胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇[优质文档]

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇[优质文档] 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成?4-胆甾烯酮和过氧化氢，HO在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那22 腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 【试剂】 1(胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) 50mmol/L GOOD's缓冲液(pH6.7) 胆固醇酯酶 ?200U/L 胆固醇氧化酶 ?100U/L 过氧化物酶 ?3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 5mmol/L 苯酚 2(胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg，用异丙醇配成100 ml溶液，分装后，4?保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC按下依次加样。 酶法测定TC操作步骤 项目 测定管 标准管 空白管 50 血清(μl) , , 50 标准液/定值血清(μl) , , 50 蒸馏水(μl) , , 1.50 1.50 1.50 酶试剂(μl) 混匀后，37?保温5 min，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】 测定管吸光度血清TC (mmol/L),×胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 【参考范围】 血清参考值:3.0,5.20 mmol/L;危险阈值:5.20,6.20 mmol/L;高胆固醇血症:?6.20 mmol/L。 【临床意义】 1(TC增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2(TC降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 【注意事项】 1(试剂中酶的质量影响测定结果。 2(若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3(检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK抗凝)。 2 【评价】 本方法线性范围为?19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析;既可作终点法检测，也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰;胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰;血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。