实验一 MS培养基的配制

实验一MS培养基的配制一、实验目的了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。初步掌握培养基母液配制方法.二、实验原理植物材料培养要获得成功,并正常生长,培养基的成分是一个决定性因素,不同植物要求不同的培养基。大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液,置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。三、实验材料与器具1、用具器材　灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、ｐH试纸.　2、药品试剂　　　蒸馏水、1NHＣｌ、1NNaOH、9５%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品(分析纯)。四、实验步骤　　１、母液配制(１)配制１０倍１L　MＳ大量元素母液ＮH4NO３ 　１6.5g　　　KH２ＰO4　　　　1。7gKNO3　19g  　CaCl2·2H2Ｏ 4.４gMｇＳO4·7H2O 　３。7g配制成20０倍1　L母液，依次称取:ＫI　　　０.１66g　Nａ2ＭoO4·２Ｈ2O　0．０5ｇH3ＢO３　　1。24ｇ　CuSO4·5H2O ０．00５gMnSO４·４Ｈ2Ｏ 　4。46ｇ  ＣoCｌ２·6H2O 　　0。005　gZnSO4·7H2O 　1。72ｇ（２)配制ＭS微量元素母液配制成2００倍lＬ铁盐母液,依次称取:EDTA二钠（Ｎa２·EDＴA·7H2O)７.４６ｇ 　　FeSO４·７H2O  　5.56g(3)配制MS铁盐母液 　　配制成２00倍１L有机母液,依次称取:盐酸硫胺素(VB1) 　　0。０2ｇ烟酸   　　0．1g  盐酸吡哆醇(VB6)  ０。１g(4)配制MＳ有机母液①(5)配制ＭS有机母液②配制成２０0倍1L有机母液:肌醇   　　20。0　g (６)配制ＭS有机母液③配制成20０倍1L有机母液：甘氨酸   0.4　ｇ 　　0.1ｍｇ/mL　的6-ＢA溶液:取2５ｍg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mLNＡA：取２5mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量１N的NaOH溶解后,再加水定容至２50ｍL。0。１mg／mL　2,4－D：取20mg的2，４－Ｄ溶于少量95%乙醇中,再加水定容至２00mL。(7）植物激素的配制　2、培养基的配制（以1L培养基为例）1、计量　根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需要吸取母液的量,计算公式:吸取量　mL=培养基中物质浓度（mg/L)×1000mL/母液浓度(ｍg／L）。　母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数２、移液取大烧杯(1Ｌ）一只,按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于烧杯中备用。3、称取　称取１0g琼脂，３0ｇ蔗糖备用.4、融化　用搪瓷量杯量取600~7００ｍL的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状将其取下,加入蔗糖，搅拌使之溶解。5、混合　将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中,充分混合,用蒸馏水定容到１0０0mＬ。6、调ｐＨ　用滴管吸取物质的量浓度为１moｌ／L的NaＯH或ＨCｌ溶液调pH　为６.0。编号6-ＢA（mg／l)ＮＡＡ(mg／ｌ)2,４—D（ｍg/ｌ)第一组0。50.１１.0第二组0。5０.52.0第三组0.５０。050第四组1.00。10共分4组,每组配7５0mL培养基,每瓶倒２5—30mＬ,共接种28瓶左右每瓶编号１(1/2／3/4)n号分组情况3、培养基的分装和灭菌溶化的培养基应该趁热分装.分装时,将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中,每瓶约２5　mL　-３０　mL。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并编号.灭菌:1２1℃,１５－20　min。五、注意事项　　　　　配制铁盐母液时,ＦｅS0４和Nａ2EDTA应分别加热溶解后混合,并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热20 — 30 min),调pH值至５。５,防止ＦeS0４结晶析出。六、作业与思考1.植物培养基为什么要分成母液分开配制。