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(收稿日期:2007一10-12l修回日期:2007—12-04)
抗乙肝病毒药物恩替卡韦的合成
李荣东,乔娟,王福东,黄萍(湖南中医药大学药学院。长沙410208)
摘要:目的合成抗乙肝病毒(HBV)药物恩替卡韦。方法以(1S-反式)一2_[(苯甲氧基)甲基]一3一环戊烯一1一醇为
起始原料,经环氧化、保护羟基、定向加成、保护氨基、氧化、亚甲基化和两步脱保护基合成目标化合物。结果
实验总收率为8.9%,其结构经红外、质谱、氢谱和碳谱测试确证。结论该工艺与文献相比操作简便,易于工业
化大生产,收率高.
关键词:合成;恩替卡韦;抗乙肝病毒
中图分类号:R914.5,TQ463文献标识码:A 文章编号:1672-2981(2008)03-0292-04
Synthesisofanti—HBVdrugentecavir
LIRong-dong,QIAOJuan,WANGFu-dong,HUANGPing(SchoolofPharmacy,HunanUniversityofTradi—
tionalChineseMedicine。Changstm410208)
Abstract:ObjectiveTosynthesizeentecavirasananti-hepatitisBvirus(anti_HBV)drug.MethodsThetarget
compoundsweresynthesizedfrom(1S-trans)一2-[(phenylmethoxy)methyl']一3-cyclopenten-1一olviacyclooxidation,
protectionofhydroxylgroup,directionaladdition,protectionofaminogroup,oxidation,methylenationanddepro-
teetion.ResultsThetotalyieldwas8.9%.ThestructureofthetargetcompoundwasconfirmedbyIR,MS。1H—
NMR.and13C-NMRConclusionTheprocessissimplerandmorepracticalwithhigheryield.
Keywolds:synthesis;entecavir;anti-hepatitisBvil'dS(anti-HBⅣ)
乙肝病毒感染已经成为全球性的危害。慢性乙肝可导致
肝硬化、肝癌及肝功能衰竭,我国有数以亿计的乙肝患者和
病毒携带者,全球每年因乙肝相关疾病的死亡人数高达百万
之多。恩替卡韦(1,entecavir)是百时美施贵宝公司
(Bristol—MyersSquib,BMS)研究开发的抗乙肝病毒药物,
2005年4月首次获得美国FDA的批准。其化学名为2一氨基一
l,9---氢一9一[(1S,3R,4S)-4一羟基一3一羟甲基一2一亚甲基环
戊基]一6H一嘌呤一6一酮一水合物。临床主要用于治疗成人伴
有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高、或肝组织学为活动
性病变的慢性乙型肝炎。
恩替卡韦的合成路线主要有2条[1q],文献Ll{]以(1§
反式)-2一[(苯甲氧基)甲基]一3一环戊烯一1一醇(2)为原料,
经8步反应得到恩替卡韦}文献[4]以[1孓(1a,2a,3母,
5a)]一2一[(苯甲氧基)甲基]一6一氧杂二环[3,1,o]己一3一
醇(3)为原料,经10步反应,或以(3as,6水)一3,3a,
6,6a_四氢一2H一环戊二烯并[b]呋喃一2一酮为原料,经11步
反应制得目标化合物。2种方法的主要区别在于前者是先在
环戊基上引入嘌呤再进行亚甲基化,而后者是先在环戊基上
引入亚甲基再引入嘌呤。文献[4]的反应步骤相对较长、工艺
复杂,而且涉及方法专利。因此,本文作者选择文献[111报
道的合成路线,以(1孓反式)-2-[(苯甲氧基)甲基]一3一
环戊烯一1一醇(2)为原料,经环氧化、保护羟基,定向加
成、保护氨基、氧化、亚甲基化和两步脱保护基制得恩替卡
韦(见图1)。同时,对多步反应工艺进行了改进:中间体
(3)和(4)文献[3]均采用柱层析纯化,经过改变中间体
(4)柱层析纯化梯度洗脱方法,(3)无需纯化即可直接用于
制备(4),收率由文献[33的65.7%提高到70.9%。文献[3]
未对中间体(8)采用柱层析纯化,直接用于制备(9),(9)
再柱层析纯化,2步收率18.1%;经过反复探索,得到了中
间体(8)的柱层析纯化方法,然后脱保护制得(9),(9)
无需更进一步纯化,质量满足要求,2步收率44.5%,提高
了一倍多。通过研究,该工艺与文献相比操作简便,易于工
作者简介:李荣东,男,博士研究生。副研究员,主要从事药物化学研究,Tel:(0731)8458249。13787008996.
