骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响_cropped

骨形成蛋白4对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响_cropped ?基础研究?骨形成蛋白 > 对大鼠牙乳头细胞生物学行为的影响 #"" 惠光艳贾文敏李鑫 "(济南军区青岛第一疗养院口腔科，山东青岛 !##"?A; #山东省口腔医院牙体病科，山东济南 W"""") ! 摘 要目的 观 察 骨 形 成 蛋 白 ()对 体 外 培 养 的 大 鼠 牙 乳 头 细 胞 增 殖 及 分 化 的 影 响 ，为 探 讨@B >7*%> 在牙胚发生发育中的调控作用奠定基础。方法 体外培养胚胎 的大鼠牙乳头细胞，利用 7%> A$ PP *,*法和测定细胞内碱性磷酸酶含量检测 对大鼠牙乳头细胞增殖及分化的影响。结果 能抑制 7*%> 7*%> 牙乳头细胞的增殖，并能促进细胞分泌碱性磷酸酶()。结论 具有抑制大鼠牙乳头细胞增 Z0A7%> !""* 殖，并促进牙乳头细胞成熟分化的调控作用。 牙乳头细胞细胞生物学@关键词B 骨形成蛋白 > 中图分类号@B $>$ [@文献标识码B L "# $%&’(#%)# *& +*%# *-"*#%#0$) -*0#$% 1 *% +$*’*$)2’ +#"23$*- *& 4#%20’ 2$’’2 )#’’56 7% !,././.. #8.#-$,#%20’ 50(49 \R] SG’8:5F’84 )]L ^+85/<84 O] _<80 J+9;0 2‘ J+8; E7*%>= 28 9&23<‘+&’;<28 / ’8, ,<‘‘+&+8;<’;<28 2‘ ,+8;’3 9’9<33’ (+3 3 2‘ &’; ’8, +e932&+ ;.+ &23+ 2‘ 7*%> <8 &+:G3’;<28 2‘ ;22;. :+&/H +d+329+8;0>#0"*45 J+8;3 99<33 (+33H +e;&(;+ ‘&2 &; +c&F2 :+ A$ FH +&+ (G3;G&+ <8 ,/’’’’,/’/’,,’f,d<;&20P.+ 9&23<‘+&’;<28 ’8, ,<‘‘+&+8;<’;<28 +‘‘+(;H 2‘ 7*%> 28 ;.+ (+33H f+&+ +e’<8+, cF *PP +;.2, // 2G3 H<8<‘<8;3F <8 99<33 (+33H 9&23<‘+&;<28 8 H; 93FH 8 <92&;8; ’’’’,/’’’!*’’/’&+G3;<28 &23+ <8 <8、#、? 在牙胚的发育过程中都有不同程度的*!@AB终浓度均为 A""R V /3。利用上皮细胞和间充质细胞

表

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达。本研究检测了 7*%> 对体外培养的牙乳头 对胰酶的耐受时间不一致来纯化牙乳头间充质细 细胞增殖、分化的影响，旨在探讨 7*%> 对牙齿发 胞。培养 W代后用于实验 。 育的调控作用模式。 A 材料和方法 A0> 牙乳头间充细胞的来源鉴定 制备原代培养 细胞第 > 代细胞甩片，L7C 免疫组化法进行波形丝 蛋白、角蛋白、第因子单抗的免疫组化染色，鉴定 !A0A 仪器、试剂及动物 CD孵箱、酶联免疫检测 ! 细胞来源。 仪、倒置显微镜和 照 相 系 统ED3F/9GH，)’9’8=;I# 孔 A0W 牙乳头间充质细胞生长特性观察、制备细胞玻 细胞培养板、K 细胞培养基、波形丝蛋白、角蛋 J**片 鉴定过的第 W代细胞传代后 ，以 !0W: V O 胰酶消 白、第 因子抗体均为日本 JLMD 公司产品E 工作 !> 化后调整细胞浓度至 !XA"V /3 接种于 !> 孔细胞培 浓度 ANA""=;碱性磷酸酶 (LO%H+)、PP 试剂盒; ’*养板中，每孔 33，每 >Y 取 $ 孔，胰酶消化后用计 ./7*%>EQ<:/’，RQL=。实验动物为 QJ 系大鼠。 A0! 牙乳头间充质细胞的原代培养、纯化和传代 数板计数，取平均值，连续观察 78，绘制生长曲线， , 计算倍增时间。 70# *99 法检测细胞增殖 对数生长期的第 8 代 细胞设置实验组和空白对照组，实验组培养基中加 入浓度为 7"":; < 3 的 =*%>。两组细胞分别以 !? / > 7的密度接种于 @# 孔板，每孔 73，每组 > 孔，"""! 图 ! 大鼠牙乳头间充质细胞生长曲线 培养 $, 后，每孔加 *99 液 !"!3，继续培养 >,，弃去 培养液，每孔加入 78"3 二甲基亚枫ABCDE，震荡 !* 8/F:。酶联仪波长 >@":/ 测各孔吸光度值AG 值E，结 B9Q>TAE。 大鼠牙乳头细胞倍增时间为:.果进行统计学

