盐酸托泊替康质量分析方法研究

盐酸托泊替康质量分析方法研究 盐酸托泊替康质量分析方法研究 第2O卷第1期 2011年3月 淮海工学院(自然科学版) . 1o0rna]ofHuaihaiInstituteofTechnology(NaturalScienceEdition) Vo1.20 Mar. NO.1 2Oll DO1:10.3969/i.issn.1672—6685.20l1.O1.015 盐酸托泊替康质量分析方法研究 周健,蒋锋 (南京恒远科技开发有限公司,江苏南京210037) 摘要:对盐酸托泊替康的有关物质,含量测定两个项目进行研究.采用HPLC,使用Cs柱,流动 相为体积分数0.59/5三乙胺溶液和质量分数0.0432的十二炕基硫酸钠(用磷酸调节pH4.0)一甲 醇(50:50),波长267nm.结果显示,本品在0.008,0.072mg/mL范围内线性关系良好,回归方 程为A一272671p—l653.2(,.一0.999,7z一5),平均回收率不低于99.2,与降解产物和中间品有 较好的分离,溶液8h内稳定,故可知所建立的分析方法专属性强,灵敏度高,测定结果准确可靠, 适用于盐酸托泊替康的质量控制. 关键词:盐酸托泊替康;质量控制;HPLC 中图分类号:TQ46O.72文献标识码:A文章编号:1672—6685(2011)01—0055—03 MethodsfortheQualityControlofTopotecanHydrochloride ZHOUJian,JIANGFeng (NanjingHengyuanTechnologyCo.,Ltd.?Naming210037,China) Abstract:Relatedsubstanceandcontentsoftopotecanhydrochloridewerestudied.Thesepara— tionwasperformedintheC18column,andthemobilephaseconsistedof0.5triethylamineand 0.0432sodiumdodecylsulfate(adjustedthesolutionwithphosphoricacidtopH4.0)一 metha— nOl(50:50)withthedetectionwavelengthof267nm.Thecalibrationcurveswerelinearinthe rangesof0.008~0.072mg/mL,andtheaveragerecoverieswerenotlessthan99.2%.Topote— canhydrOChlorideandrelatedsubstancescouldbeseparatedwel1.Sampleswerestablein8hrs. ThemethodswereprovedtobeaccurateandreliablewithhighselectivitY,sensitivityandrepro— ducibility,andweresuitableforthequalitycontroloftopotecanhydrochloride. Keywords:topotecanhydrochloride;qualitycontrol;HPLC 盐酸托泊替康是半合成喜树碱衍生物,是一种 具有抑制托泊异构酶I活性作用的抗肿瘤药物.托 泊异构酶I可诱导DNA单链可逆性断裂,使DNA 螺旋链松解,可与托泊异构酶I—DNA复合物结合 并阻止这些单股断链的重新连接,其细胞毒作用是 在DNA的合成中,是S期细胞周期特异性药物. 托泊替康自合成以来的研究发现,对卵巢癌有很好 的疗效,尤其是对顺铂耐药的卵巢癌病人.该品首 先由葛兰素史克制药公司于1996年在美国上市,也 是世界上第一个作用于托泊异构酶I的抗肿瘤药 物,商品名"和美新",被批准用于卵巢癌和小细胞肺 癌的治疗口.j. 参照原国家H和文献[3]色谱条件进行试 验,发现本品主成分峰与前后杂质不能达到基线分 离,峰拖尾严重.本试验添加十二烷烷基硫酸钠作 为离子对试剂,使产品和杂质能够很好地分离,该法 收稿日期:2010-05,27;修订日期:2011-01-24 作者简介:周健(1981一),男,江苏宜兴人,南京恒远科技开发有限公司助理工程师, 主要从事药品研发工作,(E—nail)jiangfeng106@S na.corn 56淮海工学院(自然科学版)2011年3月 操作简单,快速准确,且灵敏度高,经验证,能准确可靠地检测盐酸托泊替康的有关物质和含量. 1仪器,试剂与试药 SartoriusBT一25S型电子分析天平,日本岛津 公司LC一20AT型高效液相色谱仪. 甲醇为色谱纯(默克),三乙胺为分析纯,十二烷 基硫酸钠为分析纯,水为纯化水. 盐酸托泊替康3批样品来源:南京恒远科技开 发有限公司(批号为101101,101102,1011"03).对 照品来源:国外进口(批号l19413—54—6). 2有关物质 2.1色谱条件 色谱柱为Cl.柱,流动相为体积分数0.5%三乙 胺溶液和质量分数0.0432的十二烷基硫酸钠(用 磷酸调节pH4.O)一甲醇(5O:50),波长267nm,流速 1.0_【r7min 2.2测定方法 取本品适量,用流动相溶解并稀释制成500g/ l0o > 趔 50 mL的供试品溶液,精密量取适量,加流动相稀释成 5p.g/mL的溶液,作为对照溶液.精密量取对照溶 液2OL,注入液相色谱仪,记录色谱图至主峰保留 时间的3倍,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,单 杂不得过0.1,总杂不得过1.09/6. 