292万方数据
中南药学2008年6月第6卷第3期CentralSouthPharmacy.June2008,VoL6No.3
业化大生产,收率高.
2
Punne,LiH
DⅣ噼
Dess-Martinreagent
aq.HCI
THF,CH30H
5
3
NaH(C4坞)4NI.BnBr
MMTCI,TEA,DMAP
..nO,Ⅺ0N弋_卧
Bn∥ ’NH-
7
H
9
图1恩替卡韦合成路线
Fig1 Syntheticroutesofentecavir
1仪器与试剂
熔点采用天津大学YRT一3熔点测定仪测定,温度未
经校正.旋光采用上海精密仪器有限公司WZZ-2B型自动旋
光仪测定。红外采用美国NICOLETFTIR5DX型红外光谱
仪。质谱采用FinniganLCQdeca质谱仪(ESI)进行测定。
核磁共振氢谱和碳谱采用瑞士Bruker公司AMX--400(400
mHz)型核磁共振仪测定.
柱层析硅胶为80~100目(青岛海洋化工厂),(1S-反
式)-2-[(苯甲氧基)甲基]一3一环戊烯一1一醇(旋光纯度>
98oA)和2一氨基-6-(苯甲氧基)-9H一嘌呤(纯度>98%)
为工业品,其他试剂为市售化学纯或分析纯。
2方法与结果
2.1 [1S-(1e,2a,3B,5a)]-2-[(苯甲氧基)甲基]一6一
氧杂二环[3,1,o]己一3一醇(3)的制备
过氧叔丁醇90.1g(1.0m01)和二氯甲烷(100mL)
混合液滴加到(1S-反式)一2一[(苯甲氧基)甲基]一3一环戊
烯一1一醇(2)102.0g(O.5m01),乙酰丙酮氧钒2.7g(O.01
m01)和二氯甲烷(200mL)的混合溶液中,氮气保护,室
温搅拌反应16h,降温至0℃,加入饱和亚硫酸钠溶液,室
温再搅拌2h,分出有机层,水层用二氯甲烷萃取,合并有
机相,饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,真空浓缩,得
(3)101.5g。收率92.3%,[司磐=+40.o~45.oo(C=1-0
CHCh)(文献[3]:收率87%,[a]移=+44.6。(c一1.0
CHCh))(直接用于下一步反应)。
2.2 Ds-(1e,2a,38,5a)]一3一(苯甲氧基)一2一[(苯甲
氧基)甲基]一6_氧杂二环[3,1,o]己烷(4)的制备
CH2C12
Zn-TiCh-CI-12Br2
MMT
']3-IT
BCl3,CH2C12
4
6
7n梦《
3
l
MMT
H.MMT
氮气保护,在干燥的三颈瓶中加入干燥的四氢呋喃
(500mL)和氢化钠(60%)20.0g(O.5m01),20℃以下
滴加(3)99g(0.45t001)的四氢呋喃(100mL)溶液,滴
完后室温反应2h,再向体系中加入四丁基碘化铵1.8g(5
mm01),滴加溴苄85.5g(o.5t001),室温搅拌反应过夜,
加入乙醇破坏氢钠,浓缩,残留物中加入水(350mL)和
乙醚(350mL),分出有机相,水层用乙醚(100lTlL×2)
萃取。合并有机相,无水硫酸镁干燥,浓缩,柱层析纯化梯
度洗脱:石油醚一乙酸乙酯=10:1洗至产物,石油醚一乙酸
乙酯=3l 1洗脱完产物.得(4)107.2g,收率76.8%,
l-s]D∞=+40.o~45.00(C=1.0CHCh)(文献[3]:收率
75.5%).
