基质金属蛋白酶-1和8在根尖肉芽肿中的表达及意义

基质金属蛋白酶-1和8在根尖肉芽肿中的达及意义 基质金属蛋白酶-1和8在根尖肉芽肿中的表 达及意义 8 包头医学院 JOURNALOFBAOTOUMEDICALCOLLEGE 2011年第27卷第2期 V01.27No.2201l 基质金属蛋白酶一1和8在根尖肉芽肿中的表达及意义 白东升李利 (内蒙古医学院第四附属医院,内蒙古包头014030) 摘要目的:探讨基质金属蛋白酶一1(MMP一1)和8(MMP一8)的表达水平与根尖肉芽肿的关系及意义.方法: 采用免疫组化方法,检测了20例根尖肉芽肿和2O例正常根尖组织中MMP一1和MMP一8的表达水平,并用独立样本 t检验分析MMP一1和MMP一8的表达水平与根尖肉芽肿的关系.结果:MMP一1和MMP一8在根尖肉芽肿组织中均有 表达,且表达的阳性细胞数高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MMP一1和MMP一8可能参与了根尖 肉芽肿的发病过程. 关键词基质金属蛋白酶一1;基质金属蛋白酶一8;根尖肉芽肿;免疫组化 ExpressionandSignificanceofMMP——1andMMP——8inPeriapicalGranuloma BAIDongshen,LILi (TheFourthAffiliatedHospitalofInnerMongoliaMedicalCollege,Baotou014030,China) AbstractObjective:Toinvestigatetherelationshipsbetweentheexpressionofmatrixmetallo proteinase一1(MMP一1), matrixmetalloproteinase一8(MMP一8)andperiapicalgranuloma.Methods:lnanunohistochemistrywasusedtotesttheexpres— sionofMMP,1andMMP一8in20caseswithperiapicalgranulomaand20controlswithnormalperioapicaltissue.Anddat a wereanalyzedbyindependent—samplettesttodeterminetherelationshipsbetweentheexpressionofMMP一1,MMP一8and periapicalgranuloma.Results:MMP一1andMMP一8expressedinperiapicalgranuloma.andthepositivecellsofMMP一1and MMP一8inperiapiealgran~omaweresignificantlynlorethaninnormaltissues(P<0.05).Conclus ion:MMP一1andMMP一 8miightbeinvolvedinperiapicalgranuloma. KeywordsMMP一1;MMP一8;Periapiealgranuloma;Immunohistochemistry 根尖肉芽肿一般是指与死髓牙根尖区相连的炎性 肉芽组织.它可能是炎性牙髓或坏死牙髓感染扩散, 经根尖孔轻微缓慢刺激根尖周组织,表现以增生为主 的炎症.根尖肉芽肿是根尖周病变的主要类型,患者 多因牙齿变色,咀嚼乏力不适,疼痛,严重影响生活而 来就诊.基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases, MMPs)是一种依赖二价金属阳离子的内肽酶家族,通 过降解细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)参与多 种病理生理过程.目前发现,在根尖肉芽肿组织中 MMP一8超表达,提示MMP一8可能参与了根尖肉芽 肿的发病过程,并在骨破坏中发挥作用?J.在本研究 中,我们应用免疫组化方法检测了根尖肉芽肿中 MMP一1和MMP一8的表达情况,探讨MMP一1和 MMP一8与根尖肉芽肿的关系. 