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【摘 要】 背景与目的:胰腺癌早期诊断困难,常用的肿瘤标记物如 $%&"’",虽敏
感度较高但特异性较差,胰腺癌中常有 (’)*+基因的突变,而且特异性较高,我们通
过检测血清 ,-%中 (’)*+基因的突变以及测定血清 $%&"’"的含量,以探讨两者联
合检测在胰腺癌诊断中的临床意义。方法:取 ." 例胰腺癌患者的血清,抽提 ,-%,
采用突变富集聚合酶链反应 ’ 限制性片段长度多态性法检测 (’)*+基因第 &! 密码
子突变/ 同时应用放免法测定血清 $%&"’" 的含量,并与 &0 例其他胰腺疾病患者和
!&例健康者的血清检测结果作对照,
两者联合应用的临床诊断价值。 结果:在
!1例胰腺癌和 ! 例其它胰腺疾病患者血清中检测到 (’)*+基因突变,阳性率分别为
0&2 0"3 和 &&2 043;而血清 $%&"’"测定的阳性率则分别为 0&2 0"3和 5&2 &13。平
行法联合检测 (’)*+和 $%&"’" 诊断胰腺癌时敏感性增至 "52 103,系列法联合检测
时特异性增至 "52 &!3。!&例健康对照者血清中 (’)*+基因与 $%&"’"均无异常。结
论:联合血清 (’)*+基因突变检测与 $%&"’" 测定可提高胰腺癌诊断的特异性和敏
感性,具有一定的临床应用价值。
关键词:胰腺肿瘤;(’)*+;$%&"’";聚合酶链反应 ’限制性片段长度多态性法
中图分类号:60.#2 " 文献标识码:%
文章编号:&777 8 5409:!77. ;7. 8 7!"# 8 7.
血清 ’89:;基因突变检测联合 &!<=8=测定
在胰腺癌诊断中的应用
张 奕 &, 姬舒荣 !, 奉典旭 ., 计 骏 &, 韩天权 &
#>?@>A>B:@BC DA ,CECBE>D@ DA ’89:; (C@C 3FE:E>D@; :@G &!<=8=
>@ #C9FH AD9 ,>:?@D;>; DA I:@B9C:E>B &:9B>@DH:
W!#*) X(8, Y( @!2:H+*)L, I"*) A(#*:Z2D, Y( Y2*8,[#* 4(#*:\2#*8
&2 上海第二医科大学附属瑞金医
院消化外科研究所,上海 !777!#;
!2 上海同济大学附属同济医院普
外科,上海 !7774#;
.2 上海市普陀区中心医院普外
科,上海 !7774#
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通讯作者:姬舒荣
$<))=+>@=?A= B
聚合酶链
反应 +限制性片段长度多态性法 (?7@AB<-./< :;.68
-<.:5678+-5-6:5678 C-.DB<85 @<8D5; ?7@AB7-?;6/BE
F)G+GHIF)检测 ,+-./基因密码子 ’!突变,同时应
用放免法检测血清中的 )*’"+"的含量,以探讨两
者联合应用对胰腺癌诊断的临床意义。
! 材料与方法
!" ! 研究对象
选取 ’"""年 J月至 !KK!年 L月间,瑞金医院外
科收治的 $#例拟诊胰腺癌的病人。经术前 M超、)N、
9G)F检查、手术探查以及术后病理诊断,其中 O"例
确诊为胰腺癌,男性 OK例,女性 "例,年龄 O# P J"
岁,中位年龄 #L岁。其余 ’J例其它胰腺疾病者分别
证实为慢性胰腺炎 ’$例,胰腺囊腺瘤 ’例,胰交界粘
液瘤 ’例。另选 !’名健康体检者作为对照 2男 Q女为
’’ Q ’K,年龄 OK P #K岁,中位年龄 $O岁 >。
!" # 方法
’R !R ’ 标本收集 术前 ’ 周抽取外周静脉血 O
B@,常温下 ! KKK S ! 离心 ’$ B68,分离血清,T
JKU保存备用。
’R !R ! 血清 ,+-./基因第 ’!密码子突变的检测 按
VW*.B? M@77= ,65 2VW*X91,).5 17R !"’KL,X<-B.8A >
操作步骤抽提 01*。采用突变富集 F)G+GHIF法,对
,+-./基因第 ’!密码子突变进行检测 & ! (。简述如下,
