大黄鱼肝脏病变组织病理学观察

第 28卷 � 第 5期 2 0 0 7 年 1 0 月 海 � 洋 � 水 � 产 � 研 � 究 MARIN E FISHERIES RESEARCH Vol. 28, No. 5 Oct. , 2007 福建省海洋与渔业局 2004年� 大黄鱼肝脏组织病理学观察研究 科技项目(闽海渔科 0112号)资助 收稿日期: 2006�02�24;接受日期: 2006�05�02 作者简介:刘振勇( 1956� ) ,男,副研究员,主要从事海水鱼类养殖和病害防治技术研究。E�mail: zyl iu93@ 126. com, T el: ( 0593) 2866141 大黄鱼肝脏病变组织病理学观察 刘振勇 � 谢友佺 � 林小金 (福建省闽东水产研究所, 宁德 352100) 摘要 � � 采用石蜡切片和 HE染色法,对不同生存条件下的大黄鱼以及肝脏病变的大黄鱼肝组织进 行组织切片,在显微镜下进行组织病理学观察,采用酸水解法测定不同生存条件下以及患肝肿大的大 黄鱼肝脏的脂肪含量,了解其变化情况。以野生大黄鱼的肝组织细胞结构为参照, 初步探明了小网箱 养殖大黄鱼的脂肪肝、肝肿大、肝胆汁淤积、肝淤血的组织病理变化情况, 讨论了大黄鱼肝脏病变的原 因和病变致死原因,并提出了防治措施。 关键词 � � 大黄鱼 � � 肝脏 � � 病变 � � 组织病理学 中图分类号 � S965. 322; Q959. 460. 5 � � 文献识别码 � A � � 文章编号 � 1000�7075( 2007) 05�0007�05 Histopathological observation of pathological changes in the liver of Pseudosciaena crocea LIU Zhen�yong � XIE You�quan � L IN Xiao�jin ( M indong F ishery Resear ch Institute of Fujian Prov ince, N ingde 352100 ) ABSTRACT � � Using paraffin section and H�E methods, histopathological observation was conducted on t he pat hological changes in the liver of P seudosciaena crocea w ith hepat ic disease under microscope. T he acid hydroly sis w as used for det ermining the content of fat in P seudosci� aena crocea liver. T aking t he cell st ructure of liver tissue from w ild Pseudosciaena cr ocea as control, w e ascertained the histopathological chang es of fat ty liver, hepatocirrhosis, hepato� megaly, bile deposit ing, and liver gore in P seudosciaena cr ocea . In addit ion, the aetiology of hepat ic disease and the mort ality cause induced by the pat hlogical changes in P seudosciaena cro� cea were also discussed. Lastly, the proposals of prevent ion and cure were put forw ard. KEY WORDS � � P seudosciaena cr ocea � � Liver � � Pathological changes � � Histopathology 近年来,在高温期常发现网箱养殖的大黄鱼( Pseudosciaena crocea)发生严重的肝脏病变, 病变类型呈多 样化,并发生大量死亡。