1材料与方法 1.1样本2008—2010年就诊于本科室,不愿意或 通讯作者:李利 无法进行根管治疗主动要求拔除的根尖肉芽肿患者, 将根尖肉芽肿随同患牙一起拔出的标本20例为肉芽 肿组;收集同一时间因正畸需要拔牙的成人患者,取其 拔除之正畸牙及牙周膜组织20例为对照组.根尖肉 芽肿的诊断为:(1)临床诊断:患牙有龋坏或牙冠 变色,叩诊不适,牙髓活力测试无反应,x线检查根尖 周有圆形或卵圆形密度降低区,直径<1IllHI,边界清 楚;(2)病理诊断:根尖周肉芽组织生成,牙槽骨破坏, 显微镜下观察肉芽组织内有大量炎症细胞浸润,淋巴 细胞,浆细胞,中性多形核白细胞,成纤维细胞增多,有 时见巨噬细胞,肉芽肿周围有纤维被膜包绕,被膜与牙 周膜相连.对照组为无龋坏无牙周病的牙周组织. 1.2免疫组化试剂盒购自Invitrogen公司(Cat. No.856743),操作步骤按试剂盒说明进行:(1)将常 规石蜡包埋组织切片脱蜡至水,抗原修复,PBS冲洗; (2)将切片放在0.3%H0中孵育30rain,PBS冲洗; (3)滴加试剂A(封闭用正常山羊血清工作液),室温 孵育120rain,然后滴加1:100稀释的一抗,阴性对照 第2期自东升,等.基质金属蛋白酶一1和8在根尖肉芽肿中的表达及意义9 以PBS代替一抗;(4)滴加试剂B(生物素化二抗工作 液),室温或37?孵育120min.0.03%PBST冲洗; (5)滴加试剂.C(辣根酶标记链霉卵白素工作液), 室温或37?孵育120min,0.03%PBST冲洗,0.1M Tris—HC1冲洗,DAB显色剂显色,0.03%PBST冲洗; (6)苏木素复染,脱水,透明,中性树脂封片. 1.3阳性结果判定显微镜下观察到的阳性染色,细 胞浆及核膜上呈棕色或褐色颗粒,反之则为阴性.镜 下用盲法观察,先在低倍镜下观察整张切片,然后在高 倍镜下每张切片选10个视野,每个视野计数100个细 胞,取各视野阳性表达细胞的平均值为阳性细胞值. 1.4数据处理用SPSS11.5软件包处理,实验数据 以均数?标准差(x?s)表示,组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义. 2结果 MMP一1和MMP一8在根尖肉芽肿组织中均有表 达,且表达的阳性细胞数高于正常根尖组织,差异具有 统计学意义(P<0.05),详见表1,图1,2. 表1正常根尖组织和根尖肉芽肿组织MMP一1和 MMP一8阳性细胞计数(x?s) :it与对照组相比.P<0.05 _-图1正常根尖组织和根尖肉芽肿 组织MMP一1免疫染色 左:正常根尖组织;右:根尖肉芽肿组织 __图2正常根尖组织和根尖肉芽肿 组织MMP一8免疫染色 左:常根尖组织;右:根尖肉芽肿组织 3讨论 本研究采用免疫组化的方法检测了MMP一1和 MMP一8在根尖肉芽肿中的表达水平.结果显示,根 尖肉芽肿组织表达MMP一1和MMP一8的阳性细胞 数量显着高于正常根尖组织,差异具有统计学意义 (P<0.05),提示MMP一1和MMP一8参与了根尖 肉芽肿的发病过程.以往的研究…发现根尖肉芽肿 中的MMP一8mRNA显着上调,我们的研究从蛋白质 水平也证实了根尖肉芽肿中MMP一8表达水平增加. 目前,随着对MMPs的广泛研究,MMPs在根尖周 炎的作用越来越被广大学者重视.虽然MMP一1和 MMP一8对根尖周炎作用的机制尚不清楚,但一些 MMPs抑制剂可以用于降低病理条件下的骨破坏和龋 病的进程J,动物实验也确定了MMPs的抑制剂复合 体可以显着降低水肿和:炎症组织的破坏,对治疗有益 处,提示对MMP一1和MMP一8的深入研究将为根尖 周病的诊断和治疗提供新的视角. 参考文献 [1]FreijeJM,BalbinM,Pend6sAM,eta1.Matrixmetalloprotei— nasesandtumorprogression[J].AdvExpMedBiol,2003, 532:9l一107. [2]VernilloAT,RifkinBR.Effectsoftetracyclinesonboneme— tabolism[J].AdvancesinDentalResearch,1998,12(2): 56—62. (收稿日期:2011—01—28)