·60· 湖北中医杂志 2008年第30卷第3期
益母草鲜汁对皮肤黑色素抑制作用的实验研究
王理呜
(湖北中医学院,湖北武汉430065)
关键词:益母革鲜汁;黑素瘤细胞;酪氨酸酶;药理学研究
中图分类号:R285.是 文献标识码:A 文章编号:1000-0704(2008)03-0060一02
酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的主要限速酶。其活力
可控制黑索生成量¨-2】。它不仅决定黑素合成的速率。还
是黑素细胞成熟的特征性标志H“】。益母草虽为妇科良药,
但在美容方面的功效也早有记载。笔者选择益母草鲜汁进
行实验研究,以验证其对皮肤黑色素的抑制作用。
1
1.1 实验材料及设备
自制益母草鲜汁(4mg/m1)。B—16黑察瘤细胞株,
由武汉大学细胞库提供。
主要试剂有:RPMll640(美国cmco);TYPSIN(胰
蛋白酶)(美国SIGMA);小牛血清(北郊农场);噻唑蓝
(美国SIGMA);二甲基亚砜(北京北化精细化学公司);L
一多巴,蘑菇酪氨酸酶(Sigma公司产品);其他试剂均为
市售
纯。
主要设备有:高速低温离心机(美国SIGMA);净化
工作台(天津);酶标仪(美国B10RADmodel560);C02
恒温孵育箱(法国JousJl);倒置显微镜(Nikon);UV一
2401分光光度计(日本岛津);AE240电子分析天平(梅
特勒一托利多仪器有限公司)。
1.2试剂制剂及药物剂量
1.2.1RPMll640培养基:用双蒸水配制,按200∥ml和
100∥m1分别加入青霉紊及链霉素,充入CO:调节pH值
至7.2—7.4,0.22tun微膜孔过滤。分装,4T:贮存。
1.2.20.25%胰蛋白酶:用pH7.6无血清1640配制,
’0.22p,m微膜孔过滤。
1.2.3Mar液:37℃水浴中溶解于0.01ml/L。pH值7.4
的PBS,浓度为5mg/ml,0.22斗m微膜孔过滤,置棕色小
瓶中,4℃保存。
1.2.4药物计量换算,益母草鲜汁6.659/ml。高剂量:相
当于生药33mg/ml;中剂量:相当于生药的3.3mg/ml;低
剂量:相当于生药的0.33mg/'nd。
1.3 B一16黑素瘤细胞椿的培养H“】
B—16黑素瘤细胞株由武大细胞库提供(CCTCC)的
原代细胞株用0.25%胰蛋白酶消化2rain。然后加入
RPMl640培养基,用吸管反复吹打,分别加入卡氏培养瓶
置PCS一100电脑C细胞培养传代培养,一般2—3天传一
代,细胞汇合作以后制备成细胞悬液备用。
1.4.Mar法检测B—16细胞株的生长抑制率
1.4.1检测原理:活细胞的线粒体中琥珀胶氢酶能使外源
性的Mar还原为难容的蓝色结晶物,而死细胞无此功能,
DMSO(二甲基亚砜)能溶解细胞中的紫色结晶物,用酶
联免疫检测在490rim波长外测空吸收值,可间接地反映活
细胞数量。
1.4.2检测步骤:①0.25%胰酶消化培养的B一16细胞
株,将10%CSTRPMll640常规培养基配成的细胞悬液以7
×10’个/孔种入96孔板(长满时约有105个细胞)培养
板周边的孔不加人细胞,防止有边缘效应,另留空白孔调
零。以只加细胞不加中药作空白对照。⑦待细胞贴壁后,
分别加入含中药33mg/'ml(30∥孔)3孔,3.3m∥ml
(30td/孔)3孔和0.33mg/ml(30t,,J/孔)3孔,培养基培
养48h后弃培养基。③吸弃旧液。加PBS洗1次,加入
Mar溶液20ml,37℃,5%co,继续培养4h,终止培养。
④吸净孔内培养液弃之,加入DMSO100∥孔,振荡10rain,
使结晶充分溶解。⑤在酶联免疫检测仪上(490nm波长)测