分析

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。 0$ 99 检测结果 实验组、对照组的 DB 值分别 !* 为 0H#U0H、08$U07，经 ! 检验处理显示实验 """""""!70H 细胞 G%J+ 测定 对数生长期的第 8 代细胞 I’ > 组细胞的增殖较对照组明显受到抑制(V"0"7)。 "以 !?7"的密度接种于 @# 孔板，每孔 7""!3，待细 0> 细胞中碱性磷酸酶(G%J+)活性 实验组、对 !I’胞贴壁生长满孔底后，弃原孔内培养液，无血清培 照组的 G%J+ 活性 DB 值分别为 07@U07、0$TU I’"""!"养 液 洗 $ 次 。 实 验 组 加 入 浓 度 为 7"":; < /3 的 07，经统计学 ! 检验表明实验组中加 =%> 后能 ""!* =%>。同时设对照组。每组 7 孔，

标准

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环境下培养*"明显促进细胞分泌碱性磷酸酶的活性(V"0"7)。 "8, 终止，%=C 液洗 $ 次，每孔加入 8"!3 "07K9&FL2: $ 讨 论 M57""，>N中过夜。次日观察无细胞结构后，每孔加 牙乳头细胞是牙胚发育不可缺少的间充质细 入 7""!3 新配置的底色反应剂。$HN下孵育 $"/F: 胞群，在牙齿发育的过程中，它将形成除成釉质以 后加入 323 < 的 6DO 8"3 终止反应。酶联免疫 /I ’! 外的其它牙齿结构，随着它的生长分化将演变成为 检测仪 >7" 处测定各孔 DB 值，取平均值，统计 :/ 成牙本质细胞和牙髓细胞。在牙胚发育早期，间充 学处理。 质细胞的凝聚过程中，就有 =%、=%> 的表达， *!* 结 果! 但 =% W6G 出现时间相对较晚，而 =%> 在早 *!/* 期牙上皮就有表达，参与了牙胚的早期发育过程中 07 细胞来源鉴定 牙乳头间充质细胞组织块培!XY!牙胚位置及形态的发生。实验胚胎学的组织重组 养法培养 $, 后，细胞开始从组织块周围游出，至第 ALFJJZ+ &+(2[F:’LF2:E实验

