血小板残留白细胞不同计数方法的比较

血小板残留白细胞不同计数的比较 中国输血杂志2007年8月第20卷第4期 ChinJBloodTransfusion,August,2007,Vo1.20,No.4 证临床输血反应的减少.但其不足之处是价格较高. 参考文献 [1]Mu11er-steinhardtM,JanetzkoK,KirchnerH,eta1. Effectofwholebloodpreparationandleukocytefiltrationon storageoferythrocyteconcentratesover42days[J].Beitr 1nfusionstherTransfusionsmed.1997,34(1):53—57 [2]ShinarE,ProberG.YahalomV,eta1.WBCfiltrationof wholebloodafterprolongedstorageatambienttemperature byuseofaninlinefiltercollectionsystem[J].Transfusion, 2002.42(6):734—737 [3]WadhwaM,SeghatchianMJ,DilgerP.eta1.CytokinesinWBC reducedeopheresisPCsduringstorage:flcomparisonoftwo WBCreductionmethods[J].Transfusion.2000.40(9):1118 一 l1Z6 [4]MullerSM,SchlenkeP,WagnerT.eta1.Transfusionofplate— letconcentratesfrompooledbuffeycoats:comparisonofbe— sideVSprestorageleukofitration[J].TransfusionMed,2000. 10(1):59—65 [5]赵莉华,梁晓虎.张爱红,等.国产白细胞滤器过滤血液质量考 察比较[J].中国输血杂志.2006,19(1):54—55 [6]梁文华.孙波,王群.等.国产一次性去白细胞采血袋的应用评 价[J].中国输血杂志.2006.19(3):226—227 [7]傅雪梅.陈颜,文远蓉,等.3种滤器制备少白细胞悬浮红细胞 的随机对照研究[J].中国输血杂志.2006.19(1):43—45 (2006—12—04收稿,2007—05—30修回) 本文编辑:蔡辉尚云 血小板残留白细胞不同计数方法的比较 方敏王明元(苏卅I市红十字中心血站,江苏苏卅I215006) ? 实验研究? 摘要:目的比较用于测定机采血小板中微量白细胞的流式细胞仪测定法(FC) 和Nageotte测定法(NC) 方法用已知白细胞数目的血小板标本测定两种方法的最低检测值.结果FC和NC 的最低检测值分别为0.1和 1WBC/~1.>1WBC//,1时,FC和NC检测变化较小,而在0.1—1WBC/~1只有FC 检测变化较小.结论FC检测 是一种更有效,准确,稳定的方法,但还需要进一步改进. 关键词:血小板;白细胞残留量;白细胞计数;流式细胞仪 中图分类号:R331.14R457.1文献标识码:A 近年来研究表明,输注含白细胞的血液可以引起很多并 发症.现代输血要求将白细胞去除.以保证用血安全.近年 来已有越来越多经各种方法去除白细胞的血液成分应用于 临床.血液成分中自细胞的去除既要求有效地清除白细胞. 又能保证有效成分的回收.如何准确测定去除白细胞后血 液成分中残留白细胞含量是质量评估的关键.当白细胞 100WBC/>I时,自动血细胞计数仪计数和牛鲍氏计数板测 定误差很大.目前微量白细胞检测采用的方法主要包括FC 和NC两种.我们比较分析了FC和NC检测血小板中自细 胞残留量,旨在确定两种方法的最低检测值以及比较两种方 法的优缺点. 1材料与方法 1.1标本制备已知白细胞数目的血小板标本制备方法参 照文献[1]. 1.2试剂与仪器流式细胞仪(EPICS-XL型.美国Beck— man-Coulter);Nageotte计数板(美国HausserScientific公 司);CH20生物光学显微镜(日本Olympus公司);血细胞分 离机(MCS+.美国血液技术公司);含有PI,RNA酶,穿孔 文章编号:1004—549X(2007)O4—0311-02 剂的混合液(LeucoC()UNT试剂,BD公司). 1.3流式细胞仪计数法取血小板标本700~1加入装有已 知数目荧光微球的试管中,再加入含有PI,RNA酶,穿孔剂 的混合液300~1,室温暗处孵育5min,上机检测.在FL1/ FL3散点图中设定wBC和荧光微球门,收集10.000个荧光 微球,按计算出每微升标本中自细胞的数量(cell/~1), cell/~1=(FCM收集的微球数R2/荧光微球数R1)×(管中 已知荧光微球数/样本体积).