病鱼体无异常症状,肝脏表面特征呈�花肝 、肝肿大、�绿肝 和�红肝 。关于大黄鱼 病害防治的报道较多,但尚未见到关于大黄鱼肝脏病变的组织病理学研究的报道。笔者拟通过对不同生存条 件下和患肝脏疾病的大黄鱼肝组织的观察,采用石蜡切片和 HE 染色方法, 观察、比较肝组织细胞结构的变化 情况,以及脂肪含量的变化情况,结合各自的养殖措施,探讨致病原因和防治措施,为有效地防治大黄鱼肝脏疾 病提供科学依据。 8���� 海 � 洋 � 水 � 产 � 研 � 究 第 28 卷 � 1 � 材料和方法 1. 1 � 材料来源 用于观察、研究的样品于 2005年 6月初~ 8月下旬, 取自宁德市三都澳内海域刚捕获的野生大黄鱼(体重 为 750 g/尾)、深水大网箱(直径为 20 m ,深度为 8 m)养殖的大黄鱼(体重为 500 g/尾左右)、近岸小网箱(规格 为 3 m ! 3 m ! 3 m )养殖的健康的大黄鱼(体重为 350 g/尾左右)和小网箱养殖的患肝脏疾病的大黄鱼(解剖观 察有肝脏异常者,体重为 300 g/尾左右)的肝组织。取样时观察鱼的体形、体色、活动状态以及内脏器官等组织 的症状,同时了解各自的养殖措施和病史。 1. 2 � 组织切片与观察 切取肝组织块(约 3 mm ! 3 mm)在津克氏液( Zenker F ixat ive)中固定 24~ 30 h, 常规石蜡包埋,切片厚度 8 �m,进行 HE 染色、中性树胶封片,光学显微镜观察、拍照(洪水根 � 1989;潘连德等 � 2000)。以野生大黄鱼 肝组织细胞结构为参照, 对另外 3类大黄鱼肝组织细胞结构进行观察、比较,并进行组织病理学分析、研究。 1. 3 � 脂肪含量的测定 采用酸水解法(汪之和 � 2003)测定野生大黄鱼、深水大网箱养殖的大黄鱼、小网箱养殖的大黄鱼、肝肿大 的大黄鱼的肝脏脂肪含量,在被测鱼中随机取样 3尾鱼的肝组织,在实验室进行测定, 取其平均值。探讨肝组 织结构的变化与脂肪含量的关系。 1. 4 � 细菌的分离 在切取肝组织块固定的同时, 摄取一小块组织在普通牛肉膏琼脂平板培养基上划线, 进行细菌的分离,检 测肝组织中是否含有细菌。操作时严格按无菌操作法进行(范秀容等 � 1980)。 2 � 结果 2. 1 � 肝脏病变的类型 大黄鱼肝脏病变主要发生在近岸小网箱养殖的 150 g 以上的鱼中, 发病时间为 6月初~ 9月初(水温为 25 ~ 29 ∀ , 养殖密度为 40~ 30尾/ m3 ,饵料主要为冰鲜或冷冻的低质鱼类)。病情较轻的鱼体, 其体色、体形等无 明显改变,仅表现为游动无力或有时烦躁不安,甚至痉挛窜游。生长突然变得缓慢, 随着病情的发展,患病鱼体 的体表颜色变淡,体形肥胖,体长为体高的 3. 0~ 3. 5倍(野生鱼为 3. 5~ 4. 2倍#朱元鼎 � 1984∃) ,日死亡率 1% ~ 3 %。肝脏病变的类型有: ( 1)脂肪肝, 肝组织中大量的脂肪积累,形成红、白相间的�花肝 (图版�1) ; ( 2) 肝脏肿大,严重者大于正常鱼的 1倍以上,颜色变浅,呈土黄色、水肿状态; ( 3)肝胆汁淤积, 颜色变浅,形成�绿 肝 , 其胆囊膨大,呈深墨绿色(图版�2) ; ( 4)肝淤血,颜色呈暗红色, 形成�红肝 ,其胆囊膨大,胆汁充盈, 颜色呈 艳红(图版�3)。 2. 2 � 肝组织病理变化 2. 2. 1 � 野生鱼和深水大网箱鱼的肝组织 野生大黄鱼的肝组织细胞呈略带圆形的多角形,细胞形状较规则,具有球形并带有核仁的细胞核, 而且细 胞核基本都处在细胞的中间, 脂肪滴小,各细胞结构保持正常形态(图版�4)。深水网箱养殖的大黄鱼肝组织中 可见到少量的较小的脂肪滴, 细胞、细胞核等细胞结构基本保持正常形态(图版�5)。 2. 2. 2 � 小网箱鱼的肝组织 2. 2. 2. 