错配引物 F’、F!,对血清 01*进行第一次 F)G
扩增,以产生一个 "#$!酶切位点。扩增产物经 "#$
!限制酶(3MW H<-B<85./,9GK$$’)酶切后,稀释 ’KK
倍用 F!及另一引物 FO进行第二次 F)G,对产物进
行 "#$!限制酶酶切。取酶切产物进行高分辨率的
3<5.?;7-琼脂糖(H3) M67?-7=4:5/,).5 17R $K’Y’)凝
胶电泳分析。电泳结果出现 ’O$Z?条带为突变阳性,
’K#条带为野生型酶切产物。
’R !R O 血清 )*’"+"测定 采用放免法(本院核医
学实验室)进行测定。按试剂合 2 W,XW’试剂合,天津
德普生物技术和医学产品有限公司 > 说明设定正常
值上限 OK[ \ B@,超过正常值上限判定为阳性,反之
则定为阴性。
’R !R L 统计处理 利用 ]*]软件 (#R ’!)进行 "!
检验。
# 结 果
#" ! 血清 $%&’(突变检测结果
按突变富集 F)G+GHIF法,当 ,+-./基因第 ’!
密码子发生突变时,F)G富集产物(’O$ Z?)不能被
"#$ W酶所酶切。而未发生突变时,酶切后的产物为
’K# Z?,见图 ’。
#" # 血清 $%&’( 突变结果与血清 )*!+%+ 检测结
果比较
O"例胰腺癌患者中,检测出 ,+-./突变 !Y例,血
清 )*’"+"升高者 !Y例,上述两项指标单独检测胰腺
癌的敏感性均为 J’R J"%,特异性则分别为 YYR !L%
和 $YR Y!%,系列联合法敏感性为 $’R !Y%。,+-./基
因突变在胰腺癌中明显增加,与慢性胰腺炎等胰腺疾
病 (’’R J#%)相比差异有显著性 (% ^ KR KK’)。
)*’"+"值在胰腺癌中也明显升高 (% & KR K$),但在
其它胰腺疾病中也有 L’R ’Y%的阳性率,因此特异性
相对较低。在对照组的血清中未检测到 ,+-./突变,
)*’"+"测定值也在正常范围,见表 ’。应用平行法联
合检测 (即两项指标中有一项为阳性即为阳性)可提
张 奕,等 R 血清 ,+-./基因突变检测联合 )*’"+"测定在胰腺癌诊断中的应用
图 ’ 突变富集 F)G+GHIF法检测 ,+-./基因第 ’!密码子突
变电泳结果
H6DR ’ 9@<:5-7?;7-6/ -4@5/ 7C F)G+GHIF ?-7=4:5/ C7-
=<5<:5678 B45.5678/ .5 :7=78 ’! 7C 5;< ,+-./ D<8 5&46%&<
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表 ! 胰腺癌患者 "#$%&突变与 ’()*#* 检测结果比较 +,-
.%/0 ! (1%23&4& 56 789 :92%7451&84; /97<991 "#$%& =919
>?7%7451 %1@ A29B%79@ ’()*#* +,-
表 ) 血清 "#$%&突变检测结果和血清 ’()*#*检测结果
.%/0 ) C979D7451 :9&?27& 56 "#$%& =919 >?7%7451
%1@ ’()*#*
高检测的敏感度("MG A#E)和阴性预测值(A2G A!E),
但采用系列法联合检测 (两项指标必须均为阳性)则
提高了检测的特异度 ("MG 2!E)和阳性预测值
("TG !ME),但降低了敏感性和阴性预测值,见表 !。
! 讨 论
随着细胞和分子生物学研究的不断进展,许多
胰腺癌相关的肿瘤标记物及敏感特异的基因标记相
继被发现,其中以血清 012"-"测定和 ,-%./基因密
码子 2!突变的检测最具代表性。前者在临床上已被
广泛应用,在胰腺癌中明显升高,具有一定的诊断价
值,但其在急、慢性胰腺炎、肝胆疾病以及胃肠道恶
性肿瘤中都有超过 !BE的检出率,因此对胰腺癌诊
断的特异性相对较低 Z ? [。另外,012"-"在早期胰腺
癌中常不升高,因此单用 012"-" 进行胰腺癌的筛
查会造成较高的假阳性率与漏诊率。,-%./癌基因则
弥补了这方面的不足,,-%./在胰腺癌患者中有#TE
\ "TE的突变率,且几乎都集中于第一外显子的2!