见图1. 1.4Nageotte计数板计数法取1份样本(100~1)加入9 份(90Ora1)白细胞稀释液混合.静置lOmin;吸取混合液滴入 Nageotte血细胞计数板中,室温沉降15min;显微镜下(× 200).计数1个满格子(51)上的白细胞,当样品按1:10倍 稀释时,白细胞浓度/l一(WBCs计数×稀释倍数)/计数体 积(计数1个满格子,计数体积为5Ol;计数2个满格子,计 数体积为100~1).每份标本测定3次,取其平均值. 2结果 白细胞数目<0.1WBC/~I,FC和NC2种方法结果均 远远偏离预测值;FC和NC的最低检测值分别为0.1和 ? 312?中国输血杂志2007年8月第20卷第4期 ChinJBloodTransfusion,August,2007,Vo1.2O,No.4 IWBC/~I.>1WBC/~1时,FC和NC检测变化较小,而在 0.1一IWBC/>1只有FC检测变化较tb(图2). l000 i:: l貂 垂i'? 跗 0.3 : 2:A 图1设定WBC和荧光微球门 3讨论 0.11.010.0100.01000.0 白细胞预期值(WBC/I~1) IFc—HI lFC— LO 0FC—MEDIA ;Nc—HI 上NC—LO aNC—MEDIA 图22种方法检测值(中位数和范围) 输注含白细胞的血液成分可以引起很多并发症,由于血 小板制剂中混入的一定量白细胞是导致以上并发症的主要 原因,因此去除血小板制剂中的白细胞,可有效地减少输注 无效的发生,同种免疫,发热等输血反应[2】.目前少白细胞 机采血小板已越来越多地应用于临床,而其残留白细胞数量 <5×1O./袋,这个水平接近于血液成分中(1O一30)wBCs/ l,这要求有相应准确,稳定的检测方法,以保证对血液成分 进行正确质量控制. 目前国内检测血液成分中微量白细胞方法为FC和 NC.本实验表明FC和NC的最低检测值分别为0.1和 IWBC/~I;>IWBC/vl时,FC和NC检测变化较小,而在0. 1一IWBC/v1只有FC检测变化较小.Dzik等[3】在多中心研 究中也发现当血小板wBC>5/~,1时.检测结果NC室问Cv <2O%而FC>30%,FC检测精确度也>NC,NC检测结果 与预测结果相比有计数过低的偏差.同时NC的手工操作 的方法除了费时之外,还会受到主观因素以及操作者个人实 验经验的影响.不利于进行质量监控.这些都表明FC检测 是一种更有效,准确,稳定的方法.但FC也有其缺点,即要 求有流式细胞仪这样的大型设备,同时检测试剂也相当昂 贵.对FC方法加以改进将有利于Fc在微量白细胞检测上 的推广应用.Cassens等[]研究表明,改进后的FC法能在 2min内完成,费用少于1欧元. 参考文献 [1]BacktemanK,LedentE,BerlinG,eta1.Arapidandreliable flowcytometricroutinemethodforcountingleucocytesinleu- cocyte—depletedplateletconcentrates[J].VoxSang,2002,83 (1):29—34 [2]HigginsVL.Leukocyte-reducedbloodcomponents:patient benefitsandpracticalapplicationstJ].OncolNursForum, 1996,23(4):659—667 [33DzikS,MoroffG,DumontforL.Amulticenterstudyevalu— atingthreemethodsforcountingresidua1WBCsinWBC—re— ducedbloodcomponents;Nageottehemocytometry,flowcy— tometry,andmicrofluorometry[J].Transfusion,2000,40(5): 513,520 [4]CassensU,GreveB,TapernonK,eta1.Anoveltruevolu— metricmethodforthedeterminationofresidua11eucocytesin bloodcomponents[J].VoxSang,2002,82(4):198 (2006—09—18收稿,2007—05—30修回) 本文编辑尚云刘晓明 敬告作者 为了使广大作者,审稿者投稿审稿更迅速,便捷,同时使本刊稿件采编过程实现全程信息化.网络化运作与管理,《中国输 血杂志》编辑部已从2007年5月1日起正式启用网上投稿采编系统.编辑部已不再接受纸质稿件.投稿请登录本刊网站: www.CJBT.CN(注意本系统仅支持InternetExplorer),按相应链接注册.上传稿件并获得稿件号后,请将投稿介绍信及审 稿费3O元寄至编辑部(须标明稿件号).感谢您的支持与合作! 中国输血杂志编辑部