2.3 [1S-(1a,26,3a,5口)]-5-[2一氨基一6-(苯甲氧
基)一9H-嘌呤一9一基]-3-(苯甲氧基)-2一[(苯甲氧基)甲
基]环戊醇(5)的制备
氮气保护下,于干燥的三颈瓶中加入2-氨基一6-(苯甲氧
基)一9H-嘌呤144.6g(0.6t001)和干燥的DMF(450mL),
搅拌溶解,室温下加入氢化锂2.52g(0.315t001),保持10
rain,升温至60℃反应15min,60℃下滴加(4)93.0g(O.3
m01)的D她(250mL)溶液。60℃反应15min,升温至
125℃反应3h,反应混合物降至室温,加入冰醋酸(20
mL),室温下搅拌30min,反应混合物倒入水(3000mL)
中,乙酸乙酯(500mLX4)萃取,合并有机相,依次用水
(500mL),食盐水(500mL)洗涤,干燥,真空浓缩,加
入二氯甲烷(2000mL),析出的固体(未反应的2一氨基一6一
(苯甲氧基)一9H-嘌呤)过滤,滤液真空浓缩,残留物柱层
293万方数据
CentralSouthPharmacy.June2008,V01.6No.3中南药学2008年6月第6卷第3期
析(洗脱剂:二氯甲烷一甲醇=60:1),得(5)98.5g,收
率59.6%,[a]D20一+38.o~43.00(C----1.0CHCl3)(文
献L3J:收率60.2%)。
2.4 C1S-(1a,2p,3a,5p)]-5-[2一[[(4一甲氧基苯
基)一二苯甲基]氨基]一6一(苯甲氧基)一9H-嘌呤一9一基]一3一
(苯甲氧基)一2一[(苯甲氧基)甲基]环戊醇(6)的制备
氮气保护,室温下将(5)82.7g(O.15roof)溶于二氯
甲烷(600mL)中,分别向溶液中加入三乙胺30.3g(O.3
t001),对甲氧基苯基二苯基氯甲烷55.6g(O.18rn01)和4一
二甲氨基吡啶1-2g(o.01m01),室温下搅拌过夜,乙酸乙
酯2000mL稀释,饱和碳酸氢钠溶液(300mLX2),饱和
食盐水(300mLX2)洗涤,干燥,真空浓缩,得到的粗品
柱层析纯化(乙酸乙酯一石油醚一3:2)得到(6)93.4g,
收率75.7%,[d]D20=+38.O~43.0。(C=1.0CHCl3)(文
献[3]:收率74.2%)。
2.5 [2R.(2a,313,5a)]-5-[2一[[(4一甲氧基苯基)一二
苯甲基]氨基]一6一(苯甲氧基)一9H一嘌一9一基]一3一(苯甲氧
基)一2一[(苯甲氧基)甲基]环戊酮(7)的制备
2.5.1DMP(Dess-MartinPeriodinane)的制备将邻碘苯
甲酸74.4g(0.3m01)与0.73tool·L_1稀硫酸(600mL)
混合,升温到55℃,剧烈搅拌下,将溴酸钾65.1g(o.39
m01)分批加入到反应体系中(加料过程中体系温度控制在
55℃左右)。加料完毕,升温到68℃搅拌反应4h,冷却,
过滤,滤饼依次用水(500mLX2),乙醇(80mLX2),乙
醚(60mL×2)洗涤,室温真空干燥,得到粉红色固体
72.4g。将以上粉红色固体72.4g,和醋酸酐290mL,对
甲苯磺酸0.35g(2mm01),在80℃搅拌反应2h,冷却析
晶,过滤,乙醚洗涤滤饼,得到固体DMP75.2g。收率
59.1%,mp133~134℃(文献[5|:收率84.6%,mp133~
134℃)。
2.5.2化合物(7)的制备在氮气保护下,往干燥的三口
反应瓶中加入.DMP63.6g(O.15m01)和二氯甲烷(1600
mL),叔丁醇12.2mL(0.13m01),室温反应10min,加
入(6)82.3g(O.1m01)的二氯甲烷800mL溶液,搅拌反
应30rain。HPLC监测反应,反应完毕,搅拌下加入混合溶
液(10%亚硫酸钠溶液一饱和碳酸氢钠溶液一饱和食盐水一
1.5:1;1)(3500mL),搅拌1h。分出有机相,水相用二
氯甲烷1600mL萃取,合并有机相,然后用饱和食盐水洗
涤,无水硫酸镁干燥,浓缩至干得到黄色固体(7)80.0g。
收率97.4%,mp65~67℃(文献c2]:收率100%)。无需纯
化,直接用于下一步反应。
2.6 [1S-(1a,3e,4f1)]一N-[(4一甲氧基苯基)一二苯甲
基]一6一(苯甲氧基)一9一[2一亚甲基一4一苯甲氧基一3一[(苯甲氧
基)甲基]环戊基]一9H一嘌呤一2一胺(8)的制备
2.6.1烯化试剂(锌一四氯化钛一二溴甲烷复合物)的制
备[3]在氮气保护,一40~一50℃下,将四氯化钛60.5
mL(O.55t001)滴加到二溴甲烷53.6rnL(O.77t001)和锌