证明

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，在胚胎 7708, 时，将 /8 天游出的细胞数逐渐增多，细胞呈长梭状，胞体丰 牙上皮与非牙齿的间充质组织重组后，能发育形成 满，伸展良好，胞核呈圆或卵圆形，位于细胞中央， 牙齿的结构，因而，此时牙齿发育的潜能位于牙上 具有 !P$ 个突起(图 7)。原代培养的第 > 代牙乳头 皮中。而到了胚胎 708 时牙齿发育的潜能则转移 !,间充质细胞第因子及细胞角蛋白染色阴性，抗波 " 到牙胚组织的间充质中，此时将牙上皮与其它间充 形丝蛋白染色阳性，说明所获细胞均为牙乳头间充 质组织重组不能形成牙齿的结构。而牙间充质与非 质细胞。 牙上皮重组则能诱导该上皮发育形成牙齿的结构。 X$Y =*%> 的表达模式正好与这一过程相吻合 。胚胎 7708 时 =%> 在牙上皮中表达，而到了胚胎 7$ ,*, 时 =%> 则在间充质中表达，因此 =%> 很可能是 ** 牙齿发育中的一个关键的形态发生信号分子，诱导 了牙胚的发生。以往对 =% 在牙胚发育及诱导细 *! 胞分化方面的研究较多，而少见 =%> 的相关报 * 道。 图 7 原代培养 $ 后细胞从组织块中游出，并逐渐增多(>?) ,"" 目前对 =%> 最新的研究证实它还具有诱导细 * 胞分化的作用。如诱导神经板至神经系统发育成熟 0 !!细胞生长状况、生长曲线、倍增时间传代后的不同时期，能够促进神经干细胞分化为多巴胺神 第 $ 天纲胞数开始回升，进入对数生长期，细胞生 长曲线呈“C”型A图 E。细胞倍增时间由以下公式计 ! X>Y算: 。经元。诱导骨折区域间充质细胞向成骨细胞分化 在本研究中发现 =%> 能抑制牙乳头细胞的增殖， *B9QAL5LE32;! < A32;6L532;6"E R" LS 培养起始时间;L:培养终止时间;6L:培养终 "并能提高细胞碱性磷酸酶的活性，说明 =%> 也具 *止细胞数;6":培养起始细胞数。根据上述公式得出 有诱导牙乳头细胞分化的作用。提示 =%> 不仅在 * +9+?A &2?+A9C 9 CH +9+C J&A9 &22? B2&?A290 )2J&93 2B :(I’,*:,:’’/ 牙齿发育早期调控牙胚始基的发生，更具有诱导牙 D+9?’3 L+C+’&(. E,K’9(+C4 !""$4 M!N$O7ST! 乳头细胞成熟分化的功能，预示它在牙齿发育全过 =’R’?’ *)4 8JUAA =0F29+ /2&I.2:+9+?A( I&2?+A9 G AC A9K 23K+, A9 $ 程中可能起的重要作用。 (JCI B2&/’?A29 A9 /23’& ?22?. :+&/ 2B /A(+0QJ&2I+’9 )2J&9’3 2B 参考文献 V&3 WA+9+4 ，77NO:77G ’((!""!"!7 8+9: );4 <.’9: )4 =’9 >4+? ’30@,+9?ABA(’?A29 2B (AC5D6E &+:A29C =’&’ L4E W=4<.’9: P4+? ’30E9?’:29ACA?( CA:9’3C R+?X++9 F*%G / G (29?&233A9: F*%G +HI&+CCA29 ,J&A9: ?22?. /2&I.2:+9+CAC A9 KAK20 9 8Y8M +BA9+ ?+ +H&+CCA29 2B 8A?H3 9 %A?H A9 2JC+ ’,,.I’,!/2J&93 2B D+9?3 +C+& EK9+C44M7N7O:# )’’L’(.,’(!""!?22?5B2&A9 93+0 D+K+32+9? FA232Z4 ，7TNO:$$ .:’’:I:!"""!!!//PCA&2 =4=J+& C 4=+C+3BB @0QH&+CCA29 2B R29+ 2&25 ! ’/’.//*.I/I.[收稿日期:!""\57"57$] [本文编辑:韩仲琪 王庆法] ?基础研究? 心血康抗血管内皮细胞凋亡的实验研究 " # " " 孙惠文梁绪国潘其兴张梅 "(山东大学齐鲁医院心血管内科，山东济南 !\""7!; #烟台市毓璜顶医院保健科，山东烟台 #G""7) ! 摘 要目的 采用血管紧张素诱导血管内皮细胞凋亡，探讨心血康对其所致内皮细胞凋亡 的[] NE9O:!! 作用。方法 在原代培养的人脐静脉内皮细胞()中，给予不同浓度的心血康作用 后，再予 ^_1QC!. ‘ 作用 诱导内皮细胞凋亡，采用透射电镜技术、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术等方法检测凋亡内 E9:7M. ! 