1 � 脂肪肝的组织病理变化 � 第 5 期 刘振勇等:大黄鱼肝脏病变组织病理学观察 9���� 在小网箱中养殖的大黄鱼肝脏普遍存在脂肪肝的特征,石蜡切片中呈大的空泡状是脂肪存在的部位, 细胞 质中中性脂肪过度储存并挤压细胞核, 使有些细胞核变形或呈萎缩现象(宋振荣 � 2000) ,但多数细胞核仍保持 正常的形态。脂肪变性的细胞集中处, 细胞间质也发生了病理变化,结缔组织异常增生(图版�6) ,呈现出脂肪 肝和肝硬化的症状(宋振荣 � 2000) ,肝脏表面观呈红、白相间的�花肝 。 2. 2. 2. 2 � 肝肿大的组织病理变化 肿大的肝脏明显大于正常鱼的肝脏,颜色变浅,呈土黄色、水肿状态。切片观察,核仁大都消失,呈空泡状(图 版�7) ,细胞质中中性脂肪大量储存,原来小的脂肪滴隔合变成大的空泡状脂肪滴,结缔组织异常增生,有的细胞彭 大,呈水样化坏死细胞,其细胞内的细胞质、细胞核等细胞器裂解、液化,形成大的囊胞(施瑔芳 � 1989) (图版�8)。 2. 2. 2. 3 � 绿肝的组织病理变化 肝脏局部呈绿色的�绿肝 ,肝脏大部分颜色变浅,呈土黄色,胆囊肿大,胆汁充盈,颜色墨绿。切片观察,肝细 胞内有胆汁淤积, HE染色可见到细胞质中有黄褐色的颗粒,肝细胞有的萎缩,有的核仁消失呈核空泡(图版�9)。 2. 2. 2. 4 � 肝淤血的组织病理变化 肝脏外观颜色暗红色的�红肝 ,表面颜色深浅不一,呈小点状淤血,脾、肾明显肿大,胆囊呈红色。肝脏淤血的 组织细胞间和细胞质中可见到大量的血球颗粒(图版�10) ,肝细胞多数萎缩,有许多核仁消失呈核空泡(图版�11)。 10��� 海 � 洋 � 水 � 产 � 研 � 究 第 28 卷 � 2. 3 � 肝脏脂肪含量的变化 野生、深水大网箱养殖、小网箱养殖和肝肿大的大黄鱼的肝脏脂肪含量各不相同,野生的鱼含量最低, 平均 为 11. 5 % ;深水大网箱养殖的鱼其次, 平均为 16. 7 % ;小网箱养殖的鱼含量最高,平均为 30. 5 % ;肝肿大的鱼 平均含量为 21. 6 % ,测定情况见表 1。 表 1 � 大黄鱼肝脏脂肪含量 T ab le 1 � T he liver fat contents of Pseu dosciaena crocea 类别 Category 野生 Wild 深水大网箱养殖 Farmed in large cage in deep water 小网箱养殖 Farmed in small cage 肝肿大 H epatomegaly 各尾 Ind. ( % ) 10. 1 � 12. 8 � 11. 5 18. 2 � 15. 5 � 16. 3 34. 6 � 29. 7 � 27. 2 23. 1 � 20. 4 � 21. 3 平均 Average( % ) 11. 5 16. 7 30. 5 21. 6 2. 4 � 细菌的分离 细菌分离结果, 各种类型的肝脏病变的组织中都未分离到细菌菌株。 3 � 讨论 3. 1 � 肝脏病变的原因 3. 1. 1 � 养殖管理措施不当,脂肪过度积累 大黄鱼在小网箱内养殖, 投喂量大,活动范围小,能量消耗小,所以脂肪积累多(雷霁霖 � 2005)。研究发现 鱼体脂肪的含量随饵料脂肪含量的增加而增加(姜礼燔 � 1989)。目前养殖大黄鱼长期投喂的饵料含脂肪量 高,长期以鲐鱼类的鱼作为饵料,它的脂肪含量高达 23 % ,属高脂鱼类(汪之和 � 2003) ,因此极易造成脂肪过 度积累,引发脂肪肝或肝硬化。另外饵料经长期冷藏, 其脂肪大量被氧化, 也容易引起鱼的脂肪肝(林永添等 � 2003)。 3. 1. 2 � 投喂鲜度差或用福尔马林保鲜的饵料 大黄鱼养殖基本上都是投喂冰鲜或冷冻的低质鱼类, 这些饵料经过长途运输或长期冷藏,多数鲜度较差, 有的甚至腐败变质, 并带有致病的病原体。投喂鲜度差或腐败变质的饵料, 可造成大黄鱼大量死亡, 因为在变 质的饵料中含有组胺酸等毒素,它对鱼的肝脏会有损伤作用(孟庆显 � 1996)。 