粉158.3g(2.42m01),四氢呋喃1500mL的悬浮液中,
滴加完毕,在30min内将反应体系升温到O~5℃,在此条
件下搅拌反应4d。
2.6.2化合物(8)的制备将上述制备的(7)80.0g
(o.097m01)的二氯甲烷800mL溶液加入到烯化试剂[3]
(1600mL)中,搅拌反应3h。反应完毕,把反应体系倒入
二氯甲烷(4000mL)和饱和碳酸氢钠溶液(4000mL)混
合体系中,搅拌1h,过滤,滤饼用二氯甲烷洗涤。分液,
水相用二氯甲烷萃取(1500mL),合并有机相,无水硫酸
镁干燥。浓缩至干,得到粗产物柱层析纯化(石油醚一乙酸
乙酯=4:1),得到泡沫状固体(8)39。5g。收率49.5%,
mp43~45℃,[a]D20=+33.O~38.0。(C=1.0CHCl3)(5C
献[3]:收率79.6%)。
2.7 ElS-(1a,3a,4口)]一2-氨基一1,9-二氢一9一[2一亚甲基
一4一苯甲氧基一3一[(苯甲氧基)甲基]环戊基]一6H一嘌呤一6一酮
(9)的制备
将(8)39.5g(48.2mm01)溶于混合溶液(四氢呋喃一
甲醇=1;1)800mL中,加入3mol·L-1盐酸(197.5
mL),控温60℃搅拌反应直到原料完全消失。冷却至室温,
加入水800mL,乙酸乙酯800nlL,搅拌下用2mol·L_1氢
氧化钠溶液调节pH一7.1~7.3,分液,水相用乙酸乙酯
(800mLX2)萃取,合并有机相,无水硫酸镁干燥,浓缩
至约50n1L,放置在冰箱中冷却过夜,过滤收集固体,固体
用冷的乙酸乙酯洗涤。40℃真空干燥,得到白色固体(9)
19.8g。收率89.8%,mp232~234℃(文献[3]:收率
22.7%)。
2.8 2-氨基-1,9-2氢-9-[(1S,3R,4S)-4-羟基一3一羟甲
基一2一亚甲基环戊基]一6H-嘌呤一6一酮一水合物(1)的制备
氮气保护下,往干燥的三口瓶中加入(9)19.8g(43.3
mm01),干燥的二氯甲烷(800mL),冷却至-70℃,缓慢
滴加三氯化硼433.0mL(433.0mm01),滴加后继续搅拌反
应1h,缓慢升温至一30~一20℃,反应1.5h。反应完毕,
再降温至--70℃,慢慢滴加甲醇(400mL),滴加完后升温
至室温,减压蒸除溶剂,再加入甲醇(800mL),混合均匀
后减压浓缩,残渣用水(1200mL)溶解,用乙醚萃取至乙
醚层无色。水相用2tool·L-1氢氧化钠溶液调节pH=7.0,
然后将水相减压浓缩至250mL,加活性炭2.5g煮沸脱色
30min,滤去活性碳,滤液自然冷却,室温放置过夜。过
滤,冷蒸馏水洗涤,蒸馏水重结晶,得到白色晶体(1)8.2
g。收率64.2%,mp247~250℃,[a]D20=+31.o~34.0。
(C=0.3H20)(文献[3]:收率58.6%,mp>220℃,
[a]D20=+34.00(C=0.3H20))。IR(KBr,ClTI_1)u:
3446、3183、1724、1633、1600、1486、1400、1168、
1 106、912。EI-MSm/z:278[M+H]+,276[M—
HI+。1H—NMR(400113.Hz,DMsod6)8(ppm):2.00~
2.05(1TI,1H,H一5’)、2.17~2.50(m,1H,H-5’)、
2.49~2.51(m,1H,H一3’)、3.50~3.51(m,2H,CH2—
3’)、4.21(1-i2,1H,H-4’)、4.54(m,1H,=CH2—27)、
5.00(s,1H,OH一3’,4’)、5.08(m,lH,=CH2—2’)、
5.31~5.35(m,1H,H一1’)、6.47(brs,2H,NH2—2)、
7.66(s,1H,H-8)、10.71(brs,1H,H一1)。”GNMR
(400mHz,DMSO-ds)占(ppm):39.5((2-5’)、54.1((2-
3’)、55.5(C--1’)、63.1(C-CH2—3’)、70.6(C-4’)、109.8
294万方数据
中南药学2008年6月第6卷第3期CentralSouthPharmacy.June2008,V01.6No.3
(C-=CH2—2’)、116.3(C-5)、136.6(C-8)、151.4(C-[3]PcmaLIlg,tonRz,SlusarchykWA,Skillman,eta1.Hydroxym-
27)、151.8(C-4)、153.5(C-2)、157.2(C-6)。ethyl(methylenecyclopentyl)purinesandpyrimidines[I’].
