HPIC法测定血清文拉法辛浓度
2005年9月
第17卷第9期
中国民康医学杂志
MedicalJournalofChinesePeoplegHealth
Sep,2005
V01.17No.9
【论 著】
HPIC法测定血清文拉法辛浓度
钟薇1,张石宁2
(1广东省广州市番禺区岐山医院,广东广州511483;2南京脑科医院研究所)
【摘要】 目的:建立用高效液相法(HPLC)测定血清中文拉法辛浓度的方法。方法:HPLC测定,流动相为甲醇:乙腈:水:1mol/L醋酸
铵:5mol/L氨水(350:50:100:5:1)的混合液体,pH8.7...
2005年9月
第17卷第9期
中国民康医学杂志
MedicalJournalofChinesePeoplegHealth
Sep,2005
V01.17No.9
【论 著】
HPIC法测定血清文拉法辛浓度
钟薇1,张石宁2
(1广东省广州市番禺区岐山医院,广东广州511483;2南京脑科医院研究所)
【摘要】 目的:建立用高效液相法(HPLC)测定血清中文拉法辛浓度的方法。方法:HPLC测定,流动相为甲醇:乙腈:水:1mol/L醋酸
铵:5mol/L氨水(350:50:100:5:1)的混合液体,pH8.7,流速1ml/min,ODScol柱,紫外检测波长229nm,以外标法定量。结果:线性范围25~
700ng·ml~,最低检测限2ng·ml~,平均提取回收率96.59%,日内和日间精密度平均分别为3.44%和3.77%。结论:用HPLC可以较好
的对血清中文拉法辛进行定性和定量。
【关键词】 高效液相;文拉法辛
[中图分类号】 R446.112 [文献标识码]A [文章编号]0369(2005)09—0499—02
ToestablishaHPLCassaymethodforthedeterminationof
VeIllafaxinelevelinhumanserum
ZHONGWeil,ZI-IANGShi—nin92
(1.QishanHospitalofGuangzhou,Panyu,Guangdong511483China;2.InstituteofNanjingBrainHospital)
【Abstract】Objective:ToestablishaHPLCassaymethodforthedeterminationofVenlafaxinelevelinhumanserum.Methods:
UsingamixtureliquidofAeetonitrile:Methanol:Water:Imol/L—AmmoniumAcetate:5mol/L—NH40H(50:350:100:5:1)asmobile
phase,pH8.7,flowspeedwaslml/min,ODScolumn,thewavelengthofdetectionwas229nm,Venlafaxinelevelwasdeterminedby
meansofexternalstandardmethod.Results:Alinearitywasobtainedfrom25~700ngom]一1ofVenlafaxinelevelinsernmwithagood
correlation(r=:0.998).Detectionlimitwas2ngoml~1.TheaverageextractionrecoveryWas96.59%.ThecoefficientsOfinter—day
andintra—dayvariationswere3.44%and3.77%respectively.Conclusions:UsingHPLCcandetectVenlafaxineinserumwell.
