植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定 摘要：目的  通过曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。方法  分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。结论  关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法 1  引言 植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。 在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。 白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。芹菜属伞形科植物， 富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。 2  材料与方法 2.1  植物体内可溶性糖含量的测定 2.1.1材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g） 2.1.2试剂 葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂 2.1.3仪器设备 分光光度计；天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研钵 2.1.4测定方法 样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g （或干样粉5～100 mg ），放入大试管中，加入15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 标准曲线制作：取6 支大试管，从0～5分别编号，按下加入各试剂。 试剂 管号 0 1 2 3 4 5 200ug/ml葡萄糖标准溶液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（ml） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（ug） 0 20 40 60 80 100               将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min，取出冷却，在620nm波长制标准曲线。 样品测定：取待测样品提取液1.0ml加蒽酮试剂5ml ，同以上操作显色测定光密度。重复3次。 结果计算： 可溶性糖含量（%）=从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/【测定用样品液的体积（ml）×样品重量（g）×106】×100 2.2  植物体内可溶性蛋白含量的测定 2.2.1材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g） 2.2.2试剂 标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg/的标准蛋白溶液; 90%乙醇；85%磷酸(W/V)；考马斯亮蓝G－250溶液 2.2.3仪器设备 分光光度计；量筒；研钵；烧杯；量瓶；移液管；具塞刻度试管；分析天平；恒温水浴； 2.2.4测定方法 0～100μg/ml标准曲线的制作：取六支试管，分别按下表数据配制0～100μg/ml血清白蛋白液1ml。准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G—250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min后，在595nm下比色，绘制标准曲线。 管号 1 2 3 4 5 6 100μg/ml牛血清蛋白量（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水量（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蛋白质含量 （μg） 0 20 40 60 80 100               样品提取液中蛋白质浓度的测定：吸取样品提取液1.0ml，放入具塞试管中(每个样品设置两个重复)，加入5Ml考马斯亮蓝G－250溶液，充分混合，放置  2min后在595nm下比色，记录吸光值，并通过标准曲线查得蛋白质含量。 结果计算： 样品蛋白质含量(mg/g鲜重）=(C*V/a)/W 式中C－查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）； V－提取液总体积（ml）； a－测定所取提取液体积（ml）； W－取样量（g）。 3    结果分析 3.1  植物体内可溶性糖含量的测定 3.1.1可溶性糖标准曲线 表一：各试管中标准葡萄糖的吸光值 管号 0 1 2 3 4 5 葡萄糖含量（ug） 0 40 80 120 160 200 吸光度 0 0.195 0.370 0.518 0.690 0.706               3.1.2芹菜、白菜、菠菜中可溶性糖的吸光值 吸光值 样品名称 芹菜 白菜 菠菜 A1 0.358 0.347 0.333 A2 0.361 0.352 0.327 A3 0.367 0.351 0.327 平均值 0.362 0.350 0.329         对照标准曲线，可以得出：在1g蔬菜样品中移取的1ml样品溶液中，芹菜样品溶液含糖量为80.930μg；白菜样品溶液的含糖量为78.139μg；菠菜样品溶液的含糖量为73.256μg。 3.1.3可溶性糖含量计算 样品含糖量=样品含量（ug）*稀释倍数*100/{样品重（g）*106}g/100g鲜重 样品 质量/g 吸光值 查表所得含糖量/μg 稀释倍数 可溶性糖含量/μg 芹菜 1.00 0.362 80.830 100 0.8083 白菜 1.00 0.350 78.139 100 0.7813 菠菜 1.00 0.329 73.256 100 0.7325             由表可知：芹菜中可溶性糖含量最高，白菜中含量居中，菠菜中可溶性糖含量最低。 3.2  植物体内可溶性蛋白含量测定 3.2.1 可溶性蛋白标准曲线  表1 各试管中标准蛋白质的吸光值  管号 0 1 2 3 4 5 蛋白质含量(ug) 0 20 40 60 80 100 吸光度 0 0.286 0.578 0.852 0.921 1.250               3.2.2芹菜、白菜、菠菜中可溶性蛋白的吸光值 吸光值 样品名称 芹菜 白菜 菠菜 A1 0.095 0.122 0.085 A2 0.102 0.125 0.081 A3 0.097 0.128 0.080 平均值 0.098 0.125 0.082         照标准曲线，可以得出：在1g蔬菜样品中移取的1ml样品溶液中，芹菜样品溶液含蛋白量为4.619μg；白菜样品溶液的含蛋白量为6.761μg；菠菜样品溶液的含蛋白量为3.349μg。 3.2.3可溶性蛋白计算 C——查标准曲线值， ug VT——提取液总体积， ml Vs——测样时加样量，ml WF——样品鲜重，g 样品 蛋白质含量C(ug) 提取液总体积 VT（ml） 测样时加样量 Vs（ml） 样品鲜重 WF（g） 样品中蛋白质含量（mg/g） 芹菜 4.619 5.0 1.0 1.0 0.023 白菜 6.761 5.0 1.0 1.0 0.034 菠菜 3.349 50. 1.0 1.0 0.016             由表可知：白菜中可溶性糖含量最高，芹菜中含量居中，菠菜中可溶性糖含量最低。 4  讨论 通过实验对芹菜、白菜和菠菜体内的可溶性糖和可溶性蛋白的含量进行了测定，了解植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量有利于我们更清楚地了解各种植物，同时通过实验也让我们更加清楚地了解了植物体内可溶性糖和可溶性蛋白在植物生长中的作用。 可溶性糖是植物植物生长发育和基因表达的重要调节因子，它不仅是能量来源和结构物质，而且在信号传导中具有类似激素的初级信使作用。它的主要作用有以下几点：参与植物体内渗透压调节，在干旱环境中植物为了减缓由胁迫造成的生理代谢不平衡，细胞大量积累一些小分子有机化合物，可溶性糖就是这些小分子有机化合物之一，它通过渗透调节来降低水势，维持较高渗透压，保证细胞的正常生理功能；糖类能够以类似植物激素的方式作为一种信号分子存在，在植物的生长、发育、成熟核素哀牢等许多过程中发挥调控作用在种子萌发和种苗发育早期糖类可以调控植物的花转变，并且对植物花转变的调控具有多重效应，糖信号还可以调控叶片的衰老等；糖与植物氮调节之间存在代谢关系，而且不同的糖信号和氮信号转导途径可以在不同水平上相互响应等 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标；在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度，这就需要测定蛋白质含量。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。 参考文献 [1] 基础生物化学实验（第二版）北京 高等教育出版社 [2] 何照范.张迪青 保健食品化学及其检测技术 1998 [3] 刘魁英 食品研究与数据分析 1998  [4] 李娟.耀庭.曾伟.罗璇.廖长春 应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量2000年第13卷第2期 [5] 文赤夫.董爱文.李国章.雷姝.雷勇 蒽酮比色法测定紫花地丁中总糖及还原糖含量 [期刊论    文] -现代食品科技2005(3) [6] 赵江涛.李晓峰.李航.徐睿忞 可溶性糖早高等植物带些调节中的生理作用 2006 学生设计性实验论文 题目：植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定 姓名魏会会        学号2012132119 专业生物技术      班级123班 相关实验课程名称 基础生物化学实验 指导老师    单树花 实验学期2013~2014学年第二学期 继续阅读