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(收稿日期:2008-02—24;修回日期:2008.03—28)
反相高效液相色谱法同时测定大鼠单向肠灌流液
一 中补骨脂素和异补骨脂素
高缘1,汪宗华1,张建军2,赵浩如1(1.中国药科大学中药学院中药制剂教研室,南京210009;2.中国药科大学药
学院药剂教研室,南京210009)
摘要:目的建立同时测定大鼠在体单向肠灌流液中补骨脂素和异补骨脂素的RP-HPLC方法。方法采用RP-
HPLC法,色谱柱为Shimadzuc18(250mmX4.6nlrIl,5脚),流动相为甲醇一水(55:45),柱温:30℃,流速:
1.0mL·rain~,检测波长:245nm。结果补骨脂素、异补骨脂素分别在0.8236~32.94弘g·InL~、1.140~
45.60旭·n1L_1-b峰面积呈良好线性关系,相关系数r均为0.9999。其平均回收率分别为98.98%、99.59%,
RSD均<3%。结论该法操作简便、结果准确、灵敏度高,可同时测定大鼠单向肠灌流液中补骨脂素和异补骨脂
素。
关键词:补骨脂素;异补骨脂素;单向肠灌流;反相高效液相色谱法
中图分类号:R927.2,R945文献标识码:A 文章编号:1672-2981(2008)03-0295—04
Simultaneousdeterminationofpsoralenandisopsoralenin
thesolutionofratsingle-passintestinalperfusionbyRP-HPLC
GAOYuanl,WANGZong-hual,ZHANGJian-jun2,ZHAOHao-rul(1.DepartmentofPharmaceutics,Schoolof
TraditionalChineseMedicine,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009;2.DepartmentofPharmaceu—
tics,SchoolofPharmacy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Na巧ing210009)
Abstract:ObjectiveTosimultaneouslydeterminetheconcentrationsofpsoralenandisopsoraleninthesolutionofthe
ratsingle-passintestinalperfusionbyRp-HPLc.MethodsAnRP-HPLCmethodwasestablishedwithaShimadzuC,s
column(250mmX4.6rnlTl,5um).Themobilephasewasmethanol-water(55:45).Detectionwasperformedat
245nn],andthecolumnovenwasmaintainedat30℃.Theflowratewas1.0mL·rain~.ResultsDeterminations
ofpsoralenandisopsoralenindicatedgoodlinearityover0.8236~32.94gg·mL一,and1.140~45.60/lg·mL-。,
withbothcoefficients(r)of0.9999,respectively.Theaveragerecoverieswere98.98%,and99.59%,withboth
RSDs1essthan3%.ConclusionThismethodforthefirsttimesimultaneouslydeterminestheconcentrationsofpsor-
alenandisopsoraleninthesolutionofratsingle-passintestinalperfusion,anditissimple,sensitiveandaccurate
Keywords:psoralen;isopsoralen;ratsingle-passintestinalperfusion;RP-HPLC
作者简介:高缘,女,副教授,主要从事药物制剂新剂型研究,E-mail:newgaoyuan@163.com
295万方数据