【Keywords】HPLC;Venlafaxine
文拉法辛(Venlafaxine)是近年在我国才正式应
用于临床的第二代非三环类抗抑郁药物,国内外研
究表明其能有效治疗抑郁症¨“j,由于在较大剂量
其同时作用于5羟色胺能和去甲肾上腺素能系统,
因此起效快疗效好聆、4、5]。但其治疗窗药物浓度,副
作用与药物浓度的关系,中毒浓度均不清楚,尤其是
在较高剂量时可能引起患者血压升高,限制了其在
临床的使用。为此我们建立了高效液相法测定血清
文拉法辛浓度的方法。为今后进一步研究奠定基
础。
1仪器和材料
1.1 仪器 美国沃特斯公司高效液相色谱仪
Breeze操作系统,2487双波长检测器,717自动进样
器。紫外检测器检测波长229Ilm,ODS柱,4ITlm×
25cm,颗粒度5斗m,淮阴汉邦公司生产。柱温箱温
度40度。
1.2试剂和血样文拉法辛标准品由成都大西南
制药股份有限公司提供。水为本所生产的双蒸水。
乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯。空白血清购自
收稿日期:2005一.03—15
广东省血站。病人血样本采自本院患者肘静脉血,
要求患者每天服用文拉法辛50mg一225mg(推荐治
疗剂量范围),持续一周。早晨服药前采血3ml,置
干试管分离血清备用。
1.3标准曲线的制备在空白血清中加入文拉法
辛标准品配制成浓度为25、50、100、200、300、500、
700ng/ml系列各取lml。加入0.5M硼酸钠O.5IIll
和正己烷(含1.5%异戊醇)3m1,震荡3min,3,000
r·min~,离心5min,充分吸取有机相置于一试管
内,80度水浴蒸干。残渣用200斗l甲醇溶解备用。
流动相为甲醇:乙腈:水:1mol/L醋酸铵:5mol/L氨
水(350:50:100:5:1)的混合液体,pH8.7。过滤脱
气后冲洗,流速1ml·min一。待基线平稳后进样
40出。以血清药物浓度对峰面积作标准曲线,求出
回归方程为A=1.03×103C+1.15×103。相关系
数0.998。线性范围25ng·ml~~700ng·ml~。
最低检出浓度2ng·ml。1(按信效比I>3计)。
2结果
2.1 回收率实验在空白血清中加入标准品(如表
1)制成标准血清,按2.1节方法处理测定峰面积,计
算回收率。平均提取回收率为(96.59±3.45)%,见
499
万方数据
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表1;平均方法回收率为(100.07±3.68)%,见表2。 表2平均方法回收率(n=5)
表1萃取回收率(n=5)
2.2精密度实验用空白血清配制标准血清(浓度
如表3),分别于同一日内和不同日间按2.I节方法
处理,测定浓度,计算出日内、13间精密度,见表3。
表3 日内。日间精密度(n=5)
加入浓度 日内 日间
l竖:型::2 型堡整廑f竖:型::2 堕旦l丝2 垩塑堕旦!丝2 型堡整廑(竖:熊::2 墅里I丝2 垩望堕旦!丝2
100 100.94±2.87 2.87 99.76±3.52 3.52
200 198.674-6.24 3.12 3.44 197.544-7.08 3.54 3.77
300 295.56土2.96 4.32 296.38-I-12.694.26
2.3血清药物浓度测定12名患者每天分别服用
文拉法辛50~225mg,连续1周后,早晨服药前取
肘静脉血3IIll,分离血清后,用上述方法进行定性、
定量。查明患者药物浓度为32~315ng·ml~。
3讨论
文拉法辛的最大紫外吸收值是229nm,在此短
波长区很多杂质紫外吸收度很大,容易对文拉法辛
的峰形成干扰,我们尝试用过乙醚、乙酸乙脂、正己
烷等几种抽提方法,发现只有正己烷能充分提取文
拉法辛,而且在文拉法辛峰开始前和结束后的1分
钟左右无干扰峰出现。由于正己烷与血清震荡混匀
时有部分样本会出现乳化的现象,影响了提取率,所
以我们在正己烷中加入少量异戊醇防止乳化的发
生。
文拉法辛的代谢主要是通过细胞色素P一450
酶的2D6和3A4进行,此两种酶均存在基因的多形
性,尤其是3A4的表达在不同人身上差异很大,文
拉法辛还能抑2D6的活性∞J,因此有可能患者服用
的药量虽小,而血清浓度却过大,因而引起较严重的
副作用;或者已达推荐剂量的上限而血药浓度并不
高,达不到很好地治疗效果。在我们测定的十几个
样本中,我们也发现患者血药浓度与剂量虽然大体
呈现相关,也有偏离度较大的个例。
500
目前常用的抗抑郁和抗精神病药物如阿米替
林,多虑平,氟西汀,舒必利,维思通,奥氮平,氟哌啶
醇,奋乃静,氯丙嗪,泰尔登,奎的平等在此色谱条件
下均不会对文拉法辛峰形成干扰,因此,此方法可以
用在联合用药时或在筛查服药自杀患者所用药物的
定性和定量上。
参考文献
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