定各孔吸光度OD值(OD值与活细胞成正比)。⑥根据
计算细胞生长抑制率:细胞生长抑制率=(空白对照组OD
值一实验组OD值)/空白对照组OD值X100%。
1.5酪氨酸酶活性测定p“’
1.5.1取pH6.8磷酸缓冲液2m1.分别加入0.075%L一多
巴反应液2ml与蘑菇酪氨酸酶2rid(200u)混合,25℃孵
育10min,置分光光度计上300—600m扫描,结果在
453nm处有最大吸收蜂。
1.5.2取益母草鲜汁2ml(4mg/m1),加入0.075%L一多
巴反应液2ml与蘑菇酪氨酸酶2ml(200u)混合,立即置
分光光度计于453nm处测吸收值。连续记录20min。得生
成物一时间曲线。以pH6.8磷酸缓冲液作为空白对照。A。
为pH6.8磷酸缓冲液作为待测液时的吸收度值,A誓为
(益母草鲜汁2ml+0.075%L一多巴反应液2ml4-蘑菇酪氨
酸酶2mO一(0.075%L二多巴反应液2ml+益母草鲜汁
2ml+pH6.8磷酸缓冲液2m0。
3实验结果
3.1益母革鲜汁对B—16细胞株抑制率的影响(见
1)
万方数据
2008年第30卷第3麓 潮寇孛豢杂恚 ·6l·
毒性中药的炮制
羞迎超,韩俊流
(湖爿l:省罗田县人民医院,湖北罗田438690)
关镶谲:毒性中筠;炮制;分类
中国分类号:R283.3 文献标识码:A 文鬃编号:1000一0704(2008)03-0061一02
中药之毒,其说自古即有兰:一日“凡药皆有毒也”,
。集毒药以供医攀”,此乃广义之毒,泛指一切药物;=日
8蓊叛治病,囡毒为能,掰灞毒,鞋气曝之偏奄”,就指药
物龙偏性;三翻。神农尝酉革⋯⋯一日而遇七十毒”。<神
农本摹经>将中药分成上、巾、下三熬,。下晶之药不可
久瑕”。劐专捂狻义之毒。瑗今入船所宵有毒中药鄹此。
毒性中药,本为医家龙招矢,虽具毒性,却熊疗痼治
覆,起沉拯垂。然。永能载舟,赛戆覆痔”,中药用之褥
当锈猿显其摄,不然赠为絮稚浅。所戳冁床应用中药强调
辨证配伍、合理炮制、严格控制用法用量。篡中合理炮制
去毒、降毒笼显重要。
、 吉入对子毒性中药魑耧酶研究。著述鼹多,积豢了率
富的经验。以陈嘉谟为代表的<炮制药歌>,虽经后世学
者豹掺歪补充、掺亚,仍存有许多不足之处。笔者试就毒
性孛药的斑镪原瑾迸符分类、探毒鼋,保证毒德中药盼瞌床
应用安全有所助益。
'毒性巾翡豹分类
稷据药物有效戚努等毒性戚分之闷的美系。可将有毒
囊'瓣器-16壤Jg橡捧囊辜戆影麓(i圭1)
与对照细胞缀比较,·P《O.001。
结果显示,箍母蕈鲜汁对B—16蒜索瘤细胞的增殖有
抑制作用。
3。2益母葶鲜冲时酪氨酸秘活蛀的影崎(霓表2)
囊2对爵蠹馥薅活性的影响 (i±·)
望型 。 堕些蹩堡
空白组 ’0。3981毒O。0841
勰母草鲜汴缀 o-2178毒o.0692‘
与空白组比较,·P≮o.001。
垂表2翔,豢母摹攀汾组与空自组魄较有蹇度囊著性
差异,表明益母筚鲜汁对酪氨酸酶有较好的抑箭作阁。
4讨论
现代医学美容舞究表爨,益母草所窘豹铜、锰、韬等
雾静微量元素。在抗衰防瘸、益颜美容、延年蕴寿上具有
显蒋的功效。益母草所含的_益母草碱、水苏碱、月桂酸及
油酸等物质,能促进皮肤掰陈代谢,使波获得到充分营养,
交褥涪自润泽,对皮获起瑟嶷好耱营养傺毽作蔼。
本实验也证嗳,签母荤鬓津霹挪镧繇氮激臻活毪稀熬
一16黑索瘤细胞的增殖。从而起猁消除面黑、面斑和益颜
美容的作糟。
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1收稿日期:2007一05—10编辑:郑晓屏l
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