药物敏感试验

药物敏感试验 1无菌取疑似大肠杆菌病料，划线接种于伊红美蓝琼脂，37?培养24小时，观察细菌菌落形态。 2选择将病料接种伊红美兰琼脂后生长的紫黑色菌落分别接种营养肉汤各1管放37 ?培养 。 分别将大肠杆菌涂片，革兰氏(结晶紫1分，水洗:革兰氏碘液30秒，水洗:酒精30秒-1分，水洗:沙黄30秒- 1分，水洗)染色，显微镜(10*100倍)检查，致病性大肠杆菌为革兰氏阴性，中等大小杆菌。 3用灭菌棉签取适量营养肉汤生长的细菌，将其均匀密布于平皿。放置5-10min。 4、将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上，一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片(外周一般可贴4-5片，每种药敏片之间距离2cm)，每种药敏片的名称要记住。 5、将平皿培养基倒置放于37?温箱中培养24小时后，观察效果。 6结果观察 根据抑菌圈的大小，并根据药敏纸片提供的判定标准来判断细菌对药物的敏感程度:高敏、中敏、低敏和不敏感 二鸡新城疫的血凝试验-微量法 (一)材料 1、配制抗凝剂100Ml(5%柠檬酸钠)、生理盐水1000ml(0.9%Nacl). 2、用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定(每鸡5ml以上,加5%柠檬酸 钠1ml/5ml血) 。 3.洗血球:将上述血液加入刻度离心管中,加入生理盐水,平衡后对称放入离心机套管内，离 心机转速为每分钟2000转离心3分钟 ，每次离心后弃去上清液,共洗3,4次。洗去血浆及 白细胞。最后一次每分钟2000转5分钟,最后倾去上清。 4. 用生理盐水配成1%红血球备用(如红血球泥1ml加生理盐水99ml) 。 (二)血凝试验 取一个96孔板，按以下步骤操作: 1、待检抗原稀释:第一排1,11孔各加生理盐水25ul，于第一排第1孔中加入25ul新城疫 抗原，混匀后，取25ul至第2孔混匀，吸取25ul至第3孔,依次稀释至第11孔，弃去25ul， 倍比稀释，血清稀释度为2-1,2-11 (即1:2 ,1:2048) 。 2、向1,12孔各加生理盐水25ul 3、第一排1,12孔各加1%鸡红细胞25ul，微量震荡器震荡1,2分钟混匀混匀。 5、室温或37?静置30,60分钟，观察结果。 1、取液塑料咀不能混用。 2、除稀释待检抗原外，取液塑料咀不能侵入96孔板内液面。 3、96孔V型板应清洁。否则，用酒精棉球擦洗干净后，用清水洗净。 4、吸取红细胞时，应摇匀。 三鸡新城疫的血凝抑制试验-微量法 取一个96孔板，按以下步骤操作: 1、待检血清稀释:第一排1,10孔各加生理盐水25ul，于第一排第1孔中加入25ul待检血 清，混匀后，取25ul至第2孔混匀，吸取25ul至第3孔,依次稀释至第10孔，弃去25ul， 倍比稀释，血清稀释度为2-1,2-10。 2、第一排1,10孔各加4个单位血凝素25ul，微量震荡器震荡2分钟混匀; 3、室温静置20分钟; 4、第一排1,10孔各加1%鸡红细胞25ul，微量震荡器震荡1,2分钟混匀混匀。 5、室温或37?静置30,60分钟，观察结果。 6阳性对照:第11孔内分别加入25ul阳性血清+25ul 4单位病毒+25ul 1%鸡红细胞 7阴性对照:第12孔内分别加入25ul阴性血清+25ul 4单位病毒+25ul 1%鸡红细胞 注意事项 1、取液塑料咀不能混用。 2、除稀释待检血清外，取液塑料咀不能侵入96孔板内液面。 3、血清不能溶血; 4、96孔V型板应清洁。否则，用酒精棉球擦洗干净后，用清水洗净。 5、吸取红细胞时，应摇匀。 结果判定 以半凝集半沉淀稀孔抗体稀释释度为该血清的血凝抑制(HI)滴度。 鸡群HI滴度的高低在一定程度上反映了免疫保护水平的高低。 HI滴度在1:16的鸡群保护率约为50%;在1:16以下的非免疫鸡群约为10%，免疫鸡群约为40% ;HI滴度在1:64-1024的鸡群保护率达90%以上。 开产前鸡HI滴度在1:32-64，产蛋鸡HI滴度在1:64-256，并抗体效价均匀为免疫合格，否则重免。 最佳的首免时间应选择在母源抗体水平较低时进行。据有关资料介绍:雏鸡出壳后3天体内的新城疫抗体水平最高，以后每天下降10%左右。一般来说，当母源抗体HI值在4log2时进行首次免疫较合适。新城疫一般情况要用血凝抑制试验检测,,雏鸡的母源抗体，再推算出合适的首免日龄:首免日龄,,(,×(,日龄,，滴度,,)，,。一般对鸡群抽样时，采取,(,,的雏鸡样品来测,，的均值(每栋鸡舍不少于20只鸡)，平均监测,，?,:,,，就应免疫。如果没有条件测定雏鸡的母源抗体，可根据雏鸡母源抗体的大致消长规律和生产中积累的经验选择首免日龄，新城疫首免选择在7,9日龄新支二联苗滴鼻点眼，二免选择在20,25日龄新城疫Lasta苗饮水， 60天龄新城疫Lasta苗饮水，开产前用新支减三联苗注射，开产后每1-2个月用新城疫Lasta苗饮水1次。法氏囊疫苗14日龄首免，28日龄进行二免。在疾病的高发季节可适当增加免疫次数， 蛋(种)鸡参考免疫程序 1日龄 马立克氏病CVI988液氮疫苗FC-126 7日龄 新城疫-传支(H120)二联苗点眼滴鼻,禽流感灭活苗H5N1亚型注射，也可使用禽流感,新城疫重组二联活疫苗(rL-H5)进行初免 12日龄、法氏囊中毒疫苗滴囗 17日龄法氏囊中毒疫苗滴囗或饮水 25日龄鸡痘(-脑脊髓炎二联必要时)苗刺种(随季节不同适当调整) 30日龄新城疫(IV系)饮水 35日龄传支(H52)饮水 45日龄喉气管炎疫苗点眼(必要时)、(禽流感灭活苗注射 H5N1亚型发病严重季节 ) 60日龄新城疫(IV系饮水或1系注射) 100日龄 禽出败传鼻慢呼菌苗注射(必要时) 110日龄禽流感灭活苗注射H5N1亚型、鸡痘(-脑脊髓炎二联必要时)苗刺种 120日龄新城疫-传支.减蛋综合症油苗注射 130日龄 鸡法氏囊病(种)灭活苗注射 开产后每隔1~~2个月新城疫(IV系)饮水或40周龄新城疫油苗注射，每隔4,6个月用H5N1亚型禽流感灭活苗免疫一次