公司;, 菲哕啉上海三爱思试剂有限公司、双氧水、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸 亚铁等均为分析纯。 ...试验仪器及设备 型电热鼓风干燥箱 北京市医疗设备厂 .型真空旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 .循环水式多用真空泵 上海亚荣生化仪器厂 紫外可见分光光度计 北京瑞利分析仪器公司 上海第二分析仪器厂 精密电子天平.曲 真空冷冻干燥系统公司 ..试验方法 ...原料的处理 将新鲜龙眼去皮去肉得龙眼核,在电热鼓风干燥箱中?干燥后, 用电动植物 粉碎机粉碎,在干燥器中避光保存。实验以一个品种龙眼核一石 硖龙眼核做单因素的 提取实验。 ...龙眼核抗氧化物质提取单因素实验研究 ....不同溶剂对提取龙眼核抗氧化物质影响的研究 准确称取.龙眼核粉末份,分别用水、无水乙醇、正已烷、乙醚、 乙酸 广西大学硕士掌位论文 龙眼核中抗氧化活性物质的研究 乙脂作溶剂,料液比为:,水浴回流提取,提取完毕以后过滤,滤液 在 ?下浓缩至不多于,转入容量瓶中定容至刻度,测定提取液对.和 羟基自由基?的清除能力。 / 清除咱由基酐方法:用无水乙醇配制 .溶液,避 光保存备用。吸取 样液加入试管中,在加入 所配制的?溶液,混 合 均匀, 后在 /处测定其吸光值。取一试管加入 样液和 无水乙醇,在 ?溶液和 测定吸光值。再取一试管向其中加入 %乙醇,摇匀,并在 测定吸光值。按下式计算样液对?抑 制率。 ?, 一删制?一掣卜% ?溶液 样液的吸光度值: 其中: 样液 无水乙醇的吸光度值; . ?溶液 %乙醇的吸光度值。 ‰ . 清除。的方法:取试管分别加入 磷酸盐缓冲液., . /的邻二氮菲溶液,充分混匀后,加入 /溶液,立即混匀。 ,最后补充体积至 , 然后向其中加入样液 ,混匀,再加入.%的 于下保温 ,在 下的测吸光度。同时做损伤管和未损伤管,其中损 伤管 中依上述实验方法,不加入样液。未损伤管依上述实验方法,不加 入和样液。 按下式计算样液对?清除率。 . .清除率似等鲁×。% 其中::未损伤管的吸光度; :损伤管的吸光度; :加样品液并扣除样液后的吸光度。 ....不同乙醇浓度对龙眼核抗氧化物质提取影响的研究 准确称取.龙眼核粉末份,分别用水、%乙醇、%乙醇、%乙醇、 %乙醇、无水乙醇,料液比为:,。水浴回流提取,提取完毕以后过 滤,滤 液在。下浓缩至不多于,转入容量瓶中定容至刻度,按照....方 法测定提取液对?和羟基自由基?的清除能力。龙眼核中抗氧化活 性物质的研究 广西大学硕士掌位论文 ....回流时间对龙眼核抗氧化物质提取的研究 准确称取.龙眼核粉末份,用%醇作溶剂,料液比为:,水 浴回流分别提取、、、、,提取完毕以后过滤,滤液在?下浓缩至不 多于,转入容量瓶中定容至刻度,按照....方法测定提取液对 ?和羟基自由基?的清除能力。 ....料液比对龙眼核抗氧化物质提取影响的研究 准确称取.龙眼核粉末份,用%乙醇作溶剂,在料液比分别为:、: 、:、:的条件下,在?水浴回流,提取完毕以后过滤,滤液在 ?下浓缩至不多于,转入容量瓶中定容至刻度,按照....方法测 定 提取液对?和羟基自由基?的清除能力。 ....提取次数对龙眼核抗氧化物质提取影响的研究 准确称取.龙眼核粉末份,用%乙醇作溶剂,料液比为:,提取次 数分别为一次、二次、三次、四次的条件下,?水浴回流,提取完 毕以后过滤, 滤液在?下浓缩至不多于,转入容量瓶中定容至刻度,按照.... 方法测定提取液对?和羟基自由基的清除能力。 ....提取温度对龙眼核抗氧化物质提取影响的研究 称取.龙眼核粉末份,用%乙醇作溶剂,料液比为:,在提取温度 为分?、?、?、?回流提取,提取完毕以后过滤,滤液在。下浓 缩至不多于,转入容量瓶中定容至刻度,按照....方法测定提取液 对?和羟基自由基?的清除能力。 以上样品均做三次平行试验,结果表示为平均值?标准偏差。 .结果和讨论 ..不同有机溶剂的