皮细胞的超微结构、梯形图和凋亡峰百分率。结果 经 作用过的血管内皮细胞透射电镜下可 D6E E9:! 见凋亡小体;与 诱导组相比，经 琼脂糖凝胶电泳有显著变化，的梯状图谱消失，消失程度 E9:D6E D6E ! 与心血康的浓度有关，浓度越大消失愈明显;流式细胞术显示 直方图上 峰左侧的凋亡峰明显降 D6E Y7 低，凋亡百分率与诱导组相比，具有显著性差异()。结论 心血康有抑制 诱导的血管内皮细 a"0"E9:!\!胞凋亡的作用。 流式细胞术内皮细胞凋亡[关键词] 心血康 D6E 琼脂糖凝胶电泳 文献标识码[] E [中图分类号] L$!b0!\ "# $%&’(#%)*&"#+’ $*&*/’/ 0*+# *1 2’%2#3$%45 6% #7#0’#%&$+ /&)8 W_6 ^JA5X+94c@E6Y !,-..,.-, >d5:J24%’9 ;A5HA9:4+? ’30 D+I’&?+9? 2B ’&,A232:Z4;A3J ^2CIA?’34W.’9,29: _9AK+&CA?Z4)A9’9 !\""7!4.A9’ /‘‘96:/&0$;&< =:>#;&’?# @9,J(A9: ’I2I?2?A( +HI+&A/+9?’3 /2,+3 A9 +9,2?.+3A’3 (+33C RZ ’ 9:A2?+9CA9!NE9: O ?2 C?JZ +BB+(? 2B >A9HJ+e9: 29 ?AC 2?2CAC0@#&"*)/ >A9HJ+e9: ? ABB+&+9? (29(+9?&?A29 XC ,’.’II’’,’’! IJ? A9 (J3?J&+, .J/’9 J/RA3A(’3 K+A9 +9,2?.+3A’3 (+33C &+CI+(?AK+3Z A9 KA?&2 B2& ?X2 .2J&C0 E9, ?.+94 E9: X’C ’,,+, ?2 R+ A 9(JR’?+, B2& 7M .2J&C0=.+ A(&2C?&J(?J&+4D6E 3’,,+& ’9, ’I2I?2?A( &’?+ 2B ! / ，2?2?A +33C X+&+ 2RC+&K+ RZ ?&9CACCA29 +3+?&29 A&2C2+&2C+ +3 +3+?&22&+CAC 9 B32X ’II((,’(((I’:’:(I.’,// (Z?2/+?+&0A#/,+&/ =.+ ’I2I?2?A( R2,Z A9 ^_1Q‘C A9,J(+, RZ E 9: ! X’C C.2X+, J9,+& ?&’9C/ACCA29 +3+(?&29 /A(&2C(2I+0 ‘2/I’&+, XA?. ?.+ :&2JI A9,J(+, RZE 9:@@4 ?.+ ,AC’II+’&’9(+ 2B D6E 3’,,+& X’C (29BA&/+, X+9 >A9HJ+e9: XC + ?2 ?+ &+(?A29 CZC?+ 2B +92?+3AJ 2?2CAC0 =+ 3+K+3 2B .’’’,,,.’/,./’II.D6E AC+&9+ XC CC2A?+ XA? ?+ 29+9?&?A29 2B >A9HJ+e9 A9 ?+ &+?A29 CZC?+0 =+ ,’II’’(’’(’,..((’’:.’(./A+& 29+9?&?A29 2B >A9HJ+e9 XC4?+ 2&+ +KA+9? AC+&9+ 2B D6E XC0 =+ 2?2?A +e .:.((’’:’.,,’II’’(’.’II(I’/ A9 ?.+ 3+B? 2B Y7 I+’e ,+(3A9+, 2RKA2JC3Z RZ B3 2X (Z?2+?+&02I’&+, XA?. ?.+ :&2JI 2B E9: 4 ?.+ /‘/!ABB+&+9(+ AC CA:9 ABA(9? N a"0"O0B*%;+/’*% >A9HJ+e9: C 9 RA3A?Z ?2 A9ARA? ?+ 2?2CAC 2B ,’!\,’.’’’..’II+92?+3AJ A9J+ RZ E 90 ,.,(,:/! 9#8 C0< >A9HJ+e9 Q92?+3A3 +33C 2?2CAC E&2C+ +3 +3+?&22&+CAC 832X Z?2+?+& 3*)/’:,.’(’II:’:(I.(/ []! 细胞凋亡可发生于各组织细胞，对细胞的正常，同时还血管内皮细胞呈浓度依赖性促进其凋亡分化成熟和发育具有重要的调节意义。实验研究表 能增加内皮细胞或内膜的通透性，促进动脉粥样硬 [$]明，血管内皮细胞凋亡具有促凝作用，能促发和加 化的形成。 [7]重动脉粥样硬化病变。血管紧张素(E9:)对于 !!地奥心血康是由我国特有的药用植物中提取