据大黄鱼养殖者反映,在夏季高温期从事饵料的商贩常用福尔马林浸泡饵料,以达到保鲜饵料的目的,经 � 第 5 期 刘振勇等:大黄鱼肝脏病变组织病理学观察 11��� 作者快速测定, 也常发现饵料中含有福尔马林,鱼摄食这样的饵料几天后就会出现肝脏肿大症状。那是因为福 尔马林对鱼的肝脏会产生严重的损伤(雷霁霖 � 2005)。 3. 1. 3 � 防治病害的药物过量或长期使用 大黄鱼的肝脏疾病发生期主要是在 7~ 8月间,在这一时期是大黄鱼的发病高峰期,因此有的养殖者为了 减少鱼病的发生或快速治好鱼病, 在防治时过量或长期使用抗生素、化学合成类药物和杀虫剂,这样对鱼体的 肝脏会造成严重损伤(姜礼燔 � 1989)。一些肝胆汁淤积的鱼就是在这种状况下发病的。 3. 1. 4 � 其他病害引起肝病并发症 许多报道表明, 由于病毒或寄生虫性疾病,会引起鱼的肝组织发生病变。如虹彩病毒病会使大黄鱼的肝脏 出现点状出血或淤血和脾、肾脏肿大等症状(林克冰 � 2002) ; 粘孢子虫病会对鱼的肝脏胆管造成堵塞, 使肝脏 胆汁淤积,并对肝组织造成损伤(朱元鼎 � 1984)。从本次实验的细菌分离结果来看,各种类型的肝脏病变可排 除由于细菌性疾病引起的。本次实验偶然发现肝脏胆汁淤积症状的鱼,但未发现有粘孢子虫等寄生虫寄生,因 此其发病原因有待深入研究。 3. 2 � 肝组织病变致死原因 鱼类肝脏的主要功能是分泌胆汁, 进行蛋白质、脂肪、碳水化合物的异化和同化,储存、解毒、造血、产生抗 体等(宋振荣 � 2000)。当肝脏组织发生病变,这些功能就要受到影响直至散失生理功能。从组织切片和脂肪 含量测定结果来看, 由于养殖管理措施不当引起的肝组织病变的初期只是脂肪在肝组织内积累,而后逐渐发展 到脂肪滴隔合。脂肪过度积累,脂肪变性,结缔组织异常增生,形成脂肪肝。随着病变的发展,脂肪变性与水样 变性并存,肝静脉管壁增厚且呈纤维化,直到细胞水样变性、坏死, 此时肝脏脂肪含量反而变低,最后肝功能衰 竭,直至死亡。肝脏淤血和胆汁淤积也都对肝脏组织细胞造成破坏, 致使细胞核空泡,细胞坏死等,因此肝组织 的生理功能受到严重破坏,最后达到鱼的死亡。 3. 3 � 肝脏疾病防治措施 改变传统的小网箱养殖模式为深水大网箱养殖模式, 加大鱼的活动空间, 放养密度不宜过大,努力做到仿 生态养殖,减少大黄鱼肝脏疾病的发生;投喂新鲜饵料或优质的配合饵料,控制好饵料中的脂肪含量和各种营 养成分的配比, 适当控制投饵量(赵法箴等 � 2002) ;病害防治要对症下药, 谨慎使用病害防治药物, 避免长期、 过量使用抗生素、化学合成类药物和杀虫剂; 在养殖过程中适时添加投喂保肝利胆的药物, 以改善肝脏的生理 功能。 参 � 考 � 文 � 献 朱元鼎主编. 1984. 福建鱼类志. 福州:福建科学出版社, 131~ 134 宋振荣编著. 2000. 水产动物病理学. 厦门:集美大学出版社, (中册) 39~ 42 汪之和主编. 2003. 水产品加工与利用. 北京:化学工业出版社, 444~ 445 孟庆显. 1996. 海水养殖动物病害学. 北京:中国农业出版社, 148 林永添, 陈洪清. 2003. 网箱养殖大黄鱼肝胆症的成因与防治. 中国水产, 3: 34~ 35 林克冰. 2002. 一种大黄鱼的病毒病. 厦门渔业信息, 2: 14 范秀容, 李广武, 沈 � 萍. 1980. 微生物学试验. 北京:高等教育出版社, 54~ 159 姜礼燔. 1989. 鱼类肝病的组织病理学研究. 淡水渔业, 5: 13~ 14 施 芳. 1989. 鱼类生理学. 北京:中国农业出版社, 118~ 119 洪水根. 1989. 动物显微技术学. 厦门:厦门大学出版社, 141~ 153 赵法箴, 李 � 健, 刘世禄. 2002. 水产健康养殖与食品安全发展战略研究. 海洋水产研究, 23( 4) : 66~ 70 雷霁霖主编. 2005. 海水鱼类养殖理论与技术. 北京:中国农业出版社, 813 潘连德, 孙玉华, 陈 � 辉, 许 � 平. 2000. 施氏鲟幼鱼肝性脑病组织病理学与细胞病理学研究. 水产学报, 24( 1) : 56~ 60