2.3破坏性试验 精密称取本品50mg置于100mL量瓶中,并 用流动相溶解,分别在强光((4500?500)Ix),高温 (沸水浴),酸破坏(0.1mol/L盐酸溶液10mL),碱 破坏(O.1mol/L氢氧化钠溶液10mL)和氧化破坏 (体积分数3O过氧化氢1mL)等几种条件下,放 置2h后,按"2.2"项下方法进行测定.结果表明, 本品在光照,酸破坏条件下稳定,在高温,氧化,碱破 坏条件下不稳定,各降解产物峰均能与主峰较好地 分离. 2.4与中间体化合物的分离 盐酸托泊替康合成过程中的中间体为喜树碱氧 化物,1O一羟基喜树碱.取各步中间体化合物约lO mg与盐酸托泊替康约50mg,置同一100mL量瓶 中,用流动相溶解,按"2.2"项下方法测定,试验结果 见图1,本品与工艺中的各步中间体化合物均能较 好地分离. 143l2' 3'.8877 . 01245312-'-I1D:6.70118 . .60122. . 44528.32838.0 . 393'…g.1 O5lOl52O 时间,min 35 (盐酸托泊替康,10一羟基喜树碱,喜树碱氧化物的保留时间分别为14.3,22.4和 26.3min) 图l样品与中闻体的分离 Fig.1Solutionofsampleandintermediate 2.5检测限和定量限 精密称取本品25mg,置50mL量瓶中,用流动 相逐级稀释,按"2.2"项下方法测定.主峰峰高为噪 音的3倍和lO倍作为检测限和定量限,经计算本品 的检测限为0.3ng,定量限为0.8ng. 2.6溶液放置稳定性 取供试品溶液制备后分别于0,2,4,6和8h进 样,测定有关物质的量,结果显示盐酸托泊替康溶液 8h内稳定,总杂RSD为1.1. 2.7有关物质测定 取本品3批,按"2.2"项下方法测定,计算总杂 和单杂.总杂分别为0.35,0.32%和0.41,均 小于1.0,单杂分别为0.08%,0.069/6和0.07%, 均小于0.1. 3含量测定 色谱条件见"2.1"项下. 第l期周健等:盐酸托泊替康质量分析方法研究 3.1测定方法 取本品适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制 成40~g/mL的溶液,精密量取2OL注入液相色 谱仪,记录色谱图;另取盐酸托泊替康对照品适量, 同法测定,按外标法以峰面积计算含量. 3.2线性关系 精密称取盐酸托泊替康对照品20mg置50mL 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精 密制成质量浓度为0.008,0.024,0.040,0.056和 0.072mg/mL的溶液,分别取2O肚L注入液相色谱 仪,记录色谱图.以质量浓度(p)为横坐标,盐酸托 泊替康峰面积(A)为纵坐标,计算线性回归,并绘制 标准曲线,回归方程为A:==272671p一1653.2(,-一 0.999,一5),线性范围为0.008,0.072mg/mL, 线性关系良好. 3.3进样精密度 取"3.2"项下0.04mg/mL溶液,连续进样6 次,计算主峰峰面积,RSD为0.05. 3.4重复性试验 取本品适量,精密称定,用流动相溶解并稀释制 成40gg/mL的供试品溶液各6份,照"3.1"项下方 法操作,测定含量,计算精密度,RSD为0.12%. 3.5回收率试验 取盐酸托泊替康适量,配制质量浓度的8O9/6, 100,120的溶液各3份,照"3.1"项下方法测定, 按外标法以峰面积计算,平均回收率为99.29/6, RSD为0.64(一9). 3.6含量测定 取本品3批,按"3.1"项下方法测定,本品3批 质量分数结果分别为99.8,99.2和99.4. 4结论 (1)波长的选择.取含量测定项下的溶液,在 200,300nm范围测定吸光度,发现本品在223,267 nm的波长处有最大吸收,考虑到223nnl接近甲醇 末端吸收,故选择267nm作为检测波长. (2)流动相选择.按原国标和文献上的分析方 法,产品和杂质不能达到基线分离,主峰拖尾,本实 验方法中添加了十二烷基硫酸钠,增加了样品中阳 离子的保留时间,同时调整了有机相的比例,使产品 与降解产物及中间品均达到基线分离,色谱峰对称 性更好. (3)本文对盐酸托泊替康的含量和有关物质两 个项目进行了研究和方法学验证,试验结果表明,所 建立的分析方法专属性强,灵敏度高,测定结果准 确,可靠,适用于盐酸托泊替康原料药的质量控制. 参考文献: [1]李语如.顾萍.韦艳丽.等.RP—HPLC法测定盐酸托泊 替康及制剂含量和有关物质[J].中国药学杂志,2005. 25(7):813—8l6. [2]张学军,袁玉.注射用盐酸托泊替康与常用注射液的配 伍稳定性[J].西北药学杂志,2009,24(1):56—57. E3]戴建国,赵俊,赵小伟,等.注射用盐酸托泊替康的质量 分析方法研究EJ].中国新药杂志,2003,12(8):638— 64O. [4]国家食品药品监督管理局.国家食品药品标准WS1一 (x一362)一2003ZES].成都永康制药有限公司,2OlO. E53国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二 部)[M].北京:化学工业出版社,2005:附录61-65. E6]刘玮玮,赵跃强,许瑞波,等.抗肿瘤新药伊立替康的合 成和应用进展[J].淮海工学院:自然科学版, 2005,14(4):42—45. [7]李新玲,李炳源.高效液相色谱法检测玻璃体中的谷氨 酸研究[J].南通大学:医学版,2006,26(4):272— 273. E83蒋锋,周健.徐国想.碘褪色光度法间接测定空气中的 甲醛含量EJ].淮海工学院:自然科学版,2010,19 (2):52—54. (责任编辑:秦海明,褚金红)