密码子,且被认为突变发生在胰腺癌的早期 Z M [,这使
得检测 ,-%./ 基因第 2! 密码子突变胰腺癌早期诊
断成为可能。近年来有许多文献报道从胰腺癌患者
的各种标本 (包括胰腺细针穿刺组织、胰液、十二
指肠引流液以及血清)中检测 ,-%./基因第 2!密码
子的突变来探讨对胰腺癌进行早期诊断的可能
性。如 @&%.等 Z T [以胰腺癌组织细针穿刺物为标本,
用30]-]^_3法进行 ,-%./突变检测,检测到 "!E
(22 K 2!)的突变率。8*%6=*<*+>等 Z H [用同样的方法检
测 !!例胰腺癌患者纯胰液标本,突变率为 ##E。
@’<5.=>等 Z # [ D对 !2例晚期胰腺癌患者的血样进行
了检测,突变率为高达 A2E。除血清标本外,其它方
法因取材困难,难以在临床上推广。本研究中有
#2G #"E的胰腺癌患者血清中可测到 ,-%./ 基因第
2!密码子的突变,而且特异性较高,与文献报道结
果相近 Z A [。本组胰腺癌患者血清 012"-"的阳性率亦
为 #2G #"E,与 ,-%./结果的符合率为 T2G !AE,说明
两者具有较大的互补性,当做平行联合检测时,可以
提高胰腺癌诊断的敏感性和阴性预测值,减少漏诊
的概率,由于特异性较差,此法较适用于门诊病人的
筛选。而系列联合检测则可提高诊断的特异度和阳
性预测值,提高诊断的正确性。如果血清 ,-%./基因
突变和 012"-"均为阴性时,则胰腺癌的可能性极小
(S TG 2?E)。我们认为可以将 ,-%./做为一种潜在的
肿瘤标志物与 012"-"联合应用于胰腺癌的筛查中,
这将使胰腺癌的早期诊断变得快速、准确、及时。
本研究还发现,,-%./突变率在胰腺癌以外的其
它胰腺疾病,远低于血清 012"-" 阳性率。这提示
,-%./突变检测可能对胰腺癌与良性胰腺疾病的鉴别
诊断有帮助,但此方面的研究文献报道不一,尚有待
进一步研究。
Z参 考 文 献 [
‘.%/=.P 1_Y ^*%4.4:*a-:*< 0./67<<& 0G 3.45%*.675 5.%574&+.
Z b [ G N c49< b @*:Y 2""!Y ?!H(#)O MTT V MHTG
奉典旭,韩天权,蒋 渝,等 G 胰腺癌患者血浆 ,-%./基因突
变检测的研究 Z b [ G 中华外科杂志,!BBB,?A(2B):#H# V ##BG
)5=+7*9*< ‘G X’+&% +.%d*%/ 74 (.45%*.675 5.45*%-5’%%*46
5&45*(6/ Z b [ G ;*(.6&9./6%&*46*%&<&9>Y 2"A"Y ?H DH F O MMH V MM"G
_*+&74* N]Y b.74 )Y ;’9=*/ 0@Y *6 .Y
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<7+76/ Z b [ G 0<74 0=*+Y 2""AY MM D22 F O !!M? V !!MAG
8*%6=*<*+> 3Y 8&’7//&4 @Y c/5&’%%&’ bY *6 . :7.94&/7/ &Q
(.45%*.675 5.45*% Z b [ G 144 f46*%4 @*:Y 2""TY 2!? D? F O 2AA V
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